Приготовление раствора нингидрина

Приготовление реактивов. Раствор нингидрина. Навеску 0,2 г нингидрина растворяют в смеси 35 мл метилового спирта и 5 мл 2 н. раствора уксусной кислоты в воде. [c.152]

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРА НИНГИДРИНА [c.248]

Спектрофотометрическое определение (реакция с нингидрином) [119]. Смешивают 1 мл анализируемого раствора, содержащего 0,05—5,6 мкг аминного азота, с 0,5 мл нитратного буферного раствора (pH 5) и 0,2 мл 5%-ного раствора нингидрина в метил-целлозольве. Для приготовления указанного буферного раствора 21,008 г моногидрата лимонной кислоты растворяют в 200 мл воды, прибавляют 200 мл 1 н. раствора едкого натра и разбавляют водой до 500 мл. К 1 мл полученного раствора, содержащего аминокислоту и нингидрин, приливают 5 мл 0,01 М раствора цианида калия и 245 мл метилцеллозольва. Смесь нагревают в течение 15 мин до 100 °С, затем 5 мин охлаждают и разбавляют спиртом до соответствующего объема. Измеряют оптическую плотность при 570 нм (в случае пролина и гидроксипролина при 440 нм). Аналогичный метод описан в работе [120]. [c.174]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

Имеется много методик приготовления раствора нингидрина при этом принимают меры для устранения примеси продукта окисления реактива и вообще для более благоприятных условий реакции. Запасной раствор нингидрина рекомендуют хранить в темноте и в холодильнике. Следует пользоваться свежеприготовленным 1—3%-ным раствором нингидрина в 50%-ном спирте. Для выполнения этой задачи вместе с фотометрическим определением достаточно приготовить 10 мл такого раствора. [c.69]

При обнаружении тиофена как примеси в бензоле или толуоле выпаривают досуха несколько капель растворителя с небольшим количеством серной кислоты. При этом тиофен пре вращается в сульфокислоту, которая остается в серной кислоте Ее обнаруживают с помощью нингидрина (используют приготовленный 1%-ный раствор в концентрированной серп [c.270]

Приготовление кадмий-нингидрина. 1,0 г нингидрина растворяют в 100 мл ацетона. 100 мл ацетата кадмия растворяют в 10 мл дистиллированной воды и прибавляют 5 мл уксусной кислоты. Оба полученных раствора объединяют и хранят в склянке из темного стекла. [c.193]

Аминокислоты анализируют также, превращая сначала альдегиды, полученные при окислении нингидрином, в эфиры [3]. Летучие альдегиды отгоняют в щелочной раствор перманганата и окисляют до соответствующих карбоновых кислот. Кислоты извлекают в виде натриевых солей и затем подвергают этерификации. Эфиры разделяют методом ГЖХ на колонке с поли-(пропиленгликольадипатом) при 150° и скорости потока азота 10 мл/мин. Метилтиопропионовый альдегид, полученный из метионина, при окислении расщепляется, а эфиры, образовавшиеся из лейцина и изолейцина, не отделяются друг от друга. При таких условиях приготовления определяют только аминокислоты, образующие летучие альдегиды. Поэтому метод ограничен определением аланина, валина, норвалина, лейцина с изолейцином и фенилаланина. Перед хроматографическим разделением эти вещества выгодно превратить в эфиры, поскольку они химически устойчивее альдегидов. Однако их лучше превращать в метил ацетали, если только будет найден простой метод получения безводных альдегидов. [c.539]

Приготовление коллидин-нингидрина. 5,0 г нингидрина растворяют в 955 мл ацетона, затем добавляют 25 мл уксусной кислоты и 20 мл коллидина. [c.193]

Вырезают бумажные полосы шириной 2,5—3 см и длиной 20 см от точки А (см. рис. 15, стр. 113). На узкую часть вырезанных образцов бумаги наносят каплю приготовленного раствора аминокислот и полосы бумаги для получения восходящей хроматограммы помещают в камеру (см. рис. 14, стр. 113), на дно которой предварительно наливают смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 5). Дают растворителю подняться до верхних концов бумажных полос. По окончании развития хроматограммы бумажные полосы вынимают из камеры, сушат и проявляют, погружая в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Для развития окраски хроматограммы помещают в сушильный шкаф при 60 °С на 15—20 мин. Путем сравнения хроматограмм, полученных на различных образцах бумаги, и определения Rf для каждой аминокислоты решают вопрос о разделительной способности изученных образцов бумаги. [c.140]

Ход определения. Для анализа отбирают по 5 лгл поглотительного раствора в колориметрические пробирки, прибавляют по 0,1 мл аскорбиновой кислоты, по 0,5 мл пиридина и по I жл раствора нингидрина. Растворы взбалтывают и пробирки помещают на 15 мин в кипящую водяную баню. По охлаждении сравнивают интенсивность окраски исследуемых растворов со стандартной шкалой, приготовленной одновременно и в одинаковых условиях с пробами (табл. 44). Фотометрирование окраски можно произво- [c.112]

Определение методом хроматографии на бумаге. Оля обнаружения используют комплексное соединение нингидрина с медью [121]. После разделения высушенную хроматограмму протягивают через смесь 90 мл 0,5%-ного раствора нингидрина в ацетоне, 5 мл воды и 5 мл ледяной уксусной кислоты и высушивают 15 мин при 90°С. Затем бумагу пропитывают раствором соли меди, для приготовления которого к 1 мл насыщенного раствора нитрата меди прибавляют 0,02 мл 65%-ной азотной кислоты и доводят ацетоном до 100 мл. Высушивают в течение 30 мин при комнатной температуре в темном месте. Пятна аминокислот вырезают, окрашенное вещество экстрагируют в пробирке 8 мл метилового спир- [c.174]

Приготовление нингидринового реактива в сосуд из оранжевого стекла вместимостью 1 л помещают 375 мл монометилового эфира этиленгликоля (ТУ 6-09-08-4398-77), прибавляют 125 мл натрий-ацетатного буферного раствора pH 5,5, при перемешивании на магнитной мешалке пропускают азот в течение 10 мин, затем прибавляют 10 г нингидрина и вновь пропускают азот в течение 10 мин, продолжая перемешивание на магнитной мешалке до полного растворения нингидрина. После этого прибавляют 0,19 г олова двухлористого 2-водного и перемешивают. [c.35]

Нингидрин, 0,257o-ный раствор в этаноле. Перед приготовлением раствора нингидрин перекристаллизовывают. Для этого 5 г нингидрина растворяют в 25 мл 2н. соляной кислоты и добавляют [c.54]

Для обнаружения N-мeтилaминoки лoт (которые обычно дают очень слабую окраску с нингидрином) в присутствии свободных аминокислот используют специальный реагент. Смешивают равные объемы 0,33%-ного раствора нингидрина в трет-бутиноле и смеси ледяная уксусная кислота - вода - пиридин (1 5 5). Опрыскивают и нагревают 10-15 мин при 100-110°С. Первичные амины и Н-метиламинокислоты дают пурпурные пятна сравнимой интенсивности. При опрыскивании водным раствором нингидрина, приготовленным путем растворения нингидрина в н-бутаноле, насыщенном водой и содержащем 2% уксусной кислоты, N-мeтилaминoки лoты дают пятна слабой интенсивности. [c.390]

Приготовление реактива. Смешивают 50 мл 5%-ного раствора нингидрина в метилцеллозольве с 5 мл 0,01 М раствора K N, затем доводят объем до 300 мл метилцеллозольвом. [c.171]

Приготовление N- N-индикaтopa ). Раствор / представляет собой 0,2% -ный раствор нингидрина в смеси 50 мл абсолютного спирта, 10 мл ледяной уксусной кислоты и 2 лгл 2,4,6-коллидина раствор Я— 1%-ный раствор трехводного гидрата азотнокислой меди в абсолютном спирте. [c.585]

После гидролиза в каждый образец добавляют ледяную уксусную кислоту (0,22 мл) из каждой пробирки берут аликвоту (1 мл) и прибавляют свежеприготовленный нингидриновый реагент (1 мл). Для приготовления нингидринового реагента растворяют нингидрин (2 г) и гидриндантоин (0,15 г) в метил-целлозольве (75 мл) и добавляют 4,0 М натрийацетатный буфер (pH 5,5 25 мл) [8, 9]. [c.70]

Нингидриновый реактив. Приготовление нингидринового реактива 40 мг ЗпСЬ 2НгО растворяют в 25 мл цитратного буферного раствора и добавляют 4,0 мг нингидрина, предварительно растворенного в 12,5 мт метилцеллозольва. Реактив готовят непосредственно перед опытом. [c.70]

После окрашивания электрофореграмм ацетон-нингидрино-вым раствором их необходимо зафиксировать. Для приготовления фиксатора смешивают 10 мл водного насыщенного раствора СиЫОэ, 0,2 мл азотной кислоты и 200 мл ацетона и полученную [c.99]

Приготовление реактива. Растворяют 0,25 г нингидрина при 70 °С в смеси 4 мл Н3РО4 (1 1) и 6 мл ледяной уксусной кислоты. [c.169]

Приготовление реактива. Растворяют 75 мг d b, 6 мл воды, 0,3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 г нингидрина в 100 мл ацетона. [c.170]

При приготовлении описанного выше нингидринового реагента нам не раз приходилось встречаться с трудностями. Эти трудности обычно приписывались качеству метилцедлозольва. Важно, чтобы метилцеллозольв не только не содержал следов перекисей (<3 млн. д.), которые мешают протеканию цветной реакции с нингидрином, но и не вызывал помутнения раствора, как это бывает с некоторыми партиями, после контакта с воздухом (особенно если последний попадает при перемешивании нингидринового реагента). При использовании такого недоброкачественного метилцеллюлоза в ходе анализов образуется белый осадок, который удерживается на внутренних стенках трубки реактора и в кюветах колориметра. Этот осадок не похож на гидриндантин, так как он нерастворим в метилцеллозольве, но растворяется в разбавленной кислоте. Для уменьшения образования этого осадка после нингидринного насоса помещают специальный фильтр. [c.55]

Реактивы и их приготовление. 1. Трилон Б, 0,5%-ный раствор. 2. Серный эфир. 3. Спирт этиловый ректификат. 4. Соляная кислота плотностью 1,19 г/см 5. Нингидрин, 0,5%-ный раствор в ацетоне. Этот раствор надо хранить в темной склянке с пришлифованной пробкой в холодильнике. 6. Сернокислая медь 0,005 %-ный раствор в 75%-ном этиловом спирте. П р и го то в л е-ние. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют в 22 мл дистиллированной воды 5 мг пятиводной сернокислой меди (Си504-5Н20) и объем доводят до метки, прибавляя 96%-ный этиловый спирт. 7. Хроматографическая бумага марки Б. Подготовка бумаги. Для удаления из хроматографической бумаги всех веществ, которые мещают проведению анализа аминокислот, ее обрабатывают раствором трилона Б. Лист хроматографической бумаги разрезают пополам, погружают в банку с 0,5%-ным раствором трилона Б и оставляют на 3 суток. Затем бумагу вынимают из раствора трилона Б и погружают в проточную водопроводную воду. После отмывки трилона Б бумагу сушат в вытяжном шкафу при полном отсутствии даже следов соляной кислоты. (Обязательно работать в резиновых перчатках ) 8. Растворитель 1. Приготовление. Готовят смесь н-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 4 1 5. В делительную воронку вливают 40 мл -бутанола, 10 мл ледяной уксусной кислоты (обязательно 100%-ной) и 50 мл дистиллированной воды. Смесь энергично взбалтывают в течение [c.218]

С — поправка на реактивы — холостой опыт. Для него не нужно прибавлять нингидрин или греть в водяной бане. Просто 5 мл 1%-ной пикриновой кислоты помещают в реакционный сосуд, кипятят одну минуту для удаления растворенной СО2. Раствор охлаждают, эвакуируют и далее ведут определение в аппарате Ван-Слейка, как обычно. Поправка С—величина Р — / 2, найденная в холостом опыте. В холостом опыте СО2 происходит из следов карбоната в растворе едкого натра. Если раствор этот хранится защищенным от воздуха трубкой со щелочью, то поправка постоянная она не должна быть больше 30 мм при объеме 0,5 мл, если раствор NaOH приготовлен, как указано. [c.148]

Для выявления неомициновых антибиотиков на хроматограммах вначале применяли биоавтографию [58, 59, 791, 1184, 1238], но затем были найдены более простые, химические методы. Сре-111 них наиболее часто используют реакцию с нингидрином [247, 1238—1241]. Эта реакция непригодна для ацетильных производных неомицинов [1193]. Хроматограммы обрабатывают раствором гипохлорита натрия, высушивают на воздухе и помещают в 95%-ный спирт. Далее опрыскивают смесью равных объемов 1 %-ного раствора крахмала и 1%-ного раствора иодистого калия. При этом ацетильные производные неомицинов выявляются в виде темно-синих пятен на бледном фоне. Разработана другая модификация этого метода, пригодная для количественных определений [360]. Хроматограммы помещают на 20 мин. при ко.мнат-ной температуре в раствор хлора в четыреххлористом углероде. Для его приготовления хлор, полученный из 100 мл соляной кислоты и 50 г перманганата калия, пропускают через воду и концентрированную серную кислоту и затем растворяют в 1 л четыреххлористого углерода. Раствор после прибавления примерно 5 г карбоната бария и 5 г плавленого хлористого кальция хранят в темной склянке. Хроматограммы высушивают на воздухе в течение 30 мин. при 4—6° в темноте и обрабатывают крахмальным реагентом 1 г крахмала и 0,25 г иодистого калия растворяют при нагревании в 3,5 мл воды, 0,5 мл этого раствора быстро добавляют к 50 мл пиридина. Для обработки хроматограмм используют свежеприготовленный раствор. [c.197]

Группу аминов анализировали методом тонкослойного электрофореза [16] на слоях силикагеля О, приготовленного с добавкой 3 %-ного раствора борной кислоты. В качестве электролита применяли смесь 80 мл этанола, 30 мл дистиллированной воды и 2 г кристаллического ацетата натрия. Величину pH доводили до 12 40 %-ным раствором гидроксида натрия. Напряженность поля составляла 10 В/см. Третичный амин три-этаноламин обнаруживали щелочным раствором перманганата, а остальные амины нингидрином. Хонеггер [17] описал двумерное разделение группы аминов в одном направлении проводился электрофорез, в другом — хроматографирование. [c.457]

Помимо рассмотренных реакций Абдергальденом и Швабом [19] был использован также метод приготовления дикетопиперазинов, связанных с аминокислотами, не непосредственным действием друг на друга этих веществ, а циклизацией трипептидов. Полученные трипептиды, синтезированные по Фишеру, переводились в соответствующие метиловые эфиры и оставлялись в аммиачном растворе метилового спирта при комнатной температуре. Во всех случаях через определенные промежутки времени были получены кристаллические вещества, которые давали положительную ангидридную реакцию в содовом растворе с пикриновой кислотой, отрицательную нингидринную реакцию и не содержали свободных аминных групп. Но [c.310]

Для увеличения чувствительности пробы нингидрин растворяют в нитратном буфере с pH 5, приготовленном растворением 21 г лимонной кислоты в 200 мл I н. раствора NaOH с последующим разбавлением водой до 1 л. [c.225]

Приготовление гидриидантипа. К раствору 80 г нингидрина в 2 л воды, нагретой до 90°, добавляют при перемешивании 80 г аскорбиновой кислоты в 400 мл воды, нагретой до 40°. Через 30 мин полученный раствор охлаждают водопроводной водой. Гидриндантин отфильтровывают, промывают водой, сушат до постоянного веса над пятиокисью фосфора в вакууме без доступа света и хранят в банке из темного стекла. Выход гидриндаитина составляет примерно 75 г. [c.777]

В распределительной хроматографии открылись новые возможности применения органических реагентов в двух направлениях 1) в качестве органических жидкостей, расслаивающихся с водой, например хлороформ, н. бутиловый спирт, фенол и др. 2) для обнаружения разделяемых компонентов смеси веществ на хроматограмме, например нингидрин для обнаружения аминокислот, коевая кислота, оксин для о-бнаружения катионов и др. В первом случае мы получаем каждый раз два слоя, из которых один представляет слабый раствор органической жидкости в воде, второй — слабый раствор воды в органической жидкости. В распределительной хроматографии сравнительно редко применяют простые растворители. Обычно употребляют смеси нескольких индивидуальных веществ, например, бутиловый спирт—бензоилаце-тат — раствор азотной кислоты или ацетилацетон — соляная кислота — ацетон, и многие другие. Для приготовления таких смесей чаще всего применяют различные спирты, галоидозамещенные, органические кислоты, амины, кетоны, алифатические, гомоциклические и гетероциклические соединения, часто в смесях с водными растворами кислот или оснований, в зависимости от концентрации последних, имеющими различные значения pH. Метод распределительной хроматографии широко применяют в неорганическом анализе для разделения смесей катионов или анионов. [c.84]

Окрашивание реагентом нингидрин — ацетат кадмия. Нингидрин хранят в виде 0,25%-ного (масс./об) раствора в ацетоне, а ацетат кадмия — в водной уксусной кислоте (1 г Сс1(СНзС00)2 2Н20 — 50 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл воды). Бумагу погружают в смесь, приготовленную из 100 мл раствора иингидрина и 15 мл раствора ацетата кадмия, сушат при комнатной температуре и затем нагревают при 100 °С в тече 1ие [c.363]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология