Вирус определение степени чистоты

Полученную заготовку вируса для определения титра и степени чистоты следует протестировать одним или несколькими методами, перечисленными ниже [c.229]

Полученный вирус уже достаточно очищен и может быть использован в различных целях. Кроме того, степень чистоты вируса можно повысить, как описано выше. Очищенный вирус, полученный любым методом, ресуспендируют в дистиллированной воде или в соответствующем буфере. Аликвоты суспензии можно использовать для заражения клеток, подсчета общего числа частиц и определения концентрации белка. Вирус хранят при —70 °С, однако следует учитывать, что оттаивание ведет к частичному разрушению вирусной оболочки. На рис. 10.5 показаны различные вирусные частицы, обнаруженные в препаратах очищенного вируса. [c.281]

Г. ТЕСТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ЧИСТОТЫ ВИРУСОВ [c.47]

Одним из способов определения чистоты вирусных препаратов является метод зонального электрофо-р е 3 а или электрофореза с подвижной границей (см. Физические методы исследования вирусных частиц ). Этими методами определяют подвижность вирусных частиц в электрическом поле. Наличие одного компонента свидетельствует об идентичности поверхностного заряда частиц исследуемой суспензии. Но надо учитывать тот факт, что частицы одного и того же вируса иногда могут быть негомогенны относительно их электрофоретической подвижности [268, 270, 650]. Однако выявить уровень загрязненности можно только до определенной степени концентрации. Ниже этого порога концентрации сопутствующие вещества не образуют достаточно плотной границы передвижения и поэтому не могут быть обнаружены. Это зависит как от чувствительности используемой оптической системы, так и от природы сопутствующих веществ. Обычно с помощью этих методов не удается уловить наличие менее 2—3% загрязнений [729]. В некоторых случаях такая степень очистки бывает достаточной. Но для биохимических и химических анализов подобная степень очистки недостаточна. Этот фактор ограничивает возможность использования методов ультрацентрифугирования и электрофореза для определения степени чистоты и гомогенности вирусов. [c.153]

Методы выделения вирусов простого герпеса довольно сложны по сравнению с другими вирусами. Более того, метод, хорошо зарекомендовавший себя при работе с одним штаммом вируса на определенной клеточной линии, может оказаться неприемлемым для других штаммов на той же линии или того же штамма вируса на других клетках. Поэтому мы опишем два метода. Мы показали, что первый метод можно успешно применять для получения штамма HFEM и некоторых других при условии, что для выращивания вируса используют клетки Нер-2. Данный метод прост и позволяет получать вирусные препараты высокой степени чистоты. Второй метод позволяет достигнуть удовлетворительных результатов со всеми штаммами вируса и различными типами клеток. Для выбора оптимальных условий получения высокого выхода вируса и качественного исходного материала для дальнейшей очистки следует вначале изучить кривую роста исследуемого вирусного штамма на различных линиях клеток. На рис. 10.4 показана кривая роста штамма HFEM на клетках Нер-2 при высокой множественности инфекции и культивировании клеток при 32 °С. Оптимальные условия, которые требуются для приготовления исходного материала, в общих чертах описаны в разд. 2.5.1. [c.279]