Прокариотические системы

Оптимизация экспрессии генов, клонированных в прокариотических системах [c.105]

Прокариотические системы экспрессии успещно используются для синтеза многих белков. Однако некоторые белки для превращения в активную форму должны претерпеть специфические пост-трансляционные модификации - гликозилирование, фосфорилирование или ацетилирование, а бактерии к этому не способны. Поэтому бьшо решено попытаться экспрессировать клонированные гены в эукариотических клетках с помощью специально созданных эукариотических экспрессирующих векторов. [c.154]

Почему для получения белков, использующихся в медицине, лучше применять эукариотические, а не прокариотические системы [c.156]

Недостаточно создать новый белок, важно оптимизировать экспрессию его гена. Для начала исследователи определяют возможность синтеза достаточных количеств аутентичного белка в прокариотической или эукариотической системах экспрессии. Прокариотическим системам отдается предпочтение, поскольку работа с ними обходится дешевле, а производительность выше. К сожалению, не все микроорганизмы синтезируют функциональные формы гетерологичных белков с одинаковой эффективностью, поэтому необходимо проводить сравнительные количественные оценки. [c.208]

В прокариотических системах мы имеем дело главным образом с самой ДНК (хотя и в составе нуклеоида). Механизм узнавания гомологичных участков пока не выявлен. Можно полагать, что в этих событиях участвуют только те области, которые действительно вовлекаются в рекомбинационный обмен. По-видимому, узнавание является неотъемлемой частью рекомбинационного механизма. Оно может основываться на сравнении отдельных цепей ДНК с целью идентификации комплементарных последовательностей (см. ниже). [c.443]

Как ул<е подчеркивалось 7, А), дыхание происходит только на поверхности твердых мембран. У прокариотов окислительное генерирование АТФ идет на клеточной мембране и ее впячиваниях, у эукариотов — на внутренней мембране митохондрий 18, В). Дыхание на митохондриальных мембранах подвергается так называемому дыхательному контролю , который осуществляется самими реагирующими веществами АДФ+Ф [361, 367, 571 —572]. В некоторых случаях дыхательный контроль наблюдался и в прокариотических системах ( [938], 14, В). О сходном явлении фотосинтетического контроля мы уже упоминали (5, Е). [c.135]

Молекула ДНК-зависимой РНК-полимеразы Е. соИ состоит из четырех субъединиц—двух идентичных (а-субъединицы) и еще двух — близких по размеру, но не идентичных (Р-и Р -субъединицы). Для осуществления полимеразной функции должен образоваться холофермент—комплекс так называемого кор-фермента, т. е. собственно РНК-полимеразы, с дополнительным белковым фактором (ст-фактор), способствующим более прочному связыванию полимеразы со специфической промоторной последовательностью ДНК. Бактерии продуцируют множество различных ст-факторов, каждый из которых функционирует в роли регулятора, модулирующего промоторную специфичность РНК-полимеразы. Появление различных ст-факторов коррелирует во времени с запуском различных комплексных программ экспрессии определенного набора генов в прокариотических системах, таких, как развитие [c.83]

ДРУГИЕ ПРОКАРИОТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ХОЗЯИН-ВЕКТОР [c.249]

Для трансляции природных матриц и вирусных РНК бесклеточная прокариотическая система должна быть дополнена полным набором аминоацил-тРНК, тремя белками, необходимыми для инициации трансляции (IF-1, IF-2 и IF-3), и тремя белками, нужными для терминации трансляции (RF-1, RF-2 и RF-3). [c.58]

Для получения гетерологичных рекомбинантных белков с клонированной эукариотической комплементарной ДНК (кДНК) обычно используются прокариотические системы экспрессии. Однако в некоторых случаях эукариотические белки, синтезированные в бактериях, оказываются нестабильными или биологически неактивными. Кроме того, как бы тщательно ни проводилась очистка, конечный продукт может быть загрязнен токсичными веществами или веществами, вызывающими повышение температуры у человека и животных (пирогенами). Чтобы решить эти проблемы, для получения рекомбинантных белков, предназначенных для использования в медицине, были разработаны эукариотические системы экспрессии. Такие белки должны быть идентичны природным по своим биохимическим, физическим и функциональным свойствам. Неспособность прокариот синтезировать аутентичные варианты белков обусловлена в основном отсутствием у них адекватных механизмов внесения специфических посттрансля-ционных модификаций. [c.135]

Было разработано несколько аффинных меток. Среди них - глутатионтрансфераза, белок, связывающий мальтозу, и короткие аминокислотные последовательности - антигенные детерминанты, которые связываются соответственно с глутатионом, мальтозой и специфическими антителами. Использовали и разные сайты расщепления, специфичные для тромбина, энтерокиназы и других протеиназ. Аффинная метка и сайт расщепления могут находиться как на N-, так и на С-конце рекомбинантного белка и использоваться в прокариотических системах экспрессии, а также в системах экспрессии на основе клеток насекомых, млекопитающих или грибов. [c.149]

ТОЧНЫХ РНК как у про-, так и у эукариот. Подавляющее число пионерских работ, в которых изучалась транскрипция,— природа соответствующих реакций и их субстраты, ферментативный аппарат, сигнальные нуклеотидные последовательности, определяющие, какие области ДНК должны транскрибироваться, некоторые способы процессинга, превращающего первичные транскрипты в зрелые молекулы РНК,-было выполнено на прокариотических системах. Параллельное проведение генетических и биохимических экспериментов позволило исследовать ферменты, участвующие в транскрипции, и механизм самого этого процесса. Предпринимаемые в то же время усилия по изучению транскрипционного и регуляторного аппаратов у эукариот были сильно затруднены и гораздо менее успешны главным образом из-за того, что компоненты их транскрипционного аппарата—ДНК в форме хроматина и РНК-полимеразы-были слабо охарактеризованы. Кроме того, была неизвестна природа трансьфип-ционньЕК единиц, а применение генетических подходов для их определения было невозможно. [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология