Инактивация фагов и плазмид

ИНАКТИВАЦИЯ ФАГОВ И ПЛАЗМИД [c.278]

Инактивация фагов и плазмид [c.279]

Итак, при облучении фагов и плазмид биологически активный свет поглош,ается преимуш,ественно нуклеиновыми кислотами. Основная фотохимическая реакция, приводящая к их гибели,— образование пиримидиновых димеров и в первую очередь димеров тимина. У РНК-со-держащих вирусов определенный вклад в инактивацию вносят также фотогидраты оснований. [c.282]

I, Р2, Р22, Mul), профаги других фагов присутствуют в клетке в виде самостоятельных репликонов — плазмид (иапример, профаг Р1 Е. соИ). Такие фаги иногда называют фазмидами, подчеркивая их сходство с типичными фагами и с типичными плазмидами. Состояние профага может переходить в состояние лити-ческого развития после индукции. Индукция является следствием инактивации ренрессора. При этом появляется возможность экспрессии генов, ответственных за осуществление литического [c.171]

Эгоистичными являются и системы рестрикции-модифика-ции класса II (см. с. 164), гены которых могут находиться в геномах плазмид, фагов и даже клеток. Поддержание этих систем важно для защиты клетки от проникновения чужДНК. Оказалось, что клетки, потерявшие RM-систему, погибают, способствуя тем самым ее сохранению в популяции (Naito et al., 1994). Механизм заключается в том, что метилаза, оставшаяся в клетке после потери или инактивации RM-системы, не успевает прометилировать множество сайтов на хозяйской ДНК, а рестриктазе достаточно расщепить один сайт, чтобы погубить клетку. [c.159]

В 1980 г описана плазмида pTR262 (Ар> Тс с1+), в которой экспрессия гена tet pBR322 находится под контролем репрессора фага Я. Эта плазмида детерминирует фенотип Тс , но становится Тс> после инактивации фагового гена сГ встройкой в него чужеродных фрагментов ДНК. Поэтому такие гибридные клоны (Ap> Тс> с1 ) легко отбирать на среде с тетрациклином. [c.121]

Изучение механизма регуляции репликации фактора R1 привело Дж. Ларсена с соавторами (1984 г) к созданию нового типа векторных плазмид серии pOU. Поскольку интенсивность репликации плазмиды R1 находится в прямой зависимости от уровня синтеза белкового продукта плазмидного гена герА, авторы сконструировали гибридные плазмиды, у которых в непосредственной близости от гена герА встроен фрагмент ДНК фага Я, содержащий ген l857 и промотор pR, направленный в сторону гена герА. При температуре ниже 35 °С в клетке находится примерно 1 молекула плазмиды серии рОи. При температуре 42 °С в результате инактивации термочувствительного репрессора с1857 происходит дерепрессия промотора pr, приводящая к конститутивной неконтролируемой репликации плазмиды. Уже через 1-2 ч после термоиндукции плазмидная ДНК составляет половину всей ДНК клетки (более 1 ООО копий на клетку). Параллельно с амплификацией плазмиды происходит и сверхсинтез кодируемых ею белков. [c.140]

В одной из первых работ по использованию индуцируемых промоторов в векторную плазмиду — производную pBR322, содержащую в своем составе сильный промотор рь фага Я, встроили ген trp А. Гибридную плазмиду ввели в лизогенные клетки Е. oli, в которых синтезируется термочувствительный репрессор фага Я. При температуре 30 °С продукция триптофан-синтетазы А практически не увеличилась. Однако после термической инактивации репрессора начинает функционировать промотор рь, который при температуре 37 °С направляет сверхсинтез триптофансинтетазы, и выявляемый уровень активности этого фермента возрастает в 30-50 раз. [c.146]

Первый вариант системы экспрессии, зависимой от РНК-полимеразы фага Т7, представлен на рис. 3.5. Ген I фага Т7 в плазмиде pGPl-2 помещен под контроль промотора рь фага Я и при температуре 30 °С находится в репрессированном состоянии за счет воздействия бел-ка-репрессора с1 фага Я. При нагревании бактериальной культуры выше 37 °С происходит инактивация термочувствительного фагового репрессора и индуцируется экспрессия гена фага Т7. Синтезируемая РНК-полимераза фага Т7 интенсивно транскрибирует последовательность ДНК, находящуюся во второй плазмиде (рТ7-1) под контролем промотора рт70Ю, и уровень белка данного целевого гена может составить 30-50 % суммарного клеточного белка. Недостатком рассмотренной системы экспрессии является то, что промотор pL репрессируется белком с1857 не полностью и при температуре 30 °С имеется определенный фоновый синтез РНК-полимеразы Т7, которого достаточно для активной экспрессии гена, встроенного в рТ7-1. Если продукт изучаемого гена токсичен для Е. соН, то и без индукции будет происходить гибель бактериальных клеток. Это лишний раз подтверждает, насколько данная система экспрессии генов эффективна. [c.147]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология