Гексокиназа

В качестве сопрягающих ферментов часто используют дегидроге-назы и их коферменты в окисленной или восстановленной форме. Например, активность гексокиназы определяют в системе, содержащей дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Скорость восстановления НАДФ соответствует скорости гексокиназной реакции. Иногда используют системы двойного или тройного сопряжения, однако конечным звеном такой системы является соответствующая дегидрогеназа (например, при определении активности фосфофруктокиназы, креатин-киназы). При определении активности в сопряженной системе следует учитывать ряд условий. [c.208]

Определение активности гексокиназы [c.216]

Активность гексокиназы определяют энзиматическим методом. В качестве сопрягающего фермента в реакционную среду добавляют дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Ферментативную реакцию [c.216]

Определение активности гексокиназы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося в ходе реакции Г-6-Ф. Метод основан на использовании сопряженной де-гидрогеназной реакции согласно схеме (с. 41). За ходом реакции следят на спектрофотометре по увеличению оптической плотности при 340 нм в результате восстановления НАДФ+. Показания прибора регистрируют каждые 30 с в течение 3 мин. [c.376]

Выделение гексокиназы из пекарских дрожжей [c.217]

Гексокиназа катализирует перенос фосфорильного остатка АТФ на a-D-глюкозу с образованием а- >-глюкозо-6-фосфата реакция [c.216]

Указанные положения составляют основу современной концепции адсорбционного механизма регуляции активности ферментов в клетке, в том числе и гексокиназы тканей млекопитающих. [c.374]

Концентрацию АТФ измеряют в сопряженной энзиматической системе с гексокиназой и дегидрогеназой глюкозо-6-фосфата по количеству образующегося НАДФН по следующей схеме [c.294]

ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ ГЕКСОКИНАЗЫ ПРИ СВЯЗЫВАНИИ [c.373]

Адсорбционный механизм регуляции активности гексокиназы скелетной мышцы (И изозим гексокиназы) реализуется в повышении каталитической эффективности фермента вследствие нековалентной иммобилизации на митохондриальных мембранах. Связанная форма фермента по сравнению со свободной обладает большим числом оборотов, повышенным сродством к субстрату глюкозе и менее чувствительна к ингибирующему действию продукта реакции глюкозо-6-фосфата. Связь фермента с наружной митохондриальной мембраной осуществляется преимущественно с участием фосфолипидного компонента мембран и регулируется внутриклеточными метаболитами. Так, Mg + и глюкоза являются адсорбирующими фермент реагентами, АТФ и глюкозо-6-фос-фат (Г-6-Ф) солюбилизируют фермент, контролируя тем самым соотношение разных по каталитической эффективности форм фермента [c.374]

Степень адсорбции гексокиназы определяют, сравнивая активности фермента в среде инкубации до и после контакта с мембранами [c.376]

Об активации гексокиназы при адсорбции судят, сравнивая активность фермента, обнаруженного в мембранном препарате, с убылью исходной активности после иммобилизации [c.376]

Исследуют рН-зависимость активности связанной и свободной форм гексокиназы в диапазоне изменений pH 7,0—8,5. Поскольку прочность связи фермента с мембранами уменьшается при закислении среды, иммобилизацию фермента в данной серии экспериментов проводят при pH 7,0 содержание фермента в пробе составляет 5 инт. ед. [c.377]

Первая стадия брожения состоит в том, что из гексозодифосфата под влиянием фермента гексокиназы , ( альдолазы ), который может быть выделен в кристаллическом виде, образуются две молекулы три-сзофосфата, а именно фосфат диоксиацетона и фосфат глицеринового альдегида. [c.120]

Гексилен 59, 63 н-Гексиловый спи )т 114, 141 Гекситы 405, 406, 427 Гексогеи 212 Гексозодифосфат 324 Гексозы 414, 424, 425, 431, 440, 441 Гексокиназа 120, 123 Гексоповая кислота 427 Tf-лактон 427 Гелиантин 605 [c.1166]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе. ДЭАЭ-целлюлозу подготавливают в соответствии с инструкцией (с. 109), заполняют колонку (3x25 см) и уравновешивают буфером (реактив № 2). Наносят раствор белка и проводят элюцию в линейном градиенте того же буфера, содержащего О—0,3 М КС1. Скорость элюции — 90 мл/ч. Собирают фракции по 9 мл, определяют в них содержание белка и ферментативную активность. Фракции, в которых обнаружена активность гексокиназы, объединяют и проводят повторную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. Для этого подготавливают колонку размером 1,4X15 см. Белок элюируют буфером (реактив 2) (около 200 мл), содержащим О—0,3 М КС1. Скорость элюции — 35 мл/ч. Собирают фракции по [c.218]

Гексокиназа (10 М) Фосфорилаза (10 М) Алкогольдегидрогеназа (5-10-Щ) Креатинкиназа (310 М) Глюкоза (3- Ю М) 1 АТФ (210-3 М) 1 Глюкоэо-1-фосфат (2-Ю ЗД) ( Гликоген (10 б М) / НАД (4 10- М) Этанол (4-10-2 М) / Креатин (2-10 2 м) АТФ (4-10-3 М) >1010 >1011 >5-10 >101 [c.6]

Например, для гексокиназы из сердца свиньи наиболее подходящим для синтеза аффинного сорбента оказался красный моно-хлортрпазиповый краситель Pro ion brilliant red H-8BN . Его [c.421]

В спектрофотометрическую кювету вносят следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 50 мМ трис-НС1, pH 7,2 1,0 мМ АДФ 30—10 мМ Мд(СНзСОО)г 2 мМ глюкозу 0,25 мМ НАДФ гексокиназу 0,5 ед/мл дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата 0,5 ед/мл, креатинкиназу. Следят за изменением оптической плотности если из- [c.294]

Гексокиназа (АТФ 0-гексозо-6-фосфотрансфераза, КФ 2.7.1.1) катализирует реакцию трансфосфорилирования между Mg—АТФ и гек-созами с образованием фосфорных эфиров гексоз и Mg—АДф [c.374]

Открывая первый этап в метаболизме глюкозы —ее фосфорилирование, гексокиназная реакция занимает ключевое положение по отношению к важнейшим путям обмена углеводов гликолизу, биосинтезу гликогена и пентозофосфатному пути. Реализация функции ключевого фермента во многом зависит от способности гексокиназы к взаимодействию с митохондриальными мембранами. [c.374]

В задаче исследуется взаимодействие изозима I гексокиназы скелетных мышц крысы с искусственной фосфолипидной мембраной (леци-тиновые липосомы), имитирующее поведение фермента при иммобилизации на биологической мембране. [c.374]

Получение растворимой клеточной фракции скелетных мыищ крысы. Все процедуры по получению препаратов гексокиназы проводят при 0°С. [c.374]

Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлюлозы из расчета 1 мл фракции — 5—10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ K I (объем равен половине исходного объема растворимой клеточной фракции). Затем гексокиназу элюируют 200 мМ КС1, приготовленным на К-фосфатном буфере. В целях концентрирования препарата гексокиназы объем элюирующего раствора уменьшен в 3 ра за по отношению к исходному объему растворимой клеточной фракции После 10-минутной инкубации элюат отделяют на воронке Бюхнера [c.375]

Адсорбция гексокиназы на фосфолипидных мембранах (липосомах). Адсорбцию (иммобилизацию) гексокиназы на липосомах проводят суспендированием препарата липосом (3 мг лецитина) в 1 мЛ раствора фермента, содержащего различные количества единиц используемого фермента, а также 15 мМ МдСЬ или 5 мМ глюкозу в качестве адсорбирующих реагентов. Контрольная проба адсорбирующих реагентов не содержит. После 30-минутной инкубации при 0° С мембраны, содержащие адсорбированную гексокиназу, отделяют центрифугированием при 100 ООО я в течение 1 ч и суспендируюг в среде инкубации. Препарат иммобилизованной гексокиназы используют для изучения свойств в день получения. [c.376]

Расчет активности фермента проводят на основании величин начальной скорости реакции при условии наличия прямой пропорциональной зависимости скорости от количества ферментного препарата в пробе. Скорость гексокиназы выражают в микромолях восстановленного НАДФ+ в мин. [c.376]

Получают препарат II изозима гексокиназы из растворимой клеточной фракции скелетных мышц крысы. После определения белка микробиуретовым методом оценивают удельную активность фермента, а также степень очистки. При этом учитывают, что на долю II изозима гексокиназы приходится 60% от общего содержания фермента в растворимой клеточной фракции скелетных мышц. [c.376]

Поскольку кроме II изозима гексокиназа скелетных мышц содержит в больших количествах I изозим фермента (до 40%), проводят идентификацию изозимного состава полученного препарата гексокиназы. В качестве критерия при этом используют значение Кт по глюкозе, соответственно равное для I и II изозимов 5-10-5 jj (13—2,4) Х ХЮ М. С этой целью исследуют зависимость скорости реакции от концентрации глюкозы в диапазоне 3-10 — 5-10 М, используя насыщающую (8-10 М) и полунасыщающую (У-Ю М) концентрацию АТФ. В работе используют препараты гексокиназы с высоким содержанием II изозима фермента, для которых характерно значение Кт по глюкозе не ниже 1,8-10 М. [c.377]

Изучают влияние 15 мМ Mg b и 5 мМ глюкозы на способности гексокиназы связываться с липосомами. С этой целью сопоставляют активность гексокиназы, связанной с липосомами в присутствии и в отсутствие указанных реагентов. Исходная активность фермента в этих экспериментах составляет 0,25 инт. ед. Оценивают степень активации гексокиназы при иммобилизации на мембранах. [c.377]

Проводят сравнительное исследование зависимости скорости реакции от концентрации глюкозы для связанной с липосомами и сво- бодйой форм фермента в диапазоне концентраций субстрата 3-10 — S-IO М. Различными графическими методами оценивают значения Кт по глюкозе. Препарат связанной гексокиназы получают в присутствии в среде для иммобилизации 15 мМ Mg b и 5 инт. ед. гексокиназы. [c.377]

Основы неорганической химии для студентов нехимических специальностей (1989) -- [ c.323 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.110 , c.118 ]

Общая органическая химия Т.10 (1986) -- [ c.222 , c.517 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.270 , c.322 , c.326 , c.328 , c.333 , c.335 , c.359 , c.552 , c.653 ]

Химия углеводов (1967) -- [ c.366 , c.367 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.110 , c.118 ]

Биохимия (2004) -- [ c.88 , c.241 , c.244 ]

Органическая химия (1963) -- [ c.248 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.268 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.121 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.203 , c.204 , c.230 , c.238 , c.254 , c.255 , c.447 ]

Успехи стереохимии (1961) -- [ c.621 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.89 , c.280 , c.282 ]

Биохимия растений (1968) -- [ c.112 , c.125 ]

Кинетические методы в биохимическихисследованиях (1982) -- [ c.174 ]

Технология спирта Издание 3 (1960) -- [ c.248 ]

Химия и биология белков (1953) -- [ c.289 , c.305 , c.306 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.98 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.662 , c.672 , c.681 ]

Курс органической и биологической химии (1952) -- [ c.385 , c.388 ]

Катализ в химии и энзимологии (1972) -- [ c.23 , c.228 , c.230 , c.231 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 1 (1961) -- [ c.0 ]

Курс физиологии растений Издание 3 (1971) -- [ c.258 ]

Молекулярная генетика (1974) -- [ c.61 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.7 , c.78 , c.78 , c.161 , c.170 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.64 , c.69 , c.115 , c.182 , c.183 , c.185 , c.189 , c.197 , c.207 , c.209 , c.215 , c.222 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.64 , c.69 , c.115 , c.182 , c.183 , c.185 , c.189 , c.197 , c.207 , c.209 , c.215 , c.222 ]

Биологические мембраны Структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами (2000) -- [ c.83 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.286 , c.287 ]

Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.117 ]

Биофизическая химия Т.1 (1984) -- [ c.98 , c.130 ]

Физиология растений Изд.3 (1988) -- [ c.247 ]

Эволюция без отбора Автоэволюция формы и функции (1981) -- [ c.113 ]

Эволюция без отбора (1981) -- [ c.113 ]

Иммуноферментный анализ (1988) -- [ c.21 , c.169 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.59 ]

Биохимия мембран Биоэнергетика Мембранные преобразователи энергии (1989) -- [ c.27 , c.140 , c.195 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.226 , c.260 , c.457 , c.463 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.124 , c.337 , c.338 ]

Физиология растений (1980) -- [ c.158 , c.198 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.24 , c.307 , c.319 , c.335 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.33 , c.91 , c.97 , c.253 , c.408 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.18 , c.28 , c.29 , c.38 , c.43 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология