Рестриктаза Notl

Для создания же полных специфических библиотек требуется всего лишь 10 000—20 000 клонов, так как количество независимых клонов эквивалентно числу рестрикционных фрагментов, полученных при использовании данного фермента рестрикции. Так например, для рестриктазы Notl, которая отщепляет приблизительно по 1000 т. п. н. в геноме человека, таких фрагментов должно быть всего лишь около 3000. Поэтому библиотеку из 10000 клонов для прыжков по Not 1-сайтам можно считать практически полной. Очевидным недостатком таких библиотек является то, что их нельзя использовать, когда стартовая точка прыжка не примыкает к редко встречаюш,емуся сайту рестрикции. К сожалению, это довольно частое явление, препятствуюш ее быстрому распространению данного метода. Если же все-таки удается идентифицировать клон, примыкающий к редко встречающемуся сайту рестрикции, использование специфических библиотек для прыжков по хромосоме может оказать неоценимую помощь. [c.99]

Этапы работы аналогичны тем, которые подробно описаны для стандартной геномной библиотеки. Здесь мы отметим лишь. различия. Хотя речь в этом разделе идет о конструировании с помощью рестриктазы Notl, данные, приведенные здесь, легко обобщить для специфических библиотек, получаемых на основе лругих редкощепящих ферментов. [c.114]

Осадите циклические молекулы ДНК, а затем расщепите, обрабатывая большим избытком рестриктазы Notl. Желательно поставить контрольное расщепление небольшого количе- [c.117]

Удивительную вариабельность по наблюдаемому числу генов А-типа изучали путем обработки препаратов ДНК определенных индивидов рестриктазой Notl, последующего разделения получаемых длинных рестриктов методом пульс-электрофореза и гибридизации их с зондом, комплементарным к обоим генам (рис. 10-25). [c.189]

В. Зонд, специфичный для уникальных последовательностей, расположенных непосредственно перед 5 -концом гена В-типа, гибридизуется с рестриктом 32 т. п. н., получившимся в результате обработки SfiL Один конец этого фрагмента образуется при разрезании внутри гена, а другой при расщеплении в участке вне данного гена. Этот Sfil-фрагмент разрезается в свою очередь рестриктазой Notl, которую использовали для анализа, показанного на рис. 10-25. Исходя из этой информации определите, какой ген расположен на 5 -конце этого кластера, а какой на З -конце. (За 5 -конец кластера принимается конец вблизи 5 -конца первого гена.) [c.189]

Если неравный кроссинговер между этими генами происходит часто, на что указывает вариабельность генов, наблюдаемая среди мужчин с нормальным цветовым зрением, тогда дальтонизм может возникать в результате этого же процесса. Неравный кроссинговер может приводить к элиминации гена путем делеции либо к изменению функции при образовании гибридного гена (рис. 10-34). Веским аргументом в пользу этого предположения служит тот факт, что отличие генов мужчин-дальтоников, исследованных с помощью рестриктазы Notl (рис. 10-25, индивиды [c.429]

Линкеры используют также для объединения молекул ДНК, обладающих ровными концами неопределенного строения, с целью образования сайта рестрикции на стыке молекул. Для клонирования больщих фрагментов ДНК удобны линкеры, содержащие сайты узнавания для редкощепящих рестриктаз, например, для Notl - 5 -AG GG G T-3. [c.248]

Пульс-электрофорез явился новым мощным методом изучения молекулярной организации гигантских ДНК. Редкощепящие рестриктазы, узнающие последовательность из 8 пн Notl, Sfil, см. табл. 1.2), гидролизуют ДНК, как правило, с образованием очень крупных фрагментов, которые удается разделить только с помощью пульс-электрофореза. Эти фрагменты можно переносить из геля на нитроцеллюлозные фильтры по Саузерну. Для этого ДНК фрагментируют в геле, облучая ультрафиолетом после окраски бромистым этидием или расщепляя химически. [c.58]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология