Акриламидные гели

Еще лучшее разделение дает диск-электрофорез [40, 41], при котором используют дискретную (прерывающуюся) разделительную систему из различных буферных растворов и работают с акриламидными гелями, имеющими различные размеры пор. Несколько (минимум два) слоев геля с различными pH наслаивают один на другой, благодаря чему процессу разделения предшествует концентрирование компонентов и в результате получаются очень узкие полосы белков. [c.351]

Основным преимуществом этих разделительных матриц является их УФ-проницаемость в области длин волн ниже 260 нм. Низкая токсичность этих полимеров по сравнению с мономером акриламидом упрощает работу с этими растворами и их хранение. К тому же эти полимеры при применяемых концентрациях менее вязки, так что может проводиться их замена после каждого анализа. Однако, для некоторых длин ДНК они дают меньшую разрешающую способность, чем акриламидные гели. Эти гели [c.102]

Чистые акриламидные гели (Линейные, не поперечносшитые полиакриламидные гели) [c.99]

Название студень для полимерных систем было предложено Н. П. Песковым. В настоящее время понятия студень и гель смешивают. Например, структурированную среду для электрофоретического разделения называют поли.акриламидным гелем. [c.224]

Поскольку микроорганизмы и бактерии чз ствительны к изменениям окружающей среды, для их иммобилизации используют преимущественно мягкие методы, такие как включение в гель или физическую адсорбцию. Обычно применяют акриламидные гели, желатин, коллаген, латекс натурального каучука, эфиры целлюлозы. Проблема селективности решается подбором соответствующей питательной среды, в которой действие других ферментов подавляется, а также выбором оптимальных условий регистрации [c.505]

Электрофокусирование. В отличие от описанных методов, при которых работают с постоянным pH, здесь электрофорез осуществляется в градиенте pH на основе амфотерных молекул (коммерческие препараты) или уже фиксированных (иммобилизованных), добавляемых в акриламидный гель. В этих условиях белки мигрируют до тех пор, пока не достигнут зоны pH геля, которая соответствует их изоэлектрической точке рН1 (или в этом случае их суммарный заряд равен нулю). Каждая из фракций фокусируется в очень тонкие полосы, что обеспечивает разрешение, обычно недостижимое при других методах. [c.40]

Широкое распространение в некоторых странах находят различные методы включения фермента в гель. В процессе полимеризации геля молекулы фермента часто связываются, и тогда фермент оказывается заключенным внутри ячеек геля. Размеры пор геля должны быть меньше размера молекул фермента, но они не должны препятствовать доступу субстрата к ферменту. Для иммобилизации ферментов и целых клеток микроорганизмов широко используют акриламидный гель. [c.205]

Флюорография пластин акриламидных гелей [c.377]

Примеры использования акриламидных гелей в аффинной хроматографии включены в табл. 11.1. [c.205]

Связывание химотрипсина и глицина на сферонах семи типов приведено в табл. 8.1. Гели образуют правильные сферические гранулы и различаются по химической и физической стабильности. Они хорошо выдерживают хроматографию под давлением и не меняют свою структуру после 8-часового нагревания при 150°С в 1 М растворе гликолата натрия или после 24-часового кипячения в 20%-ной соляной кислоте. Они биологически инертны и, подобно акриламидным гелям, не атакуются микроорганизмами. С ними можно работать в ирисутствии органических растворителей, которые имеют некоторые преимущества при связывании [c.205]

Смесь амфолитов, например, со значением р1 3—10 имеет pH 6,5. Для создания градиента pH ее помещают в стабилизированную с помощью градиента плотности или акриламидного геля среду контакт электродов с амфолитами достигается с помощью промежуточных растворов кислот и оснований. Амфолиты вблизи анода (кислая среда) приобретают положительный заряд и постепенно вытесняются амфолитами с изоточкой, лежащей в более кислой области. Аналогичным образом большая часть основных амфолитов концентрируется вблизи катода, а амфолиты с промежуточными свойствами располагаются между электродами в соответствии с их изоточками. Образующийся градиент pH устойчив до тех пор, пока подается напряжение. [c.302]

МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ АКРИЛАМИДНЫХ гелей И ПРИСОЕДИНЕНИЯ К НИМ АФФИННЫХ ЛИГАНДОВ [c.22]

Один из типов энзимного электрода сконструирован с применением слоя акриламидного геля (60—350 мкм толщиной), в котором фиксировалась уреаза, на поверхности стеклянной мембраны. Когда такой электрод помещали в раствор, содержащий мочевину, субстрат диффундировал в гелевый слой иммобилизованного энзима и подвергался гидролизу в соответствии с уравнением (XI.8). Образующийся ЫЩ регистрировался NH -селектив-ным стеклянным электродом [28]. [c.331]

Жидкий слой 20 мг L-AKO/мл Акриламидный гель 100 мг L-AKO на 1 мл раствора геля Жидкий слой 100 мг L-AKO/мл То же, но хранение в фосфатном буферном растворе [c.337]

На тонких слоях акриламидных гелей были разделены белки [130, 131, 322, 343], ферменты [344] и глобулины [345, 346]. [c.169]

Препаративный электрофорез в акриламидном геле может быть использован на любой стадии очистки гибридного белка для его выделения в качестве неповрежденного, но денатурированного иммуногена. ДСН-лизаты клеток, полученные, как описано выше в разд. 5.3.2, после осветления центрифугированием могут быть непосредственно нанесены на гель. Белок примерно из 15 мл клеток, лизированных в 1,25 мл буфера для нанесения, содержащего 1,5% ДСН, можно исследовать, используя одну пластину геля с площадью поперечного сечения 2,0 см . [c.155]

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ БЕЛКОВ КАРТОФЕЛЯ В АКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ [c.73]

В результате получается набор меченых фрагментов, длины которых определяются расстоянием от разрушенного основания до конца молекулы. Фрагменты, образовавшиеся во всех четырех реакциях, подвергают электрофорезу на четырех соседних дорожках в акриламидном геле в денатурирующих условиях затем проводят радиоавтографию, и фрагменты, содержащие радиоактивную метку, оставляют отпечатки на рентгеновской пленке. По их положению можно определить, на каком расстоянии от меченого конца находилось разрушенное основание, а зная это основание — его положение. Так, по набору полос на рентгеновской пленке определяют нуклеотидную последовательность анализируемого фрагмента ДНК. [c.30]

Все используемые методы определения нуклеотидной последовательности сводятся к тому, чтобы получить серию одноцепочечных молекул ДНК, различающихся по размеру на одно основание. Такие молекулы можно разделить с помощью электрофореза в акриламидном геле. Полосы, соответствующие молекулам различной длины, образуют лестницу длиной до 300 нуклеотидов. [c.49]

Как показано на рис. 29.5, это наблюдение коррелирует со свойствами отдельных нуклеосом. Анализ выделенных частиц представлен в верхней части рисунка. Препарат нуклеосом был расфракционирован на мономеры, димеры, тримеры и т.д. методом седиментации в градиенте концентрации сахарозы. Затем очищали ДНК из каждой фракции и анализировали с помощью электрофореза в акриламидном геле. [c.361]

При гель-фильтрации наиболее употребительны два типа гелей гели, полученные путем ферментирования декстрана (сефадексы), и синтетические гели акриламида (биогели). Акриламидные гели обладают низкой адсорбционной способностью, поэтому при равной разрешающей способности для них характерен больший выход фракционируемого вещества, чем для гелей декстрана. [c.37]

Диск-электрофорез в акриламидном геле, содержащем мочевину. Раствор А 8М раствор мочевины (24,0г перекристаллизован-ной мочевины растворяют в 50 мл деионизованной воды и муравьиной кислотой доводят pH до 3,2). Раствор Б 30%-ный цианогум. Раствор В 0,12 мл N, N, N, N -тетраметилэтилендиамина (ТЕМЭД) в 25 мл раствора А. Раствор Г насыщенный раствор персульфата калия. [c.92]

ОЕАЕ-сефадекс (pH 8,5) Электрофорез в акриламидном геле [c.20]

Рис, 36,7. Исследование зависимости электрофоретической подвижности изоферментов, арилсульфатазы от концентрации акриламидного геля по методике, описанной в работе [62]. [c.21]

Производные полиакрилгидразид-сефарозы ведут себя как идеальные нерастворимые носители для аффинной хроматографии. Они сохраняют свойства сефарозы, в особенности минимальное неспецифическое взаимодействие с белками, хорошие фильтрующие свойства и высокую пористость. Кроме того, они механически и химически устойчивы. Эти производные обладают также преимуществами акриламидных гелей. При нейтральных pH они не несут заряда и содержат большое число групп, способных модифицироваться. [c.216]

Больщая часть иммобилизованных ферментных систем, хотя и необязательно все из них, соответствует этой схеме. Рекомендовано вводить символы ВКЛ, МИК, АДС и КСВ между названием носителя и фермента, характеризуя тем самым любой из четырех классов иммобилизованных ферментов. Так, например, трипсин, ковалентно связанный с карбоксиметилцеллюлозой, следует обозначать как КМ-целлюлоза-КСВ-тр Инсин, уреазу, включенную в капсулу из найлона,— как найлон-МИК-уреаза, а глюкоамилазу, включенную в полиакриламидный гель,— ак акриламидный гель-ВКЛ-глюкоамилаза. [c.421]

Получение препаратов лектинов осуществляют главным образом при помощи аффинной хроматографии. Во многих случаях для этого используют сефарозу, в которую вводят моносахаридные остатки, на которых предполагают связать нужный лектин. В других случаях пользуются акриламидным гелем, который сополимеризуют с алкенил-О-гликозидами последние должны связать лектин. Существуют и другие способы. [c.98]

Гюильбо и Монтальво [449 — 452] установили, что уреаза, иммобилизованная, в полиакриламидном геле, обладает высокой каталитической активностью, и описали конструкцию нескольких видов преобразователя мочевины , применяемого для непрерывного определения мочевины как субстрата. Такой преобразователь мочевины можно назвать уреаз-электродом, так как его получают, нанося тонкую пленку иммобилизованной уреазы на катионный стеклянный электрод (Бекман 39137 или 39047), чувствительный к ионам а.ммония. Специфичность к субстрату. мочевине, проявляется после иммобилизации фермента в слое акриламидного геля на поверхности стеклянного [c.153]

Электроды на аспарагин и глутамин были получены также (см. выше) иммобилизацией соответствующих ферментов на стеклянной головке катионного электрода. Электродная функция аспарагинового электрода стабильна приблизительно в течение 3 недель, оптимальное pH составляет 7,5 —8,5. Нестабильность глутаминового электрода объясняется либо обычным вытеканием фермента из электрода в раствор, либо его разложением [545]. Электрод с иммобилизованной глутами-назой в акриламидном геле на стеклянной головке катионного электрода в соответствии с методикой, описанной Гюильбо и Монтальво [449 — 451], имеет нернстову зависимость потенциала от концентрации в диапазоне концентраций 10- —10- М, а его время отклика равно всего 1—2 мин. Электродом можно пользоваться непрерывно около [c.188]

Фирма Ko h-Light Laboratories Ltd. (Лондон, Англия) выпускает полиакриламидные гели под названием энзакрил . Как будет показано ниже, эти акриламидные гели содержат различные функциональные группы, к которым можно присоединять различные аффинные лиганды. [c.22]

Применение акриламидных гелей в аффинной хроматографии в настоящее время весьма ограниченно. Куатреказас [14] показал, что выделение относительно малой молекулы нуклеазы стафилококков можно проводить не только на сефарозе, но и на биогеле Р-300, однако для выделения больших молекул, например р-галактозидазы [84], этот гель мало пригоден из-за низкой пористости. [c.39]

Попытки разделить антибиотик с помощью ионообменной хроматографии, препаративным электрофорезом на акриламидном геле, проти-воточным распределением по Крейгу не увенчались успехом. В лучшем случае получалась смесь веществ, в которой содержание пролина увеличивалось до 0,4—0,6 моль1моль антибиотика. Однако при использовании метода гель-фильтрации на колонке с сефадексом 0-25 нам удалось получить биологически активный компонент антибиотика А-128, [c.399]

Причиной низкого включения метки и образования коротких транскриптов часто могут служить факторы, перечисленные выше в разд. 1.3.4.1 и 1.3.4.2, так же как и загрязнение буферных растворов РНКазой. Если все указанные факторы исключены, то тогда, возможно, матрица содержит один или несколько терминаторов транскрипции. Такое препятствие в свою очередь можно преодолеть, увеличив концентрацию нуклеотидов. Если же и это не помогает или если это нежелательно из-за необходимости получить определенную удельную радиоактивность, возможно, целесообразнее переключиться на получение другого, более короткого транскрипта. В работе Крига и Мелтона [6] показано также, что в одном случае снижение температуры транскрипции с 40 до 30 °С привело к увеличению выхода полноразмерных транскриптов. По-видимому, можно использовать такой подход. Если ни одно из перечисленных изменений методики не дает желаемого результата, не остается другого выхода, кроме как выделять полноразмерные транскрипты из суммарного материала, фракционированного в агарозном или акриламидном геле. [c.27]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология