Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Термическая инактивация ферментов

    Балластные белки обычно осаждают одним из известных методов фракционирования — избирательной денатурацией. Если фермент устойчив к нагреванию (например, рибонуклеаза выдерживает нагревание до 90° С без инактивации), проводят термическую денатурацию инертных белков, нагревая экстракт определенное время при 50—70° С. Применяют также кислотную денатурацию (подкисляют экстракт до pH 5 или ниже), если выделяемый фермент не инактивируется при данном pH используют и обработку экстракта хлороформом или смесью хлороформа и спирта. Денатурированные балластные белки отделяют от фермента центрифугированием или фильтрацией, а затем из водного раствора путем дробного осаждения (в основе которого лежит различная растворимость белков-ферментов) выделяют фракцию, обладающую наибольшей ферментативной активностью. [c.200]


Рис. 11. Уменьшение эффективной энергии активации Т > Т, связанное с обратимым термическим изменением ферментной глобулы в области активного центра ,—энергия активации при жестком расположении адсорбционного и каталитического участков Д1п/г+2—результат обратимой термической инактивации фермента, приводящей к кажущемуся уменьшению энергии активации Рис. 11. Уменьшение <a href="/info/9472">эффективной энергии активации</a> Т > Т, связанное с <a href="/info/1073530">обратимым термическим</a> <a href="/info/1320939">изменением ферментной</a> глобулы в <a href="/info/1667934">области активного центра</a> ,—<a href="/info/2894">энергия активации</a> при жестком расположении адсорбционного и каталитического участков Д1п/г+2—результат обратимой термической инактивации фермента, приводящей к кажущемуся <a href="/info/593201">уменьшению энергии</a> активации
    Известно, что чем чище выпариваемый раствор фермента, тем больше его термическая инактивация. В то же время глубокое концентрирование исходной культуральной жидкости или водного экстракта неизбежно приводит к значительному изменению их состава, так как выпадают в осадок гидроксиды, карбонаты и сульфаты магния, меди и других двухвалентных металлов, улетучивается аммиак, продукты разложения некоторых органических веществ, заметно изменяется в сторону подкисления и pH. Все это необходимо учитывать и принимать специальные меры для снижения потерь, поэтому иногда перед упариванием в раствор добавляют специальные стабилизаторы белки (альбумин, казеин, БВК), хлорид кальция или натрия, другие соли кальция, которые, впрочем, не должны мешать последующей кристаллизации или другим приемам очистки товарной формы препарата. [c.129]

    В работе [35] при изучении термической денатурации лизоцима методами дифференциальной сканирующей калориметрии нашли, что этот процесс происходит при 74 1°С (ДЯ=120 10 ккал/моль, А5 = 350 э. е.), что почти совпадает с данными для третьего конформационного перехода лизоцима (см. рис. 19), выявленного с помощью ультразвуковой инактивации (71° С, ДЯ=110 ккал/моль, А5 = 320 э. с.). Следует, однако, подчеркнуть, что методы оптического поглощения или дисперсии оптического вращения дают информацию о состоянии всей глобулы фермента в целом, в то время как метод ультразвуковой инактивации отражает конформационное состояние активного центра. В любом случае наличие целого ряда структурных переходов молекулы лизоцима и его активного центра при температурах выше 20° С показывает, что распространение выводов рентгеноструктурного анализа лизоцима, как и других методов структурного анализа фермента, на иные условия следует проводить с достаточной осторожностью. [c.162]


    Вместе с тем, следует отметить, что сырые соевые бобы содержат ингибитор трипсина, уреазу и другие ферменты, угнетающие активность протеаз поджелудочной железы, препятствующие адсорбции в кишечнике ряда микроэлементов [56]. Кроме того, в состав сырой сои входят лектины (гемагглютинины) — белки, обладающие свойством обратимо и избирательно связывать углеводы, не вызывая их химического превращения. В желудочно-кишечном тракте лектины устойчивы к протеолизу. Предполагается, что лектины взаимодействуют с гликокал-ликсом щеточной каймы энтероцитов и повреждают его. Взаимодействие лектинов с углеводами проявляется также в виде агглютинации эритроцитов [57]. Термическая обработка или длительная ферментация соевой муки способствует инактивации антипищевых веществ. Так, экспериментальные данные показали, что скармливание крысам сырого соевого белка сопровождалось гипертрофией поджелудочной железы и тонкой кишки, тогда как у животных, получавших термически обработанную сою, подобных изменений не наблюдалось [58]. [c.512]

    Следует отметить, что биохимические процессы зачастую сопровождаются весьма значительными объемными эффектами. Так, например, по данным Хейманна [89], при термической денатурации некоторых белков объем возрастает на 80—140 см Ыоль. о означает, что равновесие денатурации белков очень сильно зависит от давления можно также полагать, что и объемный эффект активации будет достаточно большим, чтобы вызвать существенное замедление термической денатурации с повышением давления. Действительно, бактериальный вирус Т5 при 68° С и атмосферном давлении инактивируется практически полностью за 60 мин при 490 атм инактивация протекает за это же время всего на 50% [90]. По данным Судзуки и Китамура [91], изучавших влияние давления на термическую инактивацию фермента альфа-амилазы, при давлении ниже 1000 атм инактивация имеет положительный [c.236]

    В одной из первых работ по использованию индуцируемых промоторов в векторную плазмиду — производную pBR322, содержащую в своем составе сильный промотор рь фага Я, встроили ген trp А. Гибридную плазмиду ввели в лизогенные клетки Е. oli, в которых синтезируется термочувствительный репрессор фага Я. При температуре 30 °С продукция триптофан-синтетазы А практически не увеличилась. Однако после термической инактивации репрессора начинает функционировать промотор рь, который при температуре 37 °С направляет сверхсинтез триптофансинтетазы, и выявляемый уровень активности этого фермента возрастает в 30-50 раз. [c.146]

    В данной работе в качестве объекта исследования влияния низкочастотного (НЧ) и высокочастотного (ВЧ) ультразвука на каталитическую активность фермента выбрана уреаза соевых бобов (КФ 3.5.1.5) - гомогексамерный фермент, содержащий по два атома никеля в каждой субъединице и катализирующий гидролиз мочев1шы водой с образованием катионов аммония и карбонат-анионов [10-13].Термическая инактивация уреа- [c.122]

    На рис. 2 зависимости к уреазы от температуры представлены в координатах Аррениуса температурному ходу термической инактивации (7) соответствует энергия активации Е ) 21.9 ккал/моль, в то время как Е инактивации уреазы в УЗ-поле существенно снижается и равняется 17.12 ккал/моль или 16.6 ккал/моль при вычитании термической составляющей из величин /син ( ) Таким образом, активационный барьер инактивации уреазы в поле УЗ-кавитации на 5.3 ккал/моль ниже, чем при термически инициированной инактивахщи фермента в [c.124]

    Производства подобного рода предъявляют к используемым в них технологическим процессам особые требования, обусловленные специфическими свойствами целевых продуктов — лекарственных препаратов. Одно из таких свойств, присущее, например, антибиотикам, некоторым витаминам, алколоидам, ферментам и гормонам белкового происхождения, а именно — химическая и термическая нестабильность, обуславливает особенно жесткие ограничения, налагаемые на технологические процессы выделения и очистки лекарственных веществ. Эти ограничения касаются как химических (кислотность, наличие катализаторов, окислительновосстановительные свойства реагентов), так и термических условий проведения процесса. Существенным образом возрастает в подобных производствах роль фактора времени, а следовательно, и кинетики процесса слишком большая продолжительность последнего даже при наличии оптимальных условий по всем остальным параметрам нежелательна, так как обуславливает дополнительные потери целевого продукта и ухудшение его качества из-за инактивации части его молекул. Поэтому предпочтение отдается более быстро идущим процессам, пусть даже они и протекают с меньшей полнотой. [c.302]

    Определение термостабильиости фермента. Термическую стабильность пероксидазы определяли по скорости инактивации ее в растворе при [c.76]


Смотреть страницы где упоминается термин Термическая инактивация ферментов: [c.57]    [c.57]    [c.77]    [c.101]    [c.164]    [c.124]    [c.65]    [c.24]    [c.443]    [c.332]    [c.123]   
Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.101 ]




ПОИСК







© 2024 chem21.info Реклама на сайте