Гепарин, буферы

Уравновесьте 200 мл суспензии гепарин-сефарозы раствором 2 М мочевины в 25 мМ аммоний-бикарбонатном буфере, [c.126]

Нагрейте 7,5 мл гибридизационного буфера с гепарином до 37 °С. [c.202]

Нагрейте 10 мл буфера для гибридизации с гепарином до 37 °С, добавьте 50 мкл некипяченой пробы (половину реакционной смеси), перемешайте, переворачивая, пробирку. [c.203]

Гепарин-сефарозу (20 г) уравновешивают буфером Б до достижения в элюате соответствующей электропроводности. [c.167]

Экстракция РНК. К суспензии рибосом добавляют ингибитор РНКаз гепарин (можно использовать также диэтилпирокарбонат, по-ливинилсульфат) из расчета 0,5 мг на 1 мл и равный объем фенола. Смесь встряхивают 30 мин и центрифугируют на холоде 30 мин при 600—1000 . При помощи шприца отбирают верхний водный - слой и добавляют к нему снова фенол (1/2 объема). После интенсивного встряхивания и центрифугирования водный слой переносят в делительную воронку и добавляют равный объем смеси хлороформа с эфиром I 1 После встряхивания и отстаивания собирают водный слой и осаждают из него РНК, приливая в тройной объем охлажденного этилового спирта. Раствор оставляют на несколько часов при —20°С. Осадок рибосомной РНК собирают центрифугированием на холоде (3000 g, 20 мин), растворяют в небольшом объеме ацетатного буфера и повторяют осаждение спиртом. Осадок рибосомной РНК после центрифугирования высушивают или хранят в этаноле при —20°С. [c.171]

Эритроцитарный диагностикум для РПГА с водонерастворимыми промышленными химическими аллергенами по С. Г. Барлоговой готовят следующим образом к 0,05 мл осадка отмытых бараньих эритроцитов добавляют 2,5 мл раствора танина на фосфатном буфере pH 7,2 в разведении 1 40000 —1 60 000 (в зависимости от партии танина), инкубируют при Ч-37 С в течение 20 мин, центрифугируют в течение 7 мин при 1500 об/мин, осадок однократно отмывают 10 мл того же буфера и разводят до 1% суспензии 5 мл физиологическим раствором (желательно с добавлением гепарина из расчета 1—2 единицы на 1 мл физиологического раствора). Суспензию эритроцитов переливают в колбу с широким дном и в течение 10 мин охлаждают в емкости со льдом, затем добавляют 0,02 мл охлажденного при - -4°С ацетона, в котором растворена рабочая доза аллергена. Сенсибилизируют эритроциты при постоянном встряхивании в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем дополнительно в течение 30 мин на холоду в Холодовой комнате или в емкости со льдом. В последующем было показано, что можно ограничиться одной лишь инкубацией на холоду в течение 30—40 мин. Сенсибилизированные эритроциты осаждают центрифугированием при том же режиме и однократно отмывают разводящей жидкостью (0,2% раствор желатина или кристаллического альбумина человека на физиологическом, лучше гепаринизированном, растворе pH 6,6— 6,7). [c.217]

В колонку (1,6x20 см) заливают при 4 °С суспензию 14 г влажной гепарин-сефарозы в буфере Б ( — 14 мл). [c.165]

Фракция, элюированная с гепарин-сефарозы буфером В, содержит основную казеинкиназную активность и некоторое количество РНК-полимеразной активности (рис. 10). Для разделения и дальнейшей очистки этих ферментов может быть использована хроматография на казеин-сефарозе. Наиболее существенно удалить избыток соли из указанной фракции (содержащей 300 мМ (NH4)2S04), что можно осуществить диализом в течение ночи в буфере Д (3 раза по 500 мл). [c.168]

Оптимальной, на наш взгляд, схемой получения устойчивых к Са + дифференцированных клеток сердца является разработка Нага и соавторов [19], учитывающая преимущества более ранних методик. Извлеченное сердце гепаринизированной перед забоем (1000 ед гепарина на 1 кг массы) крысы (200—300 г) помещают в 10 мл охлажденного до О °С бескальциевого физиологического раствора Кребса—Рингера (РКР) на фосфатном буфере, pH 7.4, содержащем 5 10 М глюкозы и 1 % бычьего сывороточного альбумина. Перфузионный аппарат наполняют 50 мл бескальциевого РКР, предварительно оксигенированного продуванием смесью 95 % Ог и 5 % СО2. Через аорту (извлекая сердце, сохраняют ее участок длиной около 5 мм) вводят канюлю и промывают сердце РКР в течение 15 мин при 37 °С (на эту процедуру обычно расходуется около 25 мл физиологического раствора) при этом сердце часто сохраняет.сократительную активность. Перфузию продолжают оксигенированным РКР, содержащим 0.1 % коллагеназы, 0.1 % гиалуронидазы и 1 % бычьего сывороточного альбумина (к этому времени сокращения миокарда прекращаются). После окончания перфузии размягченную и потерявшую упругость ткань разрезают на 4 кусочка, удалив предсердия и крупные сосуды, затем повторно по 10— 15 мин до 3—4 раз инкубируют в растворе ферментов в РКР, отделяя клетки легким встряхиванием. Полученные фракции объединяют и отмывают центрифугированием (3—5 мин при 37 °С, 800 об/мин) на настольной центрифуге. Сходная методика получения изолированных клеток для культивирования описана Клэйкомом и Лэнсо-ном [14]. [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология