Генотипирование III

Для решения этой задачи проводят генотипирование членов семей с определенным генетическим заболеванием по полиморфным маркерам, которые, по данным картирования, находятся на том же плече хромосомы, что и ген заболевания. Используют те же подходы, что и при вычислении двухточечного лод-балла при анализе [c.460]

Генетическая дактилоскопия и генотипирование [c.265]

За редким исключением, эти технические приемы представляют собой надежные методы для генотипирования реассортантных вирусов, полученных в лаборатории. Однако при анализе вирусов, выделенных в естественных условиях, получаемые данные обычно не столь убедительны. Поскольку родительские штаммы точно неизвестны, имеется возможность только определить, какой прототипный вирус содержит сегмент РНК, наиболее близкий определенному сегменту реассортантного вируса. [c.298]

Генотипирование с использованием флуоресцентно меченных ПЦР-праймеров Колориметрическое генотипирование основано на применении ПЦР-праймеров, меченных различными флуоресцентными красителями. Чтобы различить мутантную ДНК и ДНК дикого типа, проводят ПЦР с двумя разными праймерами. Один из них (Р1) комплементарен ДНК дикого типа и на 5 -конце помечен родамином (красный цвет), другой (РЗ) комплементарен мутантной ДНК и на 5 -конце помечен флуо-ресцеином (зеленый цвет) (рис. 9.11). В обоих случаях амплификацию проводят в присутствии третьего, немеченного праймера (Р2), комплементарного противоположной цепи. Поскольку ПЦР может идти только в том случае, когда праймер полностью комплементарен ДНК-ми-шени, в присутствии в реакционной смеси всех трех праймеров будет амплифицироваться либо ДНК дикого типа, либо мутантная ДНК, либо обе они, в зависимости от ДНК-мишени, играющей роль матрицы. Если индивид гомозиготен по ДНК дикого типа, то после проведения ПЦР и удаления лишних праймеров будет наблюдаться флуоресценция красного цвета, если он гомозиготен по мутантной ДНК - зеленого, а если присутствуют и мутантная ДНК, и ДНК дикого [c.198]

Для анализа сцепления прежде всего берут пробы крови у членов нескольких семей, пред-ставленньгх двумя-тремя поколениями, либо у членов одной большой семьи, представленной несколькими поколениями, с данным генетическим заболеванием (при этом необходимо проинформировать всех испытуемых о целях анализа и получить их согласие). Клетки крови культивируют, что позволяет постоянно получать ДНК для дальнейших процедур без повторного забора крови. Проводят генотипирование ДНК каждого индивида по нескольким поли- [c.456]

Генотипирование (Genotyping) Определение всех аллелей всех локусов данной хромосомы. [c.546]

Количества ДНК, выделенной из 1 мл крови, более чем достаточно для генотипирования методами ПЦР-анализа, и, как правило, можно ограничиться даже меньшим количеством биологического образца (табл. 1). ДНК, необходимая для проведения ПЦР-анализа, может быть выде- [c.39]

Во второй системе у реассортантных вирусов, полученных после смешанной инфекции, вызванной родительскими вирусами с хорошо различимыми фенотипами, определяли происхождение каждого сегмента РНК с последующим изучением в соответствующей клеточной системе с целью определения сегмента (или сег-.ментов) РНК вирулентного родительского вируса, обусловливающего вирулентность. Методы, используемые для генотипирования реассортантных вирусов, более детально описаны в главе 4, вклЮ чая сравнение родительских и реассортантных вирусов в отношении нескольких параметров — характера миграции РНК в ПААГ [37] белкового спектра, выявляемого в ПААГ [38] олигонуклеотидного строения отдельных сегментов РНК [64] прямой молекулярной гибридизации кРНК с меченными радиоактивными веществами отдельными сегментами вирионной РНК [45] и конкурентной гибридизации, при которой сегменты РНК исследуемых вирусов использовали для конкуренции при связывании меченой вРНК и кРНК [6]. [c.298]

Предпринимались также попытки идентифицировать гены, связанные с вирулентностью для человека у реассортантов, полученных из вирусов дикого типа, обнаруженных в смывах из зева, и из аттенуированных лабораторных штаммов. Однако результаты этих опытов очень трудно интерпретировать из-за недостаточного числа обследованных добровольцев и изученных реассортантов, а также вследствие нестабильности генетического фона хозяев и различий в предшествующих иммунологических реакциях на другие вирусы гриппа. По этим причинам трудно выявить связь вирулентности с определенными генами или их комбинациями. Так, вирус Х31, все гены которого происходят из вируса A/PR/8 [4] и который невирулентен для человека, аттенуировался лишь частично. В то же время другие реассортантные вирусы H3N2, имеющие различные комбинации генов вируса A/PR/8, были либо полностью аттенуированы, либо вирулентны [7]. Подобно этому опыты на добровольцах с генотипированными реас- [c.308]

Необходимость диагностики наследственных аномалий метаболизма лекарств более чем очевидна, поскольку это позволит избежать многих осложнений или случаев неэффективности лечения. В настояшее время на основе сведений о геноме человека созданы высокоразрешаюшие методы для распознавания мутаций в генах, которые обеспечивают метаболизм лекарств. Следовательно, стратегия лекарственного лечения в новом тысячелетии будет включать генотипирование пациентов перед началом терапии. [c.244]

Внутривидовая идентификация и эпидемиологическое маркирование (при необходимости) серотипирование биотипирование фаготипирование колицинотипирование генотипирование Определение токсигенности (вирулентности) [c.31]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология