Гибридизация при пульс-электрофорезе

Недавно была предложена модификация гель-электрофореза в агарозном геле, названная электрофорез в пульсирующем электрическом поле или пульс-электрофорез. С ее помощью удается разделять очень большие, можно сказать громадные молекулы ДНК. Обычный гель-электрофорез не позволяет разделить такие молекулы ввиду постоянства электрического поля, которое придает молекулам змеевидную конфигурацию. Обладающие такой конфигурацией молекулы движутся в гелях с постоянной скоростью вне зависимости от длины молекул. Если же направление электрического поля будет часто меняться, скорость движения молекул будет определяться их способностью переориентироваться согласно этому изменению. Такой процесс у больших молекул занимает значительно больше времени, вследствие чего они будут отставать. На гелях после пульс-электрофореза целые хромосомы бактерий или дрожжей выявляются в виде отдельных полос (рис. 4-64, В), и поэтому можно легко определить хромосомные перестройки. Более того, используя гибридизацию молекул клонированной ДНК данного геля для поиска комплементарных последовательностей в геле, удалось картировать множество генов у дрожжей (см. разд. 4.6.8). [c.233]

На противоположном конце спектра работают методы генетики соматических клеток, гибридизация in situ, анализ генетического сцепления их разрешающая способность ограничена 1000—5000 т. п. и. И наконец, середине щкалы соответствуют три метода, позволяющие использовать данные картирования для поиска специфических молекулярных нарушений. Это пульс-электрофорез [6—И], прыжки по хромосоме [3—5] и клонирование в клетках дрожжей [12]. [c.97]

Проверьте эффективность Л оЛ-библиотеки. Это несколько проще, так как у значимых клонов обе половинки, составляющие прыжок, должны происходить из одного и того же Notl-фрагмента. Целесообразно идентифицировать 5—10 клонов, содержащих вставки уникальных последовательностей, а затем проверить обе половинки каждого клона- прыжка путем блот-гибридизации с ДНК, фракционированной пульс-электрофорезом. Это даст представление о варьировании размеров прыжков, представленных в библиотеке, а также о доле значимых прыжков. [c.116]

Удивительную вариабельность по наблюдаемому числу генов А-типа изучали путем обработки препаратов ДНК определенных индивидов рестриктазой Notl, последующего разделения получаемых длинных рестриктов методом пульс-электрофореза и гибридизации их с зондом, комплементарным к обоим генам (рис. 10-25). [c.189]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология