Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Флуоресценция при цитометрии

    Гистограммы производятся многоканальными анализаторами установок либо в форме двумерных гистограмм (рис. 6.8) (интенсивность флуоресценции против числа клеток), либо в форме трехмерных гистограмм (флуоресценция и светорассеяние против числа клеток). Если данные собираются одновременно с двух различных ФЭУ, то требуются более сложные многоканальные анализаторы. Трехпараметрические гистограммы могут также создаваться некоторыми компьютерами, откладывающими частоту распределения клеток по параметрам X, У и 2. Количество клеточных параметров, определяемых одновременно, характеризует оснащение установки для проточной цитометрии. [c.195]


    IV. Анализируйте в проточном цитометре с аргоновым лазером при линии возбуждения 488 нм и эмиссией флуоресценции в диапазоне 515—555 нм. [c.207]

    Проточная цитометрия — это относительно новый метод, позволяющий оценивать несколько оптических параметров для каждой частицы в суспензии, например оптическую плотность, флуоресценцию и светорассеяние определять их можно как поодиночке, так и все сразу. Каждое измерение проводится за несколько микросекунд это обеспечивает сбор данных на большой популяции частиц. Возможность анализа оптических параметров частиц позволяет осуществлять их сортировку в сложных смесях по одному или более измеряемым параметрам. Методом сортировки можно характеризовать клеточную попу-.1ЯЦИЮ по светорассеянию — одному из параметров, дающему информацию об объеме или площади поверхности клеток. Два других обычно оцениваемых параметра — это оптическая плотность и флуоресценция. [c.182]

    Одна из наиболее трудных проблем при цитометрии связана с неспецифическим окрашиванием. Клеточный сортер с чрезвычайно высокой чувствительностью детектирует флуоресцирующие молекулы — обычно с большей, чем глаз. Поэтому реагенты, используемые при работе с сортером, должны быть более высокой степени очистки, чем для других методов анализа. Как правило, гетерологичные сыворотки должны подвергаться очистке на аффинных сорбентах даже в тех случаях, когда они достаточно специфичны для непосредственного использования при флуоресцентной микроскопии. Моноклональные антитела не всегда требуют очистки. Мы с успехом использовали супернатанты многих продуцирующих моноклональные антитела гибридом, которые культивировали в средах с добавлением и без добавления сыворотки, а также асцитные жидкости (конечно, в соответствующем разведении). В случае непрямых методов флуоресцентного окрашивания влияние контаминирую-щих молекул в культуральных жидкостях сводится к минимуму. Если конъюгированные с флуорохромом антитела строго специфичны по отношению к иммуноглобулинам, то даже при связывании клетками молекул, не относящихся к иммуноглобулинам, эти молекулы не будут детектироваться (по флуоресценции). В случае применения асцитных жидкостей активность моноклональных антител обычно настолько высока, что эффекты контаминирующих иммуноглобулинов и других компонентов чаще всего не выявляются. Однако при прямом конъ-югировании препаратов антител с флуорохромом наличие в них белковых примесей неиммуноглобулиновой природы может стать причиной высокого уровня неспецифического окрашивания. Следовательно, любой конъюгат используемый при сортинге клеток, должен быть тщательно очищен. [c.332]


    Следует подчеркнуть, что маркеры, экспрессируемые лимфоцитами, можно обнаружить и на клетках иных линий. Так, С044 часто выявляется на клетках эпителия. Молекулы клеточной поверхности можно выявить с помощью флуоресцирующих антител, используемых в качестве зондов (рис. 2.9). На этом подходе основан метод проточной иммунофлуоресцентной цитометрии, позволяющей сортировать и подсчитывать клетки в зависимости от их размеров и параметров флуоресценции (см. гл. 29). С помощью этого метода удается проводить детальную сортировку популяций лимфоидных клеток. [c.23]


Смотреть страницы где упоминается термин Флуоресценция при цитометрии: [c.211]    [c.327]    [c.47]   
Культура животных клеток Методы (1989) -- [ c.182 , c.185 , c.189 , c.191 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Флуоресценция



© 2025 chem21.info Реклама на сайте