Хроматография фракционированная пептидов

Очистка вещества. Проникающая хроматография используется в основном для очистки высокомолекулярных биологических соединений. С помощью соответствующих гелей или стеклянных гранул проводят разделение и очистку вирусов, белков, ферментов, гормонов, антител, нуклеиновых кислот и полисахарвдов. Методом проникающей хроматографии можно разделять смеси низкомолекулярных соединений, отделять аминокислоты от пептидов, фракционировать пептиды, образующиеся в результате частичного гидролиза белков, а также олигонуклеотиды из гидролизатов нуклеиновых кислот. Используя данный метод, можно выделять низкомолекулярные декстраны из смесей, например из кукурузного масла. [c.99]

Хроматография. Пептиды фракционируют с помощью градиентного элюирования. Стартовый буферный раствор имеет pH 3,Ь Смеситель содержит 2500 мл 0,5 н. буферного раствора pH 5,1. Элюат, вытекающий из колонки, собирают фракциями по 10 мл-Нингидриновую реакцию ставят либо непосредственно с полученным элюатом, либо после его щелочного гидролиза. [c.198]

Хроматография гидролизатов проводилась при +4° С на колонке с фосфоцеллюлозой 2,4x25 см со скоростью 60 мл/час. Химотрипсиновый гидролизат лизоцима фракционировался с возрастающим градиентом pH аммонийно-ацетатного буфера от 3,4 до 9,0 и возрастанием концентрации от 0,02 до 0,3 М. Пепсиновый гидролизат фракционировался с возрастанием pH пиридин-ацетат-ного буфера от 3,9 до 5,4 и возрастанием концентрации от 0,05 до 0,45 М. Фракционирование по такой схеме дает очень хорошее групповое разделение пептидов (до 3—6 пептидов в одном пике). Сопоставление таких групп, полученных действием разных ферментов, позволяет составить полную аминокислотную последовательность исходного белка. [c.185]

Фракционирование пептидов на ионообменных смолах основано на целом ряде принципов, о которых уже говорилось выше (гл. I и II). Сюда входят и различия в электрохимических свойствах разделяемых фрагментов, и различное сродство неполярных радикалов к бензольным кольцам матрицы смолы, и изменение концентрации конкурирующих ионов в буферном растворе. Поэтому элюция пептидов со смолы достигается путем пропускания через колонку буферных растворов изменяющейся ионной силы и pH. Это изменение концентрации ионов и pH может осуществляться линейно или ступенчато. Элюируемые компоненты идентифицируют нингидриновой колориметрией, лиофилизуют (высушивают из замороженного состояния) и проверяют на гомогенность с помощью хроматографии на бумаге и методом пептидных карт. Негомогенные пики фракционируют дополнительно. В качестве примера можно привести разделение пептидов, полученных триптическим гидролизом окисленной (т. е. лишенной дисульфидных мостиков) рибонуклеазы (рис. 11). [c.84]

Основные пептиды, содержащие ё-ДНФ-лизин, можно отделить от бесцветных пептидов "адсорбционной хроматографией на тальке. ДНФ-производные адсорбируются у верхнего конца короткой промытой кислотой колонки с тальком (5 г) посторонние вещества смывают 1 н. соляной кислотой. Смесью 4 частей этанола и 1 части 1 н. соляной кислоты вымывают ДНФ-производные. Смесь е-ДНФ-лизинсодержащих пептидов можно фракционировать на колонке с силикагелем, обработанным 1 н. соляной кислотой (0,5 мл НС1 на г силикагеля), используя в качестве растворителя 66%-ный метилэтилкетон — эфир или этилацетат. [c.158]

Ввиду устойчивости цистинсодержащих пептидов в слабокис-/юй среде (pH 2,0—6,5) для фракционирования используют гель-фильтрацию [8] и ионообменную хроматографию [2, 41]. Гель-фильтрацию проводят на сефадексе в 257о-ной уксусной кислоте [17], ионообменную хроматографию — на катионитах [45]. При фракционировании необходимо прежде всего разделить цистинсодержащие пептиды, отделение их от других пептидов вовсе не обязательно [36, 41]. Прочие пептиды легко отделить на последующей стадии, после окисления цистина в цистеиновую кислоту. Например, пептиды с цистеиновой кислотой можно эффективно фракционировать с помощью высокоэффективной или ион-парной хроматографии [23]. В присутствии фосфорной кислоты достигается почти идеальное разрешение при хроматографии па эффективных колонках в органических растворителях (гл. 6). [c.173]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология