также Рестрикционная карта

Комбинируя методы концевой метки и неполного расщепления, можно определить расположение всех фрагментов, полученных под действием одной рестриктазы. Сочетая этот метод с методом перекрывающихся фрагментов, а также используя несколько рестриктаз, можно быть уверенным, что построенная рестрикционная карта включает всю ДНК и ни один из мелких фрагментов не потерян. [c.46]

Рис. 4-61. Простой пример, иллюстрирующий взаимное расположение на двойной спирали ДНК участков узнавания для различных рестрицирующих нуклеаз (именуемых также сайтами рестрикции ), совокупность которых образует рестрикционную карту Заключение фермент А расщепляет вблизи одного из концов молекулы. Фермент Б должен расщеплять вблизи того же конца либо вблизи другого конца. Размеры фрагментов, образующихся при расщеплении 2 ферментами исключают первое предположение и позволяют установить порядок сайтов рестрикции, указанный ниже

Существуют чисто экспериментальные методы поиска гомологий нуклеотидных последовательностей.Наиболее распространенными являются подходы, основанные на гибридизации молекул нуклеиновых кислот и дальнейшем анализе дуплексов тем или иным методом. Пр7, анализе протяженных гомологий применяют также сопоставление рестрикционных (физ/ческих) карт соответствующих фрагментов ДНК. й в том, и в другом случае нет необходимости определять последовательность оснований в сравниваемых молекулах. Рассмотрение соответствующих методик не является предметом настоящей книги. [c.12]

Клонирование ряда генов человека позволило обнаружить полиморфизм по этим генам на основе использования рестрикционного анализа хромосомной ДНК. Различающиеся фрагменты ДНК, соответствующие данному гену или его участкам, выявляются при помощи электрофореза рестриктов и последующей гибридизации их с радиоактивным зондом — клонированным участком ДНК, по которому изучают полиморфизм. Такие зонды используют также для локализации генов непосредственно на препаратах хромосом. Объединение этого подхода с методом дифференциальной окраски дает возможность привязывать конкретные гены к участкам конкретных хромосом. Объединение генеалогического метода с цитогенетическим, а также с новейшими методами генной инженерии значительно ускорило процедуру картирования генов у человека. Карты хромосом человека представлены на рис. 20.9. [c.507]

Располагая такой информацией, можно локализовать на ДНК биологически важные участки. Так, например, показано, что репликация вируса SV 40 всегда начинается в одном специфическом Hind Ш-фрагменте и продолжается в обоих направлениях. Рестрикционные карты и рестрикционные фрагменты были также использованы для картирования участков ДНК, на которых синтезируются мРНК для вирусных белков. [c.32]

Как получают физические карты Стандартная биохимическая процедура - электрофорез - позволяет (с некоторой точностью) определить длины рестрикционных фрагментов, однако для построения физической карты требуется также знать порядок расположения этих фрагментов. Так, например, для фага SM Pseudomonas aeruginosa, имеющего всего 3 сайта узнавания рестриктазы HindiII,возможны 24 различных варианта расположения фрагментов, некоторые из них представлены на рис.5.2. В начале 70-х годов возникла идея восстановления порядка расположения фрагментов на физической карте, основанная на использовании данных о совместной рестрикции по двум рестриктазам. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология