Монослой клеточный

Все рассмотренные методы позволяют получать черные пленки, представляющие собой липидный бислой с непременным содержанием углеводорода. Бимолекулярный липидный слой в клеточной мембране не содержит подобных растворителей. Поэтому рядом автором были предприняты попытки получения черных пленок, состоящих только из липидов В связи с этим следует отметить оригинальный метод, предложенный японскими исследователями [ 64] и получивший дальнейшее развитие в работах [ 65, 661. На поверхности воды в лэнгмюровской ванне формируют монослой ли- [c.70]

Первичные клеточные культуры. Эти культуры получают непосредственно из ткани животного или человека путем разрушения протеолитическими ферментами (трипсин, коллагеназа, прона-за) межклеточного вещества. Разобщенные (диспергированные) клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя так называемый монослой — слой толщиной в одну клетку. [c.259]

При данной температуре зависимость равновесного давления пара А над клатратным кристаллом от величины у (степени заполнения полостей) определяется изотермой типа Лэнгмюра. Это утверждение Ван-дер-Ваальса, основанное на аналогии с адсорбцией, при которой образуется локализованный монослой было впоследствии подтверждено многочисленными экспериментами [26]. Для построения функции распределения, характеризующей движение молекулы А в полость клатратного кристалла, Ван-дер-Ваальс воспользовался методом Леннард-Джон-са и Девоншира, предложенным этими авторами для статистического описания клеточной модели жидкостей [52]. [c.18]

В основе метода лежит заражение небольшого числа клеток в полном монослое. Вирус, образующийся в зараженных клетках, распространяется вертикально, заражая соседние клетки известны различные способы предотвращения дальнейшего распространения вируса. Дегенеративный эффект вирусов на клетки распространяется до тех пор, пока не обнаруживается видимая область погибших клеток (бляшка). Окрашивание клеточного пласта позволяет легко визуализировать бесцветные бляшки. [c.204]

Инкубируйте с надосадочной фракцией моноклональных антител или с взятой в разных разбав.чениях мышиной сывороткой в течение 3 ч во влажной камере (при работе с планшетами в каждую лунку вносите по 50 мкл надосадочной фракции или разбавленной сыворотки, при работе с 90 мм-чашками капните по 2 мкл раствора каждого антитела на клеточный монослой на размеченные участки с определенной площадью). [c.187]

Когда сформируется клеточный монослой, разделите его и пересейте на 10 новых чашек. [c.294]

Более точным количественным методом учета от-дега>ных вирусных частиц является метод бляшек (рис. 33). Культуру клеток заражают вирусом и покрывают тонким слоем агара. После инкубирования посевов в течение нескольких суток на агаровом покрытии появляются просветленные участки определенной формы (бляшки), представляющие собой участки погибших клеток в сплошном монослое клеточной культуры. Каждая бляшка образуется при размножении одной вирусной частицы и хорошо заметна в виде круглого светлого участка на красном фоне клеток, прижизненно окрашенных нейтральным красным. Титр вируса, установленный этим методом, выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл. Размеры, морфология и сроки появ- [c.59]

Выясняя механизм дистантных межклеточных взаимодействий в системе двух клеточных культур, мы провели исследования зависимости проявления зеркального ЦПЭ от количества клеток в монослое детектора и индуктора и дозы экстремального агента, вызывающего поражение клеток в культуре-индукторе. Излуча-тельный характер связи между клетками подтверждается зависимостью зеркального эффекта от соотношения клеток источников и приемников излучения. [c.67]

Затем ядра мигрируют к поверхности эмбриона в зону кортикальной плазмы, где делятся и образуют монослой, в состав которого входит около 6000 ядер. Это стадия бластодермы, на которой начинается образование клеточных мембран и осуществляется детермн- [c.213]

Для исследования проявления зеркального цитопатического эф кта в системе двух тканевых культур в зависимости от количества клеток в монослое проведено две серии экспериментов, в которых определена эффективность проявления зеркального цитопатического эффекта при использовании в качестве индуктора клеточной культуры с разреженным монослоем, а в качестве детектора — культуры с плотным монослоем (табл. 33). [c.70]

Слияние клеток лучше проводить в суспензии, но можно-использовать и клеточные монослои. Действие вируса Сендай трудно контролировать, и процесс слияния клеток в монослое, выйдя из-под контроля, может приводить к образованию поли-кариот, содержащих до 10 ядер, большинство из которых оказываются нежизнеспособными. Для ограничения этого процесса рекомендуется брать сливаемые клетки в неравных количествах, например 1 1000. Монослой смешанных клеток следует проинкубировать в течение 24 ч, и затем, после удаления среды, обработать клетки инактивированным вирусом Сендай при О—4 С в течение 10 мин (за это время происходит адсорбция вируса), промыть несколько раз средой, не содержащей сыворотки, и инкубировать далее в ростовой среде при 37 °С. В этих условиях сливается примерно 4% клеток, но точное число слившихся клеток зависит главным образом от типа использованных клеток. При инкубации обработанных вирусом клеток при 37 °С клеточная мембрана, прилежащая к участкам адсорбции вируса, повреждается и образуются цитоплазматические мостики, соединяющие соседние клетки. Этот процесс происходит в тече- [c.191]

При исследовании действия ядов на клеточный монослой установлено, что в Норильске суточный монослой не погибал при действии 3 мкг/мл сулемы и частично погибал при действии [c.95]

В суспензии, однако, клетки могут поддерживать экспоненциальный рост в течение долгого периода и теоретически бесконечно, если их культивировать в хемостате, где увеличение поступления питательных веществ балансируется увеличением оттока клеточной суспензии это приводит к постоянству окружающих условий и числа клеток. На практике, однако, это трудно достигнуть из-за возможности бактериального заражения. Клетки в суспензии растут обычно в непроточных культурах, которые характеризуются примерно такой же кинетикой роста, как и клетки в монослое. [c.59]

Через 24 ч встряхнуть бутыль с клетками (исходно должно быть не менее 10 клеток) и удалить среду, содержащую мертвые клетки и их обломки. Встряхивание лучше всего производить в водяной бане на качалке так, чтобы бутыль встряхивалась 20 раз в течение 3 с весь клеточный монослой должен при этом быть покрыт средой. Сила прикрепления к субстрату у различных линий клеток варьирует в широких пределах, и, следовательно, для каждого случая требуется экспериментально подбирать интенсивность встряхивания. [c.147]

Добавить свежую прогретую среду (избегать пипетирования среды на клеточный монослой) и инкубировать в течение 15, 30, 45 мин и т. д. Интервалы между сборами клеток для разных линий клеток различны. [c.147]

Изучение ЦПД вирусов. Для исследования клеток пробирку помещают на предметный столик микроскопа так, чтобы монослой находился сверху. Местоположение монослоя клеток в пробирке определяют по черте, предварительно проведенной карандашом на противоположной стороне. Морфологические изменения клеток выявляют при микроскопическом исследовании пробирки с культурой с помощью объектива 8 при опущенном конденсоре и прикрытой диафрагме. При сравнении клеточного монослоя, инфицированного вирусом, с незараженными клетками в контрольной пробирке отмечают полное или островковое разрушение пласта клеток или другие изменения, которые характеризуют ЦПД вируса. [c.61]

Способ, благодаря которому кремнезем собирается около зародышей полимеризации в специфических центрах организма, остается вопросом предположений и гипотез. Для того чтобы образовались твердые частицы кремнезема в сусиензии в водной среде, необходимо сильное пересыщение раствора мономера, Однако если какое-либо органическое вещество оказывается способным адсорбировать монослой кремневой кислоты, которая затем полимеризуется до образования пленки кремнезема, то кремнезем будет продолжать осаждаться на таком участке нз раствора при условии небольшого пересыщения в этой области. Так, на основании изучения состава стенок клеток нескольких разновидностей диатомей Хекки и др, [390в] предположили, что кремневая кислота способна связываться на богатой гидроксильными группами клеточной поверхности белка, на которой содержатся большие количества серина и тропеонина. Такой белковый слой удерживается на полисахаридах клеточной стенки. Гидроксильные группы аминокислотных сегментов полисахаридов формируют поверхность, на ко- [c.1088]

Плазменные липопротеины (ЛП)—это сложные комплексные соединения, имеющие характерное строение внутри липопротеиновой частицы находится жировая капля (ядро), содержащая неполярные липиды (триглицериды, эстерифицированный холестерин) жировая капля окружена оболочкой, в состав которой входят фосфолипиды, белок и свободный холестерин. Толщина наружной оболочки липопротеиновой частицы (ЛП-частица) составляет 2,1—2,2 нм, что соответствует половине толщины липидного бислоя клеточных мембран. Это позволило сделать заключение, что в плазменных липопротеинах наружная оболочка в отличие от клеточных мембран содержит липидный монослой. Фосфолипиды, а также неэсте-рифицированный холестерин (НЭХС) расположены в наружной оболочке таким образом, что полярные группы фиксированы наружу, а гидрофобные жирно-кислотные хвосты —внутрь частицы, причем какая-то часть этих хвостов даже погружена в липидное ядро. По всей вероятности, наружная оболочка липопротеинов представляет собой не гомогенный слой, а мозаичную поверхность с выступающими участками белка. Существует много различных схем строения ЛП-частицы. Предполагают, что входящие в ее состав белки занимают только часть наружной оболочки. Допускается, что часть белковой молекулы погружена в ЛП-частицу глубже, чем толщина ее наружной оболочки (рис. 17.4). Итак, плазменные ЛП представляют собой сложные надмолекулярные комплексы, в которых химические связи между компонентами комплекса носят нековалентный характер. Поэтому применительно к ним вместо слова молекула употребляют выражение частица . [c.574]

Клеточное строение растительных тканей открыто английским физиком Гуком, который в 1665 г. зарисовал напоминающую пчелиные соты сетчатую структуру ткани коры пробкового дерева. Нидерландский натуралист Левенгук (1628—1723 гг.), которому часто приписывают изобретение микроскопа, впервые наблюдал под микроскопом эритроциты, инфузории и сперматозоиды. В 1848 г. Дюбуа-Реймон высказал мысль, что поверхность клетки имеет общие свойства с электродом в гальванической ячейке, а Оствальд, Нернст и Бернштейн в конце XIX в. предположили, что клетки окружены полупроницаемой мембраной со специфическими электрическими свойствами. Это утверждение оставалось лишь смелой гипотезой до 1925 г., когда Гортер и Грендел из липидов эритроцитов разного происхождения сформировали монослой на границе раздела вода — воздух. Оказалось, что в монослоях липиды занимают площадь, примерно вдвое большую общей поверхности клеток. Это указывало на то, что внешняя оболочка клеток образована бимолекулярным слоем липидов, в первую очередь фосфолипидов — эфиров глицерина, жирных кислот и фосфорной кислоты. Позднее было установлено, что вообще все клетки животных окружены тонкой мембраной, состоящей всего лишь из двух слоев молекул. Электронно-микроскопические исследования окончательно подтвердили этот вывод. Строение клеток растений оказалось более сложным. Их клетки, помимо клеточной мембраны, непосредственно окружа- [c.179]

Жидкомозаичная модель Синджера и Николсона [3] различает два типа мембранных белков периферические и интегральные. Периферические белки удерживаются на поверхности мембраны в основном ионньпми взаимодействиями и относительно легко солюбилизируются, например, путем увеличения ионной силы. Интегральные белки погружены в липидную фазу и не могут быть высвобождены из мембраны без хотя бы частичного ее разрушения. Они нерастворимы в воде, гидрофобны и липофильны. Эта характеристика двух классов мембранных белков предполагает, что они асимметрично распределены в клеточной мембране периферические белки находятся только по одну сторону бислоя, тогда как интегральные проникают в нее — чаще только в один монослой если же они пронизывают весь бислой, то тогда они функционально асимметричны. Пример асимметрии последнего типа — транспортные системы, такие, как Na+, К+-АТРаза (гл. 7). [c.77]

Иммобилизация клеток на твердой подложке в многолуночных полистирольных платах создает идеальные условия для выполнения различных операций при биотестировании. Так, значительно упрощаются процедуры введения и удаления тестируемых и стандартных препаратов. При этом клеточный монослой практически не нарушается. Уникальная пространственная конфигурация клеток, организованных в монослои, способствует быстрому и одновременному действию гормона на все клетки, благодаря чему достигается почти одинаковый ответ всех клеток. Так как повторы культур во всех лунках структурно идентичны, то с помощью иммобилизованных клеток удается достичь высокой чувствительности и хорошей воспроизводимости результатов. Основное требование, предъявляемое к биотесту, заключается в том, что каждая отдельная доза гормона должна быть проверена на достаточном количестве объектов или повторов. Это требование полностью удовлетворяется при использовании иммобилизованных клеток единственного монослоя, поскольку в пределах одной и той же платы все инкубационные лунки, а следовательно, и все монослои находятся в одинаковых условиях с точки зрения температуры, влажности, концентрации Og в воздухе и состава питательной среды. [c.320]

Бислои — основной компонент множества клеточных мембран. Гликолипиды на основе глицерина, сфинголипиды на основе сфингозинов и стеринов — главные амфифильные составляющие бислойных мембран с ламеллярной упаковкой. Эти встречающиеся в природе липиды, различные по форме и заряду, как правило, асимметричны. Их структура зависит от того, находятся ли они преимущественно во внутренне или внешне повернутом монослое бислойной мембраны. Распределение заряда по голове липида оказывает существенное влияние на структуру локального двойного электрического слоя, а также на гидратацию головы. [c.179]

Имеются такие штаммы животных клеток, которые могут расти и в прикрепленном состоянии, и в виде суспензии. Прикрепившиеся клетки размножаются, растут и развиваются до тех пор, пока не сольются в монослой, то есть плотность клеток выступает тормозным сигналом. Однако при смене питательной среды на новые порции наблюдается дальнейшее разрастание клеток в форме нескольких слившю ся слоев. Подобного результата можно добиться при использовании других факторов воздействия на клеточные культуры (гормоны, ферменты, pH и т. д.). Тем не менее, на практике широко пользуются монослойными культурами. [c.535]

За 40 лтин до проведения эксперимента ростовая среда сливалась и клеточный монослой снимался со стекла раствором версена. Образующаяся суспензия центрифугировалась, затем клетки разбавлялись средой 199 до концентрации 1,5—2 млн./мл. Исследовали линии клеток, чувствительные и нечувствительные к экстремальному агенту. [c.77]

Проводя исследования на коонеративность с целью определения сроков появления монослоя на стекле, использовали различные коицептрации 5-10 , 7,5-10 1 -Ю клеток в 1 мл среды. Установлено, что в Норильске монослой образуется через 2 сут ул е из 5-10 клеток/мл среды, а в Новосибирске за то же время из той же взвеси вырастают только отдельные колонии. Этот факт еще раз подтверждает наши данные о том, что в Норильске клеточная культура росла более энергично. [c.95]

Клетки в ткани и клетки, растущие в монослое на стекле или пластике, прикрепляются друг к другу и к субстрату с помощью мукопротевдов и в некоторых случаях коллагена (разд. 2.3.2). фоме того, " многие клеточные монослои и ткани, особенно эпителиальные ткани, требуют для своей целостности двухвалентных ионов Са + и Mg2+. [c.52]

Рис. 6.3. Фрагменты почечных канальцев кролика. В специальной среде (ЬГ berman Ove, 1962) эти фрагменты канальцев немедленно прикрепляются к поверхности стекла и рост клеток стимулируется таким образом, что в течение двух дней образуется клеточный монослой. [Перепечатано из статьи Либерма-на и Ове (Lieberman, Ove, 1962) с любезного разрешения авторов и издателей.]

Другой способ получения слоя фидерных клеток — это инкубировать монослой клеток с митомицином С (10- М), что приводит к образованию поперечных сшивок в клеточной ДНК (Iyer, Szybalski, 1964). Монослой затем трижды промывают СБСР для удаления митомицина С, после чего его можно использовать либо непосредственно, либо после пересева клеток в культуральные сосуды меньшего размера. Для клонирования используются чашки Петри диаметром 6 см, содержащие 2-105 клеток, убитых либо уоблучением, либо обработкой митомицином С. Эти клетки образуют слой фидерных клеток. Среду в чашках с фидерными клетками заменяют суспензией клеток, предназначенных для клонирования. На такие чашки -МОЖНО высевать 10 клеток, но наилучшие результаты получаются при высеве 1000 клеток. Клонируемые клетки прикрепляются к субстрату в свободных участках между фидерными клетками и начинают размножаться, что приводит к образованию колоний, которые можно выделить с помощью цилиндров для клонирования (разд. 8.1.2). [c.93]

Среду удаляют с клеточного монослоя и монослой промывают СБСР или ФСБ (приложение 1) для удаления ингибиторов (антител), которые могут присутствовать в среде. Вирусные частицы суспендируются в небольшом количестве СБСР или ФСБ и адсорбируются клетками в течение 30—60 мин. После этого солевые растворы заменяются свежей средой. [c.196]

Обычно принималось, что клеточные культуры поддерживались в виде монослоя или суспензий, варьирующих по их ростовым свойствам in vitro, и что клетки со способностью расти в суспензии как агрегаты могут обладать более высокой онкогенной потенцией. Для клеток, растущих монослоем или в суспензии как и для клеток с их комбинированным ростом, можно подобрать условия культивирования. Методы и схемы субкультивирования и выбор среды, в которой клетки будут расти, крайне важны. Некоторые предназначены для роста клеток в суспензии. Культуральные среды, используемые для размнояшния клеток в монослое, высоко вариабельны, и специфический выбор особенной среды редко проводится исследователями. Например, обоснованно ли сравнивать свойства клеток, растущих в минимальной среде Игла, свободной от антибиотиков, но содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, с клетками, растущими в среде Ham (F-10), содержащей 5 % телячьей сыворотки, 1 % лошадиной сыворотки, 10 % триптозофосфатного бульона, 1 % экстракта куриных эмбрионов и антибиотики. [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология