Процесс полимеризации ПААГ

Выше уже отмечалось, что живые иммобилизованные клетки осуществляют как одностадийные, так и многостадийные процессы, даже сложнейшие процессы биосинтеза антибиотиков, ферментов и коферментов. В отличие от свободных клеток они подвергаются специфическим воздействиям уже на стадии иммобилизации. Особое влияние оказывает процесс полимеризации акриловых мономеров. Рассмотрим более детально особенности поведения клеток в полиакриламидном геле (ПААГ). [c.231]

Процесс полимеризации ПААГ [c.10]

Состав буферов, используемых для электрофореза белков и нуклеиновых кислот, не влияет на процесс полимеризации акриламида. Природа, концентрация и pH буфера определяются особенностями самого процесса электрофореза, которые будут рассмотрены ниже. Полимеризации ПААГ не мешает также присутствие мочевины (даже в высоких концентрациях), гуанидин-хлорида, формамида, сахарозы или таких детергентов, как до- [c.11]

Метод включения клеток в полиакриламидный гель (ПААГ) используется уже более 20 лет. В первых работах он рекомендовался как универсальный для многих микроорганизмов. Имеющиеся сейчас экспериментальные данные свидетельствуют о наличии отрицательного воздействия акриловых мономеров и в еще большей степени самого процесса полимеризации на жизнеспо-собнось и ферментативную активность многих микроорганизмов. Поэтому в ряде случаев ПААГ заменяют Са-альгинатным гелем, каррагинаном и другими носителями. С другой стороны, следует отметить и преимущества геля простота приготовления, относительная дешевизна, возможность включения клеток любого размера и заданное их количество, прочность фиксации клеток, прочность гранул на стирание и разрыв (свойство, необходимое для реакторов с перемешиванием). Уменьшить набухание геля можно путем его армирования каким-либо неорганическим носителем. [c.224]

Процесс полимеризации может оказывать значительное влияние на ферментативную активность клеток, как положительное, так и отрицательное. В тех случаях, когда должна быть изменена клеточная проницаемость, частичный положительный эффект достигается уже в процессе полимеризации. Он может быть усилен под действием различных факторов до и после полимеризации. К таким факторам воздействия на активность клеток, включенных в ПААГ, относятся их тепловая обработка, замораживание и оттаивание, автолиз, обработка органическими растворителями, поверхностно-активными веществами, ультразвуком и др. Например, фумаразная активность автолизированных и иммобилизованных клеток Breviba terium ammoniagenes в 19 раз превышала активность интактных свободных клеток и в 7,5 раза — активность интактных иммобилизованных клеток. При получении [c.224]

При ИЭФ в пластинах ПААГ и трубках существенно должны различаться способы внесечия препарата, поскольку в трубке его уже нельзя нанести на любой участок геля (и градиента pH). Здесь остаются только две возможности либо вносить белковый препарат в весь объем смеси мономеров до их полимеризации, либо наслаивать его на торец геля в непосредственном соседстве с электродными электролитами. Первый вариант не всегда выгоден, особенно для малых объемов препарата. Кроме того, в этом случае неизбежно имеет место взаимодействие белка с радикалами персульфата аммония, а также воздействие на него повышенной температуры в процессе полимеризации геля. В большинстве случаев белковый препарат вносят на торец геля в объеме 10—50 мкл раствора амфолитов с добавлением в него примерно 10% глицерина или сахарозы. Белки, как правило, следует оберегать от непосредственного контакта с электродными электролитами. Для этого рекомендуется после сборки прибора и заливки в верхний резервуар электролита вытеснить его из верхней части каждой трубки раствором амфолитов, а уже затем под него подслаивать растворы исходных препаратов. [c.39]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология