Диэтилпирокарбонат

Диэтилпирокарбонат см. Диэтиловый эфир угольной кислоты пиро [c.215]

Экстракция РНК. К суспензии рибосом добавляют ингибитор РНКаз гепарин (можно использовать также диэтилпирокарбонат, по-ливинилсульфат) из расчета 0,5 мг на 1 мл и равный объем фенола. Смесь встряхивают 30 мин и центрифугируют на холоде 30 мин при 600—1000 . При помощи шприца отбирают верхний водный - слой и добавляют к нему снова фенол (1/2 объема). После интенсивного встряхивания и центрифугирования водный слой переносят в делительную воронку и добавляют равный объем смеси хлороформа с эфиром I 1 После встряхивания и отстаивания собирают водный слой и осаждают из него РНК, приливая в тройной объем охлажденного этилового спирта. Раствор оставляют на несколько часов при —20°С. Осадок рибосомной РНК собирают центрифугированием на холоде (3000 g, 20 мин), растворяют в небольшом объеме ацетатного буфера и повторяют осаждение спиртом. Осадок рибосомной РНК после центрифугирования высушивают или хранят в этаноле при —20°С. [c.171]

С помощью специфических реагентов на белки, например динитрофторобензола (ДНФБ), взаимодействующего с аминогруппами, удалось доказать белковую природу компонентов калиевого канала. рН-зависимость калиевой проницаемости предполагает наличие в канале группы с рК 6,3 (ракообразные) или 5,2 (лягушка), которая представляет собой имида-зол гистидинового остатка. В пользу этого свидетельствуют результаты по селективному блокированию калиевой проводимости диэтилпирокарбонатом (ДЭП), специфичным реагентом, на имидозол (рис. 6.4). [c.159]

Для модификации остатков гистидина в белках, особенно в актив-ных центрах ферментов, раиее широко применялось сенсибилизированное красителями фотоокисление (В. Рей, 1967). В последнее же время предпочитают использовать диэтилпирокарбонат, который при pH 5,5 — 7,5 достаточно специфично реагирует с остатками гистидина. [c.166]

Устойчивость геля к бактериальному действию намного выше, чем у исходного агара, но все же в состав элюентов желательно вводить антисептики 0,02% азида натрия, 0,5% бутанола, насыщенный раствор хлороформа. Для стерилизации гелей можно использовать 0,01%-ный раствор диэтилпирокарбоната. [c.57]

Для сохранения ряда пищевых продуктов приходится применять химические консерванты. К вину с этой целью ранее добавляли сернистую кислоту вино и фруктовые соки можно (если это вообще необходимо) консервировать добавлением диэтилпирокарбоната. [c.212]

Тот факт, что при вза 1Модействии натриевой соли этилугольной кислоты с треххлористым фосфором выделяется в весьма значитель- ных количествах углекислый газ, позволяет сделать несомненное заключение о том, что ожидать образования диэтилпирокарбоната в результате этой реакции нельзя, так как выделение свободного углекислого газа могло произойти в данном случае только за счет разрушения карбэтокси-групп, сочетанием которых (через кислород) i [c.299]

Диэтилпирокарбонат (добавляют непосредственно перед лизированием клеток из-за его слабой устойчивости в воде). [c.122]

На каждый 1,0 мл суспензии добавляют по 0,05 мл 10%-ного нафталиндисульфоната, а также диэтилпирокарбонат до конечной концентрации 0,2%. После этого клетки немедленно разрушают, пропуская через пресс Френча при давлении от 7-10 до 8,4-10 Па (700— 840 кг/см ) в сосуд, содержащий 15 мл смеси фенол — крезол, 10 мл 0,5%-ного нафталиндисульфоната и [c.123]

ДНК иммобилизуют на нитроцеллюлозных мембранных фильтрах, как описано в разд. 22.6.5 Предварительные процедуры . Используют автоклавирование и обработку буферов диэтилпирокарбонатом если препараты ДНК содержат примеси РНКазы, то их обрабатывают перед денатурацией диэтилпирокарбонатом илн протеолитическими ферментами. Продолговатые фильтры размером 3x9 мм или круглые с диаметром 10 мм предынкубируют в смеси Денхардта. Используют буферы, не содержащие РНКазу. [c.158]

При работе с препаратами РНК требуется большая аккуратность, чтобы избежать загрязнения растворов и реакционных смесей РНКазой. Для этого следует соблюдать все необходимые стандартные меры предосторожности, и в том числе все процедуры выполнять в перчатках. Очень полезно обрабатывать растворы диэтилпирокарбонатом (ДЭПКом) добавьте Б них ДЭПК до концентрации 0,1% (объемная концентрация), оставьте на 1 ч, а затем автоклавируйте, чтобы разрушить [c.19]

Диэтилпирокарбонат и диэтилоксидифор-мат. Эти соединения могут вызывать потерю биологической активности нуклеиновых кислот. С двухцепочечными нуклеиновыми кислотами они, как правило, не реагируют при комнатной температуре. [c.60]

Построение калибровочных кривых. Калибровочную кривую, необходимую для определения молекулярной массы белков, можно получить путем электрофореза нескольких чистых белков с известной молекулярной массой. Однако далеко не в каждой лаборатории имеется набор таких белков. В этом случае калибровочную кривую можно построить с помощью одного единственного белка, если получить его полимеры, используя Сшивающие агенты, подобные диэтилпирокарбонату [760, 1440, 1441] или диметилсуберимидату [195, 781]. Образованные таким способом полимеры, содержащие 5—10 мономеров, позво- ляют проводить определение молекулярных масс в широком диапазоне (рис. 79). Наличие полимеров высокомолекулярного белка дает возможность построить калибровочную кривую для белков с мол. массой до 600 ООО (рис. 80). [c.222]

Рис, 79. Калибровочные кривые для определения молекулярных масс белков методом электрофореза в Ю7о-ном (/) и 12,5%-ном (//) полиакриламидном геле, содержащем ДСН [414]. Полимер РНКазы был получен при помощи диэтилпирокарбоната по методу Вольфа и др. [1441]. [c.223]

Приготовление полимеров белков по методу Вольфа и др. [М40]. 2 мг белка растворяют в 1 мл воды, добавляют 20 мкл диэтилпирокарбоната и перемешивают с максимальной скоростью на вихревом смесителе (Vortex) в течение 2—3 мин при комнатной температуре. Избыток диэтилпирокарбоната удаляют лиофилизацией или диализом против буфера, содержащего 0,01 М фосфат (pH 7,8), 1% ДСН и 1% 2-меркаптоэтанола. [c.226]

Для решения основной задачи исследования использовали различные классы РНК, выделенные методом фенольно-термического фракционирования с использованием диэтилпирокарбоната — неспецифического ингибитора нуклеаз. Изучены следую-298 [c.298]

Диэтилпирокарбонат и диэтилоксидиформат. Эти соединения вызывают включение в одноцепочечные нуклеиновые кислоты карбэтоксильных групп, что приводит к утрате биологической активности. С двухцепочечными нуклеиновыми кислотами они, как правило, не реагируют при комнатной температуре. [c.150]

ДМСО —диметилсульфоксид ДЭАЭ — диэтиламиноэтил ДЭП —диэтилпирокарбонат ЕИЭбо —доза вируса, инфекционная для 50% куриных эмбрионов (от единица инфекционности для куриных эмбрионов) [c.10]

Сахароза — инертное, стабильное вещество, однако при авто-клавировании ее растворы могут карамелизоваться. Между тем их стерилизация нередко необходима, так как сахароза ввиду ее биологического происхождения может содержать примеси различных ферментов, в частности рибонуклеаз. Растворы сахарозы лучше всего стерилизовать добавлением (на 30 мин) до 0,1% диэтилпирокарбоната (ДЭП) — мощного ингибитора рибонуклеаз. После обработки ДЭП разлагают на СО и этанол нагреванием раствора при 60 в течение нескольких часов. Следует помнить, что ДЭП очень ядовит [c.212]

Справочник биохимии (1991) -- [ c.268 , c.324 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.210 , c.211 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.222 , c.223 , c.226 ]

Электрофорез и ультрацентрифугирование (1981) -- [ c.212 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.214 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология