Процедура окрашивания

Возможность полного удаления не связывающегося с белком фуксина из бумаги является преимуществом этого метода, особенно удобного при количественном определении фракций с помощью элюирования (см. стр. 60). Одну и ту же порцию окрашивающего или дифференцирующего растворов можно использовать 4—5 раз. При первых отмывках новой серии электрофореграмм можно использовать последние порции отмывающего раствора из предыдущей процедуры окрашивания. [c.55]

Окрашивание по Граму. Клеточная стенка, по-видимому, ответственна также за окрашивание по Граму. Способность или, наоборот, неспособность окрашиваться в темно-фиолетовый цвет при использовании метода, предложенного в 1884 г. Грамом, служит важным таксономическим признаком, с которым коррелируют другие свойства бактерий. Процедура окрашивания по Граму начинается с обработки фиксированных бактериальных клеток основным красителем кристаллическим фиолетовым. Затем следует обработка раствором иода. Иод образует с кристаллическим фиолетовым комплекс, нерастворимый в воде и плохо растворимый в спирте и ацетоне. После этого клетки дифференцируют , обрабатывая их спиртом грам-положительные клетки удерживают при этом комплекс краситель—иод и остаются синими, а грам-отрицательные обесцвечиваются. Для того чтобы сделать их видимыми, их дополнительно окрашивают контрастным красителем фуксином. [c.50]

Природные субстраты протеаз также пригодны для выявления этих ферментов после электрофореза. Гели инкубируют с белками, а затем окрашивают и обесцвечивают обычными для белков методами. Бесцветные или слабо окрашенные полосы появляются в местах действия протеолитических ферментов. Во многих случаях применяют окрашенные белки, что позволяет избежать трудоемких процедур окрашивания и обесцвечивания. [c.303]

Было показано, что помещение ПААГ-электрофореграммы последовательно в гипер- и гипотонический растворы дает возможность обнаруживать с помощью комплексов серебра 10 фг белка [285]. В то же время в исходном варианте процедура окрашивания солями серебра многостадийна, трудо- [c.303]

Применение процедур окрашивания [c.206]

Отмывка несвязанного красителя из геля может занимать много времени. Процедура окрашивания должна быть достаточно длительной, чтобы краситель мог проникнуть в середину геля, после чего избыток красителя удаляют. Продолжительность окрашивания и отмывки красителя очень сильно зависит от толщины геля — поэтому в современных методах прослеживается тенденция использовать гели толщиной до 1 мм и меньше. Следует отметить, что в крахмальных гелях, которые после фик- Сации становятся непрозрачными, окраска белковых зон регистрируется только в очень тонком поверхностном слое геля, поэтому вся процедура окрашивания и отмывки излишка красителя занимает лишь несколько минут. [c.326]

С целью подсчета бактерий на мембранном фильтре в качестве красителя обычно применяют эритрозин. Даубнер и Петер [57] дают подробное описание процедуры окрашивания в этом случае. Для фильтрования подбирают объем воды, такой, чтобы всякий раз в поле иммерсионного микроскопа было видно по меньшей мере 30 окрашенных бактерий. После фильтрации быстро фиксируют бактерии пропусканием через мембрану 5 мл 5 %-ного раствора формалина (эту операцию можно не проводить, если в пробе нет патогенных бактерий). После окончательной промывки дистиллированной водой мембрану сушат на воздухе около получаса в прикрытой сверху чашке, затем пеоеносят ее в чашку, содержащую толстую фильтровальную бумагу, насыщенную 3 %-ным раствором эрит-розина в 5 %-ном феноле. Оставляют мембрану в контакте с красителем на 30 мин, затем несколько раз промывают ее водой (также с помощью фильтровальной бумаги), пока мембрана не будет иметь лишь слабый розовый цвет. При правильном приготовлении мембрана под микроскопом будет казаться бесцветной или слегка розоватой, а бактерии будут красными и хорошо контрастировать с мембраной. После окраски и высушивания мембрану делают прозрачной в иммерсионном масле и исследуют под покровным стеклом с помощью масляно-иммерсионного объектива. Замечено, что для обнаружения в поле зрения микроскопа статистически надежного числа бактерий необходимо отфильтровывать достаточное количество воды. Вообще говоря, для надежного подсчета необходимо около 30 бактерий на поле и подсчет следует вести по достаточно большому числу полей, чтобы стандартная ошибка снизилась до допустимого уровня. Некоторые общие правила статистического подсчета рассматриваются в разд. 8.8. [c.210]

Процедура окрашивания представляет собой модифицированную процедуру с использованием гемотоксилина, подобную той, что нашла применение в обычной клинической цитологии. После того как клетки окрашены и должным образом обесцвечены, мембрана обезвоживается в абсолютном этаноле. Существенно, чтобы вся вода была удалена на этой стадии, иначе на следующей стадии мембрану не удастся сделать достаточно прозрачной. Чтобы мембрану сделать прозрачной, ее помещают в ксилол, а затем в раствор для заключения препаратов. Фирма Миллипор продает прямоугольные мембраны, которые без разрезания устанавливаются непосредственно на предметном стекле микроскопа. После этого мембрана накрывается покровным стеклом и высушивается в течение 15—20 мин при температуре 50 °С. [c.233]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология