Применение процедур окрашивания

Применение процедур окрашивания [c.206]

Процедура окрашивания представляет собой модифицированную процедуру с использованием гемотоксилина, подобную той, что нашла применение в обычной клинической цитологии. После того как клетки окрашены и должным образом обесцвечены, мембрана обезвоживается в абсолютном этаноле. Существенно, чтобы вся вода была удалена на этой стадии, иначе на следующей стадии мембрану не удастся сделать достаточно прозрачной. Чтобы мембрану сделать прозрачной, ее помещают в ксилол, а затем в раствор для заключения препаратов. Фирма Миллипор продает прямоугольные мембраны, которые без разрезания устанавливаются непосредственно на предметном стекле микроскопа. После этого мембрана накрывается покровным стеклом и высушивается в течение 15—20 мин при температуре 50 °С. [c.233]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология