Титрование вируса методом бляшек

Рабдовирусы, обладающие цитопатогенным действием на клеточные культуры, дают бляшки, число которых пропорционально количеству вируса. Определение числа бляшек, образующихся в результате дегенерации зараженных клеток, лежит в основе наиболее точного метода титрования. Число бляшек (х), сформировавшихся при нанесении на клеточный монослой определенного разведения вируса (у) в объеме V, можно использовать для расчета титра (п) в БОЕ/мл по уравнению [c.116]

Некоторые штаммы вируса бешенства тоже образуют четкие бляшки на монослое клеток хомячка ER в настоящее время эта линия клеток широко используется для размножения и титрования вируса бешенства и других вирусов [17]. Метод бляшек с использованием клеток ER особенно чувствителен при титровании стандартного штамма вируса бешенства VS, При работе этим методом используют монослойные культуры, выращиваемые в шестилуночных планшетах (диаметр лунки составляет 35 мм). [c.117]

Хотя во всех описанных ниже методах в качестве тест-культуры взяты клетки Vero, однако можно использовать с этой целью ВНК-21, LL MK2, РК15 и другие линии клеток млекопитающих. Первый метод оптимален при исследовании большого числа образцов его легко адаптировать для работы с микропланшетами для титрования, как описано здесь, или с планшетами или чашками большего размера, например для определения морфологии бляшек. В этом случае для титрования используют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Далее описан еще один метод, предполагающий использование агарозы и окрашивание клеток нейтральным красным. Он особенно полезен при работе с вирусными клонами, когда необходимо, чтобы бляшки содержали инфекционный вирус. [c.85]

Число инфекционных вирионов определяют методом бляшек. Реовирус формирует бляшки на разнообразных клеточных культурах, но чаще всего для титрования используют Ь-клетки или обезьяньи клетки СУ-1. Вирусные бляшки под 1%-ным агаровым покрытием при 37°С образуются на 4—5 сут их выявляют прижизненным окрашиванием нейтральным красным или 0,01%-ным раствором кристаллического фиолетового после фиксации формалином и удаления агарового покрытия. Обычно при культивировании реовируса описанными выше методами отношение числа физических частиц к числу БОЕ составляет 20—50 1 заметное увеличение этого отношения свидетельствует об образовании ДИЧ, что сопровождается снижением выхода инфекционных вирионов. Как уже отмечалось, реовирус исключительно эффективно размножается в мышиных Ь-клетках, и в принципе можно получить 25 мг очищенного вируса из 1 л зараженной суспензионной культуры. На практике для штаммов первого (например, Ленг) и третьего (например, Диринг) серотипов выход составляет 3—10 мг/л, а для штаммов второго серотипа (например, Джонс) —2—5 мг/л. [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология