Зоны электрофоретического гранулированной среде

Изоэлектрической точкой (р1) белка называют величину pH, при которой его суммарный заряд равен нулю. Изоэлектрическое фокусирование включает электрофоретическую миграцию белка в условиях градиента pH, которая продолжается до тех пор, пока белок не достигнет такой области, где pH равен р/ белка. Суммарный заряд белка становится равным нулю, и белок концентрируется в этой области в виде узкой зоны. Любое перемещение белка из-за диффузии в сторону от этой зоны ведет к восстановлению его электрического заряда и, следовательно, к электрофоретической миграции в обратном направлении. Итак, при изоэлектрическом фокусировании электрофоретический массоперенос и зональная диффузия совместно обусловливают стационарность процесса. Белки фокусируются в различных областях градиента pH, если их значения р/различны, и таким образом разделяются (рис. 3.13). Кроме того, р/ конкретных белков можно определить непосредственно путем измерения pH в зонах фокусирования. В качестве среды для изоэлектрического фокусирования применяют градиенты плотности и полиакриламидные или гранулированные гели. [c.124]

Эта методика была предложена в начале 50-х годов, а разработанный для нее прибор подвергся с тех пор многим усовершенствованиям и модификациям. Согласно этой методике, электрофоретическое разделение проводят в колонке с гранулированной поддерживающей средой, а полученные зоны элюируют по окончании или в процессе электрофореза в коллектор фракций. [c.50]

Самый простой способ обеспечения стабильности электрофоретических зон заключается в том, что в среду для электрофореза вводят вещества, образующие капиллярную структуру. Ан-тиконвекционные свойства такой системы весьма высоки, если площадь поперечного сечения капилляров достаточно мала, так как в канале круглого сечения скорость потока снижается пропорционально четвертой степени радиуса. В качестве поддерживающей среды чаще всего используются фильтровальная бумага, пленки из ацетата целлюлозы, колонки или блоки целлюлозного порошка, гранулированный крахмал или гранулы поливиниловых полимеров, а также агаровый, агарозный, крахмальный или полиакриламидный гели. Зональный электрофорез в поддерживающей среде имеет ряд важных преимуществ. При его проведении можно использовать какой-либо простой и сравнительно недорогой прибор и анализировать одновременно несколько различных препаратов. Процедуры визуализации зон и выделения фракций осуществляются довольно легко. Вещества, обладающие биологической активностью, можно выявить непосредственно на электрофореграммах. Метод легко приспособить как для крупномасштабного разделения веществ, так и для микроразделения. Удается достигнуть очень высокой разрешающей силы, особенно в среде, характеризующейся одновременно антикон векционными свойствами и эффектом молекулярного сита. [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология