Амфолиты-носители удаление

Удаление амфолитов-носителей [c.326]

З.8. Удаление амфолитов-носителей из образца [c.306]

В конечном счете наиболее удобным методом детектирования белков является определение оптической плотности при 280 нм. Фракции, представляющие интерес, могут быть затем подвергнуты анализу после удаления сахарозы и амфолитов-носителей с помощью диализа. [c.314]

Поскольку все указанные методы можно сочетать друг с другом, число возможных вариантов двухмерного электрофореза огромно. На практике же число этих комбинаций несколько ограниченно, так как изоэлектрофокусирование применяют только в первом направлении (отчасти это обусловлено высокой стоимостью амфолитов-носителей), а ДСН-содержащие гели —только на второй стадии электрофореза из-за трудностей, связанных с удалением ДСН из комплексов с белками. В зависимости от изменений, вводимых при электрофорезе во втором направлении,, можно выделить следующие типы двухмерного электрофореза [c.229]

На рис. 8 приведена схема прибора для диск-электрофо-реза, подготовленного для электрофокусирования в геле. Находящийся в трубках полиакриламидный гель содержит амфолиты-носители, которые вместе с образцом равномерно распределены по всему гелю или наслоены сверху. Для предотвращения окисления или восстановления амфолитов-носителей (на аноде и катоде соответственно) электроды погружают в раствор кислоты или основания. Во время электролиза кислота благодаря отрицательному заряду сульфат-иона остается в анодном отделении. В кислой среде над слоем геля амфолиты-носители приобретают положительный заряд и вследствие этого стремятся к кётоду. При подаче постоянного напряжения амфолиты распределяются по трубке в порядке их изоточек и фокусируют ам-фолиТы-Образцы в областях, соответствующих их изоточкам. Напротив, в основной среде вблизи катода амфолиты заряжены отрицательно и вследствие этого движутся к аноду. После удаления из трубок гель можно анализировать любыми методами, позволяющими избежать влияния амфолитов-носителей. [c.321]

Для элекгрофокусирования в геле в большинстве случаев вполне достаточно источника питания с напряжением О—400 В и силой тока О—30 мА. Для удаления амфолитов-носителей электрофорезом необходим более мощный источник постоянного тока при электрофорезе в продольном направлении — О—100 В, О—100 мА и при электрофорезе в поперечном направлении— 0—20 В, 0—500 мА. [c.323]

Хотя концентрация белков в зонах, разделившихся при ИЭФ в геле, и достигает значительного уровня, он не всегда достаточно высок для обнаружения белков путем их осажлте-ния. Поэтому в большинстве случаев приходится прибегать к более чувствительным методам окрашивания. Для преодоления трудностей, связанных с взаимодействием красителя и амфолина, имеются два пути. Первый путь — это удаление амфолитов-носителей после фиксации, но до окрашивания белков, а второй — подбор таких условий, при которых комплексы краситель — амфолин оказываются менее прочными, чем комплексы краситель — белок. Ниже будут рассмотрены некоторые приемы, позволяющие использовать обе эти возможности. [c.154]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология