Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Векторы для экспрессии составных генов

    Векторы для экспрессии составных генов [c.283]

    Альтернативные методы скрининга космидных библиотек, описанные в гл. 3, предполагают селекцию космидных клонов с использованием феномена гомологичной рекомбинации in vivo. Остальные главы книги посвящены вопросам, связанным с экспрессией клонированных генов. Для многих белков млекопитающих удалось осуществить высокопродуктивную внутриклеточную экспрессию в Е. oli. Однако гетерологические белки, локализующиеся в цитоплазме, часто образуют трудно растворимые агрегаты, что значительно осложняет получение нативного продукта. В гл. 4 описаны эффективные способы выделения активных растворимых продуктов из нерастворимых белков цитоплазмы Е. соИ. Вероятность деградации специфическими бактериальными протеиназами многих эукариотических белков, синтезируемых в Е. oli, может быть существенно снижена, если их экспрессировать в виде гибридных белков. Такие составные белки, в которых бактериальный компонент обычно представлен -галактозидазой, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антисыворотки и моноклональных антител к клонированному эукариотическому белковому домену. Эти вопросы >ассматриваются в двух главах — одна посвящена получению поликлональной антисыворотки, а другая — методам гибридной технологии. В последующих главах книги описаны современные эукариотические экспрессирующие системы в гл. 7 — дрожжевая, далее в трех главах — системы на основе культивируемых клеток млекопитающих и трансгенные животные. В частности, описана система экспрессии с использованием векторов, которые несут гены, обеспечивающие возможность их индуцибельной амплификации это позволяет снимать токсическое действие антибиотиков, введенных в культуральную среду. Клонированные в таком векторе гены также [c.8]


    Когда клетки растения трансформированы векторами для прямого переноса генов посредством ДНК, сайты встраивания плазмиды, ВОЗМОЖНО, случайны. Таким образом, перенесенная ДНК может представлять собой целую плазмиду или ее части, которые соединены вместе в виде конкатемеров илн встраиваются независимо друг от друга в разные сайты генома. В таком случае следует вначале убедиться в наличии интактных рестрикционных фрагментов, которые содержат изучаемый ген целиком. Дальнейшее исследование может вызвать затруднения. Есть данные, что в некоторых опытах использование линеаризованных векторов для переноса генов посредством ДНК приводит к повышению частоты трансформации. По-видимому, при этом легче образуются конкатемерные структуры, рекомбинация проходит по сайтам, не нарушающим экспрессию большинства копий изучаемого гена (рис. 6.3,Г). В этом случае предсказанные составные фрагменты могут быть выявлены методом блоттинг-гибридизации по Саузерну. [c.317]


Смотреть главы в:

Новое в клонировании ДНК Методы -> Векторы для экспрессии составных генов




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Вектор



© 2025 chem21.info Реклама на сайте