Гепарин на сефарозе

Методика хроматографии на гепарин-сефарозе [c.165]

Благодаря сходству структуры своего лиганда со структурой РНК (гепарин является конкурентным ингибитором для РНКазы) гепарин-сефароза широко используется для очистки РНК-полиме-раз, обратной транскриптазы, факторов трансляции и др. [c.422]

Использование гепарин-сефарозы в аффинной хроматографии описано далее в разд. 5. [c.151]

После гидролиза модифицированного образца гепарин — сефарозы содержание гепарина установлено по результатам определения сульфатов [62]. [c.248]

Уравновесьте 200 мл суспензии гепарин-сефарозы раствором 2 М мочевины в 25 мМ аммоний-бикарбонатном буфере, [c.126]

Добавьте диализованную надосадочную фракцию к гепарин-сефарозе и инкубируйте на качалке в течение ночи при 4 °С. [c.126]

Заполните гепарин-сефарозой стеклянную колонку (4X3,5 см). [c.126]

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА ГЕПАРИН-СЕФАРОЗЕ И КАЗЕИН-СЕФАРОЗЕ ДЛЯ ОЧИСТКИ И РАЗДЕЛЕНИЯ ДНК-ЗАВИСИМЫХ РНК-ПОЛИМЕРАЗ И ПРОТЕИНКИНАЗ [c.162]

Гепарин-сефарозу (20 г) уравновешивают буфером Б до достижения в элюате соответствующей электропроводности. [c.167]

В колонку (1,6x20 см) заливают при 4 °С суспензию 14 г влажной гепарин-сефарозы в буфере Б ( — 14 мл). [c.165]

Приливают раствор ферментов к уравновешенной гепарин-сефарозе и оставляют на 1 ч при осторожном перемешивании суспензию центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. [c.168]

Характеристика РНК-полимеразных фракций, выделенных с колонки с гепарин-сефарозой [c.169]

Фактор элонгации EF-1 из ретикулоцитов кролика после предварительного фракционирования суиернатанта осаждением сульфатом аммоння очищали на колонке гепарин-сефарозы сначала в статическом режиме. Элюцию вели 0,25 М раствором КС1 в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с 2 мМ -меркаптоэтанола. Очистку на гепарин- [c.423]

Аполкпопротеин Е — эукариотический полипептид, синтезируемый в клетках Е. oli, где он находится в нерастворимом состоянии, но его очищают с помощью аффинной хроматографии в присутствии денатурирующих агентов [32] (табл. 4.20). Для этого используют хроматографию на гепарин-сефарозе с 2 М мочевиной. В этих условиях эукариотический белок, чтобы узнавать лиганд, должен частично принять нативную конформацию. Далее используются еще две стадии очистки, одна из которых — это гель-фильтрация на сефакриле S-300 в присутствии 6 М гуанидинхлорида. Затем после диализа, при котором белок ренатурирует, осуществляется конечная стадия очистки с исполь- [c.124]

А,2, Комбинация бетч- и колоночного методов для гепарин-се фарозы. Для ускорения наиболее продолжительных стадий процесса (связывание ферментов с гепарин-сефарозой и промывание колонки, стадии 1 5) может быть применен бетч-метод, который следует также использовать при работе с большими количествами вещества. [c.167]

Фракция, элюированная с гепарин-сефарозы буфером В, содержит основную казеинкиназную активность и некоторое количество РНК-полимеразной активности (рис. 10). Для разделения и дальнейшей очистки этих ферментов может быть использована хроматография на казеин-сефарозе. Наиболее существенно удалить избыток соли из указанной фракции (содержащей 300 мМ (NH4)2S04), что можно осуществить диализом в течение ночи в буфере Д (3 раза по 500 мл). [c.168]

При работе по описанным выше методикам должно соблЮ даться соотношение аффинного адсорбента к наносимому белку например, для белковых экстрактов, полученных из 20 г прО ростков кукурузы, надо брать оптимально 14 г гепарин-сефарозы. При использовании меньших количеств белка фермент элюируется в слишком разбавленном виде, а при нанесении большего количества белкового экстракта увеличивается продолжительность стадий разделения и имеет место частичная инактивация фермента. При работе в рекомендованных условиях последую-ш,ее концентрирование фермента не обязательно. Получаемый при этом раствор фермента устойчив и может храниться не-сколько недель (при —70 °С) без потери активности в этом виде раствор фермента непосредственно можно вводить в следующий этап очистки. [c.170]

При аффинном разделении на гепарин-сефарозе выявлены три фракции экстрацеллюлярной СОД А, В, С. Фракция А не имеет сродства к гепарину, фракция В обладает слабым сродством, фракция С хорошо связывается гепарином [274—277]. Фракция С способна связываться не только с гепарином, но и с другими гликозаминогликанами. Вследствие этого в условиях in vivo экст-рацеллюлярная СОД С в основном связана с гликокаликсом эндотелиальных клеток сосудистой стенки, тогда как формы А и В находятся преимуш ественно в плазме. Связь между гликозаминогликанами клеточной поверхности и экстрацеллюлярной СОД С имеет электростатическую природу. Связываюш ий участок расположен достаточно далеко от каталитического центра, благодаря чему в условиях in vivo фермент, иммобилизованный на клеточной поверхности, сохраняет основную часть активности [277]. Показано, что вводимый внутривенно в больших концентрациях гепарин (1000 ЕД/кг) вытесняет форму С фермента с поверхности эндотелиальных клеток и вследствие этого увеличивается количество экстрацеллюлярной СОД в плазме крови [274, 275]. [c.38]

Предпосылкой для использования гепарина в качестве лиганда для очистки специфических эндонуклеаз послужили сведения об его ингибирующем действии на ряд ферментов, взаимодействующих с ДНК [75, 257]. Первым в практику препаративной биохимии рестриктаз гепарин, связанный с сефарозой, ввели Бикл с соавт. [43], продемонстрировавшие его эффективность в ходе выделения 16-ти ферментов. [c.156]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология