Среды среда бессывороточные

Среды для бессывороточных культур клеток или культур с низкой концентрацией сыворотки [c.45]

Миогенез в постоянных клеточных линиях успешно реализуется ЭИ использовании бессывороточных сред. Среду с 10 % сыворотки ЭИ достижении монослоя заменяют на среду ММ-1 [18]. Она состоит [c.289]

Кроме подобных сред предложены также бессывороточные [c.142]

Хэм (Ham) предложил бессывороточную среду определенного химического состава, которая способна поддерживать рост клонов [c.207]

Медленно, в течение 1—2 мин добавляйте по каплям 1 мл бессывороточной среды. Перемешайте содержимое пробирки пипеткой. [c.14]

Удалите среду и промойте дважды бессывороточной средой. [c.15]

Удалите раствор ПЭГ и осторожно дважды промойте клетки бессывороточной средой. [c.15]

Этот метод может быть также модифицирован для слияния клеток, растущих на подложке, с клетками, культивируемыми в жидкой среде. Прикрепленные клетки выращивают до образования монослоя и затем обрабатывают ПЭГ (табл. 3, п. 1—4), суспензионные клетки добавляют в небольшом объеме (1,0 мл) бессывороточной среды. Чашки центрифугируют при 1000 [c.15]

Слияние мини-клеток с целыми клетками. Соберите клетки-реципиенты и отмойте их бессывороточной средой. Добавьте приблизительно 10 клеток-реципиентов к осадку мини-клеток в 2 мл бессывороточной ростовой среды, содержащей 100 мкг/мл фитогемагглютинина. Поместите в пластиковый сосуд с коническим дном и инкубируйте 10 мин при 37 °С. [c.19]

Рис. 3.2. Рост гибридомных клеток мышей и синтез антител на бессывороточной среде и ферментере объемом 1000 л.

Тем не менее культивирование в присутствии сыворотки проще и, как ни странно, часто оказывается не более дорогим, хотя, конечно, менее контролируемо. Две главные причины все еще ограничивают применение бессывороточных сред а) очень медленно растет выпуск коммерческих ингредиентов таких сред (не многие исследователи способны изготовлять среды собственными силами) и б) потребности в бессывороточной среде в большей степени зависят от типа используемых клеток. Сыворотка нивелирует многие недостатки среды, которые могут проявляться в ее отсутствие. Проблема может стать особенно острой при культивировании опухолевых клеток клеточные линии, происходящие из разных опухолей, могут требовать модификации культуральной среды. [c.18]

РАЗРАБОТКА ХИМИЧЕСКИ-ОПРЕДЕЛЕННЫХ БЕССЫВОРОТОЧНЫХ СРЕД ДЛЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ [c.27]

Разработка химически-определенных бессывороточных сред 29 [c.29]

Таблица 2.2. Бессывороточные среды и среды с низким содержанием белков в удобной для компьютерной обработки экспоненциальной форме

Возможные преимущества использования бессывороточных сред и сред с низким содержанием сыворотки [c.40]

В конце концов выбор среды все еще остается эмпирическим. Просмотрите литературу и выясните, какая среда использовалась ранее. Если использовалось несколько различных сред (как это чаще всего и бывает), проверьте все эти среды, а также некоторые другие по вашему выбору. Оцените рост культуры (время генерации и плотность насыщения) (см. ниже), эффективность клонирования (гл. 8), экспрессию специфических свойств (дифференцировка, размножение вируса, выход клеточного продукта и т. д.). Выбор среды может оказаться неодинаковым по этим параметрам так, например, дифферен-цнровка легочного эпителия лучше проходит в присутствии сыворотки, а размножение этих клеток — в отсутствие сыворотки. Если возможно, используйте в своей работе одну или несколько бессывороточных сред с добавлением в случае необходимости факторов роста, гормонов и микроэлементов (см. гл., 2). [c.18]

Недавним примером [26] удачного использования стандартной среды для бессывороточного культивирования нормальных клеток является размножение кератиноцитов мыши в бескальциевой среде Игла с заменимыми аминокислотами, в которую добавлены инсулин [c.58]

Приготовление суспензии миеломных клеток для гибридизации. Работа с клетками и культуральными средами должна проводиться в условиях, абсолютно стерильных 50 мл среды с культивируемыми миеломными клетками, находящимися в логарифмической стадии роста, центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин, надосадок сливают в отдельную пробирку. Клетки суспендируют в 50 мл холодной ростовой среды без сыворотки (бессывороточная среда), отмывают центрифугированием при тех же условиях и суспендируют в 20 мл холодной бессывороточной среды. Клетки подсчитывают в камере Горяева. Их количество должно быть не менее 10 . [c.311]

Слияние клеток. Смешивают суспензии клеток миеломы и селезенки в соотношении 1 10 и центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант полностью сливают. Осадок встряхивают и по каплям добавляют 1 мл 50%-ного раствора ПЭГ с ДМСО в течение 1 мин при постоянном встряхивании пробирки. Клетки центрифугируют в следующем режиме разгоняют центрифугу до 1000 об/мин и тут же выключают. После остановки центрифуги вынимают пробирку с осевшими клетками и суспендируют клетки встряхиванием в том же растворе ПЭГ. К суспензии клеток добавляют по каплям 1 мл бессывороточной среды в течение 1 мин, затем каждую последующую минуту удваивают объем, добавляя 2, 4, 8 и 16 мл соответственно при постоянном встряхивании пробирки до конечного объема 32 мл. Клетки центрифугируют в обычном режиме в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант отбрасывают, клетки суспендируют в селективной среде ГАТ в концентрации 10 —5-10 клеток в 1 мл. Полученную суспензию клеток распределяют в 96-луночные микропланшеты по 200 мкл в лунку (5—10 микропланшетов). Микропланшеты помещают во влажный СОг-инкубатор с 5% СО2. [c.312]

Готовят 2%-ный раствор агара в бессывороточной среде (СИМД) , разливают по 10 мл в пробирки и стерилизуют автоклавированием. Хранят при 4°С. [c.313]

Сато (Sato) и сотрудники опубликовали первую серию статей, в которых было показано, что для роста в бессывороточной среде [c.207]

Для отдельных линий клеток разработаны специальные среды, обеспечивающие оптимальный рост этих линий или возможность их культивирования в бессывороточной среде. Так, среда МакКоя 5А (МсСоу et al., 1959) используется как стандартная среда для клонирования клеток. Она основана на СБСР и аминокислотах и витаминах из среды 199 (приложение 1 табл. 18). [c.80]

В недавно опубликованной работе (Ham, M Keehan, 1978) приведены результаты попыток выращивания диплоидных клеток в бессывороточной среде. В этих исследованиях подчеркивается важность точного поддержания концентрации питательных веществ и природы поверхности культурального сосуда для обеспечения клонального роста клеток. Авторам удалось снизить концентрации диализованной сыворотки в культуре до 500 мкг белка на 1 мл среды. [c.84]

Следует отметить, что в последнее время уделяется большое внимание разработке бессывороточных (полностью синтетических) сред (5. Volpe, 1984). [c.99]

При обычных методах культивирования концентрация антител в культуральной жидкости лежит в пределах 10—100 мкг/мл. Более высокие концентрации удается получить в ферментерах при использовании сред с низким содержанием СПК и добавлением определенных препаратов [препараты приматон КГ и плу-роник Р-68 (5. Кеиуепу е а1., 1986)] —до 660 мкг/мл. Важным направлением исследований является подбор бессывороточных сред, применение которых значительно облегчает последующие этапы очистки моноклональных антител. [c.117]

Соберите 5X10 клеток каждой из родительских линий, поместите их в стерильную центрифужную пробирку, перемешайте и осадите смесь, центрифугируя при 1500 5 мин при комнатной температуре. Осадок отмойте один раз, ресус-пендируя и центрифугируя в аналогичных условиях в бессывороточной среде. [c.14]

Бессыворбточиые среды. В настоящее время наблюдается тенденция к производству моноклональных антител в средах с низким содержанием сыворотки или в бессывороточных средах, хотя публикаций о применении таких сред в промышленном масштабе очень немного. Преимущества таких сред по сравнению с обычными, содержащими 10 и более процентов сыворотки, заключаются в упрощении процесса и удешевлении продукции. В случае бессывороточных сред, кроме того, достигается более высокая воспроизводимость процесса, поскольку каждый компонент среды хорошо известен и может быть получен в очень чистом состоянии. HaKonen, бессывороточные синтетические среды полезны и в научно-исследовательских работах, поскольку в них можно селективно варьиромть концентрацию любого компонента. По сути дела, для проведения корректных научных исследований по росту гибридомных и других клеточных линий в первую очередь необходимо иметь хорошо охарактеризованную бессывороточную среду. [c.42]

Кинетика роста. До появления бессывороточных сред закономерности роста животных клеток изучали на средах, содержахцих различные сыворотки. Позднее оказалось, что кинетика роста и биосинтез антител гибридомными клетками на бессывороточных средах и в средах, содержащих сыворотку, очень близки. На рис. 3.2 представлены характеристики роста гибридомных клеток грызунов и образования IgG на бессывороточной среде в эр-лифтном ферментере объемом 1000 л. Клетки росли с временем [c.42]

В зависимости от области применения антител и от их свойств можно использовать самые различные способы очистки. Для диагностических целей часто достаточно имет препараты антител 70-95%-ной степени чистоты. С другой стороны, при применении антител in vivo их чистота должна быть намного выше. В сывороточных средах содержание антител не превышает 10% от общего количества белка. Хотя проведение процесса на бессывороточных средах и облегчает очистку, на практике относительно легко достичь 90%-ной и даже более высокой степени чистоты независимо от содержания сывороточных белков. При очистке антител для их использования ш vivo на последних стадиях очистки приходится решать одни и те же проблемы независимо от природ и питательной среды. Высокоэффективные методы очистки необходимы для удаления следовых количеств не только примесных белков, но и пирогенов и ДНК. Ранее для очистки антител широко применяли фракционирование сульфатом аммония с послед)пющей ионообменной хроматографией. Применение этих методов осложняется тем, что различные моноклональные антитела имеют разные изо-электрические точки [34, 36 J. Кроме того, после ионообменной хроматографии чистота антител не превышает 90%, поэтому для дальнейшей очистки необходимы другие методы, например гель-фильтрация. Однако в тех случаях, когда моноклональные антитела использ)пют для диагностики или иммуноаффинной очистки, ионообменная хроматография или ее сочетание с предварительным осаждением позволяют получить препараты достаточного качества. [c.47]

СЛИЯНИЯ гибридом с родительскими миеломами, имеющими особенно благоприятные характеристики. Кроме того, большое поле деятельности открывается в области инженерии моноклональных антител. Эта технология позволит создавать новые типы моноклональных антител с заранее заданными свойствами и получать их в больших количествах. Необходимо также развивать методы скрининга для поиска клонов, секретирующих антитела при культивировании на бессывороточных средах. [c.50]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология