Методы введения молекул ДНК в клетки млекопитающих

Как видим, в настоящее время имеется широкий спектр методов введения молекул ДНК в культивируемые клетки млекопитающих. Это обеспечивает возможность проведения разнообразных генно-инженерных экспериментов в данной эукариотической системе. [c.338]

С появлением генетической инженерии методология введения молекул ДНК в клетки млекопитающих привлекла внимание многих исследователей. К этому времени уже бьш разработан ряд методов трансфекции культивируемых клеток животных нуклеиновыми кислотами различных вирусов. [c.332]

До недавнего времени при введении молекул ДНК в клетки млекопитающих наиболее часто использовали кальций-фосфатный и ДЭАЭ-декстрановый методы, так как они достаточно просты и обеспечивают высоковоспроизводимые результаты. Однако активно ведутся поиски других, более простых и эффективных методов трансфекции вирусными ДНК. [c.334]

Микроинъекция вирусных молекул ДНК. А. Грессман (1970 г) для введения молекул ДНК в культивируемые клетки млекопитающих предложил использовать метод микроинъекции. Процедура заключается во введении в клетку (цитоплазму или ядро) малых объемов жидкости (около 10 мкл) с помощью стеклянного микрокапилляра (рис. 13.1). Эксперимент проводится на предметном столике микроскопа с применением микроманипуляторов и микрошприцев. Используя эту методику, удалось изучить биологическую активность молекул ДНК разных вирусов. К достоинствам метода относится то, что определенное количество препарата ДНК можно ввести в выбранную область клетки, в частности в ядро. Недостатком метода является его сложность и невысокая производительность. Кроме того, по-видимому, он применим лишь к небольшим молекулам ДНК, так как при продавливании через микрокапилляр целостность больших молекул ДНК будет нарушаться вследствие гидродинамического сдвига. В силу отмеченных недостатков метод микроинъекции при анализе инфекционности вирусных ДНК используется крайне редко. [c.334]

Использование катионных липидных реагентов. В последние годы разработаны катионные липидные реагенты (липофектин, ли-пофектамин, селфектин и др.), которые обеспечивают простое, быстрое и воспроизводимое введение молекул нуклеиновых кислот в культивируемые клетки млекопитающих и насекомых. Раствор ДНК просто смешивают с фирменным катионным липидным реагентом и наносят на монослой культуры клеток (рис. 13.2). При этом эффективность введения ДНК в эукариотические клетки обычно превышает таковую при использовании ДЭЛЭ-декстранового или кальций-фосфатного методов. [c.335]

Для введения таких молекул ДНК в клетки млекопитающих прежде всего были опробованы методы, ранее разработанные для трансфекции клеток вирусными нуклеиновыми кислотами. Как и ожидалось, они оказались пригодными и в этих случаях. До недавнего времени кольцевые плазмиды и линейные фрагменты ДНК в клетки животных в основном вводили кальций-фосфатным и ДЭЛЭ-декстрановым методами. Когда необходимо осуществить генетическую трансформацию, т. е. интегрировать фрагмент ДНК в геном клетки, предпочтительнее использовать кальций-фосфатный метод, так как он в этом случае обеспечивает ббльшую эффективность. Если требуется сохранить целостность вводимой кольцевой молекулы ДНК, то обычно преимущество имеет ДЭАЭ-декстрановый метод. [c.335]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология