Метод концевого анализа

Наиболее быстрым и удобным методом определения молекулярных весов является метод, основанный на определении функциональных концевых групп. Этот метод наиболее эффективен для линейных конденсационных полимеров, молекулярный вес которых обычно ниже 20 ООО. Для определения молекулярного веса методом концевых групп необходимо точно установить химическую природу полимера и его концевых групп. Однако метод определения молекулярного веса анализом концевых групп в значительной степени применим только к линейным полимерам, синтезированным из бифункциональных мономеров для таких полимеров существует простое соотношение между числом концевых групп и числом молекул. Если каждая молекула имеет по одной функциональной [c.173]

Введение Эдманом [129] фенилизотиоцианата как реагента для определения К-концевых групп позволило последовательно отщеплять от полипептидной цепи по одному аминокислотному остатку, начиная с конца, содержащего свободную а-аминогруппу. Метод концевого анализа Эдмана [c.153]

При изучении небольших пептидов подходящим методом аминокислотного анализа, например с помощью автоматического аминокислотного анализатора, можно достаточно определенно установить состав пептида, лишенного своей концевой группы. Проследив за изменением аминокислотного состава на последовательных этапах деградации, можно восстановить аминокислотную последовательность изучаемого пептида. [c.283]

Обычно принято считать, что пределы применимости метода концевых групп определяются точностью методов химического анализа. Однако основной источник ошибок кроется не в этом, ибо современные методы анализа (метод меченых атомов, спектральные методы, фото- [c.255]

В некоторых случаях на концах полимерной молекулы находятся определенные функциональные группы, количество которых можно определить химическим анализом. Это часто имеет место в случае конденсационных полимеров, например полиамидов или полиэфиров. Поскольку при помощи этого метода определяется число концевых групп на единицу веса полимера, он дает значения (гл. 7). Естественно, что концентрация таких концевых групп очень мала и чувствительность этого метода, как и других коллигативных методов, падает по мере увеличения М . Для определения конденсационных полимеров не очень высокого молекулярного веса метод концевых групп является, пожалуй, наилучшим. [c.15]

Экспериментальными методами, аналогичными анализу концевых групп и измерению осмотического давления, определяется число молекул, так как каждая молекула оказывает один и тот же эффект независимо от ее размера. Молекулярный вес, полученный этими методами, называется среднечисловым Мц и определяется выражением [c.101]

После химической модификации и выделения концевого олигонуклеотида выбор метода структурного анализа определяется, по-видимому, как личными склонностями исследователя, так и химическими свойствами олигонуклеотида. [c.135]

Хроматография производных аминокислот получила интенсивное развитие в связи с разработкой методов определения первичной структуры белков. Вероятно, трудно найти в органической химии и биохимии более удачный пример столь тесной взаимосвязи развития представлений о структуре и функциях большого класса веществ, каким являются белки, с хроматографическими методами анализа. Основное внимание было направлено на разработку методов определения N-концевых остатков аминокислот в белках, причем в идентификации соответствующих производных большое значение имели тонкослойная (ТСХ) и бумажная хроматография (БХ) (см. обзоры [1, 2]). Газожидкостная и жидкостная колоночная хроматографии находят в этой области ограниченное применение, однако интерес к последнему методу постепенно растет. Интерес к жидкостной хроматографий вызван вполне определенными причинами. Во-первых, постоянно появляются новые методы избирательной модификации остатков аминокислот в белках, а идентификация производных аминокислот требует развития хроматографических методов. Во-вторых, исследованию подвергают все более труднодоступные белки, что в свою очередь вызывает необходимость создания надежных методов количественного анализа. Интерес к колоночной хроматографии возрастает также в связи с выделением и получением необычных аминокислот, а также в связи с необходимостью предотвращения ошибок при определении аминокислотной последовательности. Понятия современный и классический метод используют здесь условно, поскольку новые методики обычно создают на базе стандартной аппаратуры примером может служить автоматический анализ ДНФ- и ДНС-аминокис-лот [3, 4]. Насколько известно, до сих пор не пытались использовать скоростную хроматографию высокого разрешения для разделения производных аминокислот, хотя некоторые соединения, например ДНС-аминокислоты, являются для этого метода довольно удобным объектом. Производные аминокислот использовали в структурном анализе белков крайне неравномерно. По-видимому, всеобщее увлечение ДНФ-аминокислотами проходит окончательно, уступая место повышенному интересу [c.360]

Один из методов Ы-концевого анализа, развитый Зангером, включает реакцию нуклеофильной ЫНг-группы с 2,4-динитро- [c.268]

Это, однако, встречает ряд возражений и во многих случаях не подтверждается. С. Н. Ушаковым было установлено, что поливиниловые спирты не содержат концевых альдегидных групп, а имеют на конце остатки инициатора, что хорошо согласуется с наличием некоторого количества групп а-гликоля, могущих образоваться при смыкании двух растущих цепей поливинилацетата. Новейшие исследования поливинилового спирта методом спектрального анализа доказывают наличие в тем до 0,4 мол. % карбонильных групп, повидимому, кетонных [c.284]

Следы мономера в полимерах можно обнаружить, например, физикохимическими методами или анализом концевых групп. Количественное определение содержания мономера в полимере можно произвести по методу сушки вымораживанием Льюиса и Майо [84], описанному в разделе П-2. Летучие вещества улавливают, и содержание мономера определяют соот- [c.10]

Наибольшие трудности возникают при определении молекулярного веса высших олигосахаридов. К этим соединениям еще не применимы методы химии полимеров, а методы определения молекулярного веса, применяемые для низкомолекулярных соединений, дают в этом случае значительную ошибку. Наиболее перспективны методы концевого анализа. Так, например, количественное определение восстанавливающей способности позволяет вычислить молекулярный вес восстанавливающие плиго-сахаридов с удовлетворительной точностью . [c.431]

При легком окислении тиосульфат-ионов образуются политионат-ион ы— производные политионовых кислот общей формулы (для изученных кислот п не превышает 6). В молекулах этих кислот две концевые сульфогруппы —50зН соединены друг с другом либо непосредственно (дитионовая кислота), либо зигзагообразной цепочкой из атомов серы. Один из методов количественного анализа— иодомет-рия — основан на реакции, в которой образуется тетратиоиат натрия [c.248]

Теперь задача сводилась к концевому анализу каждого пятна. Фрагменты гидролизовали РНКазой Т1 прямо на пластинке (2— 4 мкл раствора фермента прикапывали в центр пятна, закрывали парафильмом, прижимали его стеклом и инкубировали в течение ночи). Затем пятно вырезали, материал переносили в угол нластпнки силикагеля (прижимали двумя магнитиками) и вместе со свидетелями — смесью холодных нуклеозидтриспиртов — фракционировали двумерной распределительной ТСХ. Элюцию вели в первом направлении смесью ацетонитрил—трет-амиловый спирт—аммиак (2 1 1), во втором —mjDem-амиловый спирт—метилэтилкетои—вода (3 6 1,2). Пятна свидетелей вырезали под УФ-светом и просчитывали в них радиоактивность. Таким образом идентифицировали один за другим все нуклеотиды с 5 -конца, начиная со второго 5 -концевой нуклеотид определяли отдельно известными методами. [c.506]

Критерий чистоты Б.-гомогенность прн электрофорезе, хроматографии и ультрацентрнфугированни. Одноцепочечный Б. должен быть гомогенным прн N- и С-концевом анализе (см. ниже). Примесь сопутствующих ферментов определяют с помощью спецнфич. субстратов высокую чувствительность имеют иммунохим. методы (обычно до 10 мкг/мл примесного антигена) [c.250]

Хотя методами рентгеноструктурного анализа е удается непосредственно определить положение атомов водорода, так как они очень слабо рассеивают рентгеновские лучи, тем не менее расположение атомов соседних молекул близи азота концевой аминогруппы свидетельствует о наличии цвиттерионной структуры у аминокислот и пептидов в кристаллах, т. е. о наличии концевой заряженной грулпы ЫНз+ и соответственно СОО . Как было показано, азот концевой аминогруппы имеет тетраэдрическую конфигурацию. [c.538]

Определены первичные структуры многочисленных анормальных гемоглобинов человека некоторые из них изучены методом рентгеноструктурного анализа, что сделало возможным объяснение патологических следствий генетических ошибок на молекулярном уровне. Серповидная анемия, названная так вследствие того, что эритроциты пациентов при низких значениях р(02) сплющиваются, приобретая форму серпа, является причиной смерти примерно 80 000 детей ежегодно. Анормальный гемоглобин ИЬЗ содержит в р-цепи Уа1-6 вместо 01и-6. Деоксигенированная форма НЬ8, по-видимому, агрегирует с образованием нерастворимого полимера. Один из предложенных методов лечения анемии заключается во введении низких концентраций цианат-иона, что, как полагают, вызывает карбомоилирование аминогруппы Л -концевых остатков валина-1 в а- и р-цепях. Первый из этих остатков участвует в межцепочечном взаимодействии в дезоксигемоглобине, а второй образует электростатическую связь с 2,3-дифосфоглицератом. Кар-бамоилирование предотвращает оба типа взаимодействий, способствуя тем самым сдвигу в сторону конформации оксигемоглобина и уменьшению риска агрегирования. [c.559]

Деградацию по Эдману можно комбинировать с дансильным методом. При этом после отщепления концевого остатка определяют N-конец оставшегося пептида и воспроизводят последовательность, основываясь на данных.N-концевого анализа. [c.283]

Химические методы установления молекулярной массы. Эти методы основаны на определении доли концевых групп в макромолекуле путем химического анализа (метод концевых групп). Например, полиа,мид, полученный из двухосновной кислоты и диамина, содержит на концах цепи свободные аминогруппы или группы —СООН, которые можно титровать кислотой или щелочью. Опре-деле1ше молекулярной массы в этом случае сводится к нахождению эквивалента. Если карбоксильная группа находится только на одном конце цепи и на титрование навески А г расходуется В г NaOH, [c.544]

Принципиальным успехом в развитии тонкослойной хроматографии явилось применение этого метода для анализа высокополимеров. В 1968 г. первые исследования по ТСХ статистических полимеров выполнены Б. Г. Беленьким и Э. С. Ганкиной [1] и Инагаки с сотр. [2]. С тех пор основным направлением исследований по ТСХ полимеров стало использование этого метода для изучения полидисперсности полимеров (композиционной неоднородности, ММР) и идентификации (диагностики) полимеров различной микроструктуры [3—51. Используя ТСХ, удалось разделить статистические сополимеры по составу, идентифицировать статистические, блок- и альтернирующие сополимеры, диагностировать и разделить двух- и трехблочные сополимеры, разделить блок- и привитые сополимеры и сопутствующие им гомополимеры, идентифицировать и разделить стереорегулярные ПММА и ПС различной микротактичности, разделить геометрические изомеры ПБД и ПИ, идентифицировать линейные и разветвленные ПС, а также ПС с различными концевыми группами и отделить их от монофункционального и бифункционального ПС. Многочисленные исследования по ТСХ полимеров посвящены определению ММР гомополимеров, оценке М статистических сополимеров, определению ММР и функциональности олигомеров. [c.278]

Карбоксипептидазы А и В образуются при гидролизе трипсином соответствующих прокарбоксипептидазных предшественников, синтезируемых в поджелудочной железе [187J. Из этих двух ферментов более подробно изучена карбоксипептидаза А, и проведено ее детальное исследование методом рентгеноструктурного анализа [29, 188, 189]. Карбоксипептидаза А быка (КПА) представляет собой фермент, содержащий 307 аминокислот в единственной полипептидной цепи, которая прочно связывает 1 г-ион Zn(II) на 1 моль фермента. Необходимость Zn(ll) для ферментативной активности была впервые продемонстрирована тем, что КПА, свободная от иона металла, неактивна, но активность восстанавливается при добавлении Zn(II) [190, 191]. По-видимому, фермент, не содержащий металла, в основном сохраняет структурные свойства активной КПА [191]. Позже на основе данных рентгеноструктурного анализа [29] было четко установлено, что роль иона Zn(ll) при гидролизе пептидов заключается в связывании субстрата. При протеолизе фермент проявляет стереохимическую специфичность, отщепляя С-конце-вую аминокислоту от пептидной цепи только в том случае, если С-концевая карбоксильная группа свободна и если аминокислота имеет L-конфигурацию [192, 193]. Обычно наблюдается более высокая активность, если остаток С-концевой аминокислоты содержит ароматическую группу или разветвленную цепь [194]. [c.76]

Для некоторых линейных полимеров можно химическим анализом определить число концевых групп и таким образом узнать среднечисловой молекулярный вес Общее число концевых групп всех типов равно удвоенному числу молекул полимера. Если каждая молекула имеет по одной функциональной концевой группе, то число таких концевых групп равно числу молекул. Такова простая теоретическая основа определения среднечислового молекулярного веса методом анализа концевых групп. Данный метод имеет то преимущество, что он является прямым и не требует калибрования при помощи какого-нибудь другого метода. Его применимость, за небольшими исключениями, ограничена линейными полимерами. Успеш ное применение метода концевых групп требует надежного знания природы этих групп и возможности точного количественного их определения. Прежде чем перейти к описанию методов анализа, необходимо рассмотреть те типы полимеров, которые, повидимому, удовлетворяют указанным требованиям. [c.272]

Применимость метода определения молекулярного веса анализом концевых групп в значительной степени ограничена линейными полимерами, синтезированными из бифункциональных мономеров для таких полимеров существует простое соотношение между числом концевых групп и числом молекул. Участие в поликонденсации мономеров с тремя функциональными группировками или большим их числом обычно приводит к образованию разветвленных или сшитых полимеров, молекулы которых имеют различное число концевых групп, зависящее от числа функциональных групп в молекулах мономеров и концентрации образовавшихся поперечных связей. Молекулярный вес таких полимеров невозможно определить методом концевых групп. Интересным исключением из этого правила являются вещества, принадлежащие к классу полимеров, названных Флори [1] многоценными в отличйе от более обычных разветвленных полимеров. Многоценные полимеры образуются при конденсации ю-оксикислоты с небольшим количеством поли- [c.274]

Метод концевых групп можно применять не только для определения молекулярного веса. Он дает возможность также установить степень разветвленности полимеров. Выше было указано, что такие полимеры, как, например, образующийся при поликонденсации дикарбоновой кислоты, диамина и трикарбоновой кислоты в качестве разветвляющего агента, имеют молекулы с различным числом трифункцио-нальных звеньев и, следовательно, с различным числом концевых групп. Определение общего содержания концевых групп химическим анализом и измерение среднечислового молекулярного веса при помощи, например, осмометрии позволяют рассчитать среднее число концевых групп, приходящееся на одну молекулу, что является мерой степени разветвленности. Флори [2] и другие авторы разработали строгий способ описания структуры нелинейных конденсационных полимеров этого типа на основе рассмотрения соотношения между величиной коэффициента разветвления (определяемого как вероятность того, что один узел разветвления связан с другим), с одной стороны, и состава мономерной смеси и той доли р всех карбоксильных групп, [c.275]

Применение метода концевых групп для получения сведений относительно размера молекул не ограничивается синтетическими полимерами. Одним из первых объектов исследования этим методом явилась натуральная целлюлоза [3, 4 ] определение концевых групп целлюлозы продолжает и в настоящее время привлекать большое внимание 15, 6]. Метод анализа концевых групп мог быть использован для исследования данного полимера лишь после того, как было установлено, что целлюлоза является полиангидро-глюкозой со связями в положении 1,4 [c.276]

Теперь задача сведена к исследованию поочередно всех пептидов ферментативного гидролизата. Для этого сначала делаем аминокислотный анализ фрагментов, а затем пускаем в ход метод концевых групп Сэнгера или Эдмана. Короткие пептиды (до пентапентидов) расшифровываются сравнительно легко. Метод концевых групп может быть применен многократно и последовательно, т. е. после гидролитического отш епления меченного реагентом конца, можно действовать снова и метить следуюгцее звено с N-кoнцa пептидной цепочки. Можно также использовать карбоксипептидазу для отш епления С-конца. Комбинация этих методов позволяет однозначно расшифровать короткие пептиды за сравнительно небольшой срок. [c.27]

Полимеры, полученные из 1,2-диоксиматов металлов, являются неплавкими соединениями. За температуру разложения полимера (табл. 1-2) принята температура начала изменения цвета вещества. Плавления или заметного разложения этих полимеров не наблюдалось. Методом рентгеноструктурного анализа исследована кристалличность некоторых таких полимеров. Низкий молекулярный вес, возможно, обусловлен способностью лигандов [уравнение (У1-8)] к образованию циклических мономеров или димеров. Это предположение подтверждается ИК-спектроскопическим анализом концевых оксимных групп и низкими молекулярными весами, определенными эбуллиоскопически [57]. [c.162]

Все металлсодержащие полимеры на основе бис (тиопиколинами-дов) представляют собой окрашенные и нерастворимые вещества. Молекулярный вес приблизительно равен 15 ООО [20 ], но, по данным измерения радиоактивности полимеров, содержащих в концевых группах радиоактивные изотопы, он достигает 30 000—40 ООО [281. Методом рентгеноструктурного анализа показано, что большинство таких полимеров имеет аморфную структуру. Полимеры исследованы также методом термогравиметрического анализа наибольшую термическ то стабильность [20] проявляют производные гп(П). Для некоторых полимеров этого ряда определены различные физико-химические свойства [26, 27, 32, 35], оценено удельное электрическое сопротивление [33, 34] и исследована химическая стойкость [32]. Изучение спектров ЭПР некоторых полимеров при различных температурах свидетельствует о неоднородности их структуры [12]. Установлено, что для 100%-ного комилексообразования необходим донолнительный прогрев полимеров. Структура этих материалов исследовалась с помощью спектров диффузного рассеяния [29]. [c.222]

В работе [1013] метод суммарного фракционирования применяли к полимерам с узким молекулярно-массовым распределением, для которых М /Жп< 1,12 рассчитан параметр фракционирования. Для полистирола, полученного анионной полимеризацией, с Ми = 97 ООО величина полидисперсности, оцененная этим методом, составляет 1,02. Для исследования явления вспенивания в замещенных полистиролах был использован [1014] метод химического анализа с электронным сканированием. При изучении фотодеструкции пленок полистирола для обнаружения эмиссии фенилалкилкетонных концевых групп применялась [1015] низкотемпературная поляризованная фосфоресценция. [c.246]

Число лабораторий, занимающихся установлением первичной структуры нуклеиновых кислот, быстро растет. В случае РНК это во многом обусловлено обнадеживающими достижениями в установлении полной первичной структуры пятнадцати тРНК, двух 55 РНК и ряда внутренних и концевых участков вирусных и рибосомных РНК . В свою очередь эти достижения были бы невозможны без создания целого ряда высокочувствительных и надежных методик. Для многих исследователей работа по выяснению структуры нуклеиновых кислот является лишь частью другой проблемы, например синтеза или биохимической эволюции белков и нуклеиновых кислот. Стараясь удовлетворить разнообразные интересы, я попытался включить в книгу экспериментальные детали различных методов структурного анализа, а также описать некоторые потенциально интересные методики, которые по какой-либо причине не использовались. Надо надеяться, что включение этих методик будет стимулировать как их применение, так и дальнейшее усовершенствование. [c.14]

При исследовании каротиноидов и разработке метода их анализа был установлен ряд закономерностей относительно смещения полос поглощения при введении в полиено-вую систему заместителей или новых хромофоров. Можно считать, как правило, что смещение, вызванное концевой карбоксильной или эфирной группой, эквивалентно смещению, которое происходит при введении одной новой этиленовой связи (в ряду карптина 21 Л1ц), а смещение, вызванное фенильным радикалом, равно 30,5 мц метильный заместитель вызывает смещение на 5 мц. [c.363]

РЬС2РЬ)г [156]. О независимой координации двух ацетиленовых лигандов свидетельствует наличие в ИК-спектре двух широких полос поглощения при 1700 и 1730 смГ . Единственная интенсивная полоса при 2015 слГ указывает на наличие одной концевой карбонильной группы. Окончательно структура комплекса LXXIV установлена методом рентгеноструктурного анализа [298—300]. Комплекс содержит две молекулы толана, координированные независимо по разные стороны от атома ниобия. Длины связей С—С равны [c.429]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология