Приложение Б. Растворы для определения концентрации белка

Наряду с сефадексом для гельфильтрации успешно применяются другие материалы, такие как агар и синтетические гидрофильные полимеры, например, полиакриламидные гели — биогели, а также гидрофобные полимеры, набухающие в органических растворителях и используемые для фракционирования гидрофобных полимеров. Весьма удачным для белковой физико-химии оказалось использование агара. Пористость агарового геля зависит от концентрации агара. С уменьшением его концентрации в геле доступность внутренних частей зерен для макромолекул увеличивается. На низкоконцентрированных гелях (2,5—5%) имеется возможность разделять белки с молекулярным весом вплоть до миллионов [25]. Так, гемоцианины, тироглобулин, у-глобу-лин человека, сывороточный альбумин, а- и р-лактоглобулин обладают существенно различными скоростями перемещения на колонке из агара. Стандартизация метода гельфильтрации позволяет его использовать не только для фракционирования белков, но и для определения молекулярного веса в весьма простом хроматографическом эксперименте. Интересной областью приложения гельфильтрации на сефадексе явилось определение молекулярного веса мономерных форм белков, способных к ассоциации. Как известно, полная диссоциация подобных комплексов наблюдается при столь низких концентрациях растворов, когда использование [c.204]

Метод анализа белков, использующий влияние концентрации белка на показатель преломления раствора, был введен в 1903 г. Рейссом 1152] и позже развит Робертсоном [153]. Когда в 1925 г. физические методы анализа белков были рассмотрены Штарлингером и Гартлем [154], уже было известно, что рефрактометрический метод имеет серьезные ограничения 1 г белка, растворенный в 100 мл водного раствора, повышает показатель преломления растворителя приблизительно на 0,0018. Так как предельная чувствительность рефрактометров Пульфриха или Аббе равна 0,0001, ясно, что при пользовании этими приборами чувствительность метода меньше, чем метода удельного веса. Погружательный рефрактометр, который несколько более чувствителен, требует значительно большего количества вещества. Влияние на показатель преломления 1 г минеральной соли, растворенной в том же количестве раствора, имеет тот же порядок величины, что и для 1 г белка, и может даже быть значительно больше. Поэтому для обычных анализов обсужденные ранее предположения могут оказаться несправедливыми. При надлежащей осторожности метод применим в той же степени, что и другие методы определения физических констант. Критический анализ условий приложения метода к анализу казеина в сливках молока дал удовлетворительные результаты [155]. Казеин сперва осаждался и промывался, а затем снова растворялся для определения. Аналогичная методика была осуществлена для серума крови Зибенма-ном[156], который измерил различие в преломлении дон после тепловой коагуляции белков при pH 4,6, и для сока картофеля Вольфом [157], который применял интерферометр, дающий большую точность, чем рефрактометр, и удалял белок кипячением и фильтрованием. См. также работы по применению метода показателя преломления для анализа белков серума [158, 159]. [c.31]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология