Белки анализ

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Гидролиз белка. Анализ аминокислотного состава белка проводят после его гидролиза кислотой или щелочью. Пептидная (кислотно-амидная) связь, связывающая аминокислоты в молекуле белка, является ковалентной и химически устойчивой. Поэтому гидролиз белка проводят в достаточно жестких условиях. Кислотный гидролиз проводят кипячением белка в 6 моль/л растворе НС1 при температуре 105—ПО °С обычно в течение 24 ч. Гидролиз проводят в запаянных ампулах, из которых перед запаиванием откачивают воздух. [c.15]

КИСЛОТОЙ в 4-м положении [7]. Речь идет соответственно о пролине и валине. Когда имеется смесь белков, анализ соотношения пролин/валин в 4-м положении позволяет определить количественное соотношение белков, имеющих а- и 7- последовательности в этой смеси. [c.192]

Реверсивные повороты цепи часто встречаются в белках. Анализ поворотов цепей в глобулярных белках показал, что они очень распространены и в их образовании участвует около одной четверти всех остатков [200, 201]. Далее, было выяснено, что повороты I, [c.92]

При изучении бактериородопсина были, по существу, впервые сформулированы принципы определения топо рафии мембранных белков. Анализ распределения гидрофобных и гидрофильных аминокислотных остатков в полипептидной иепи позволяет сделать вывод о ее пространственной укладке в мембране. Гидрофобные зоны, по всей видимости, представляют собой трансмембранные сегменты, в то время как гидрофильные районы выступают из мембраны и соединяют отдельные внутримембранные а-спиральные тяжи белковой молекулы. Такого рода анализ выявил в первичной структуре бактериородопсина семь участков повышенной гидрофоб ности. что хорошо согласуется с электронно-микроскопическими данными по топографии белка в мембране. [c.607]

НЫМИ катионогенными и анионогенными группами. В отличие от этого кислотный гидролиз сывороточного альбумина приводит к образованию фрагментов, проявляющих иные сорбционные свойства по сравнению со свойствами исходного белка. Анализ взаимодействия белков с ионообменными смолами весьма существен для развития представления о механизме межмолекулярных взаимодействий белков с другими электролитами и полиэлектролитами. Так, например, взаимодействие фермент—субстрат в том случае, когда субстрат является электролитом, также должно определяться и расположением ионогенных заряженных групп в обеих молекулах. [c.196]

НОЙ конфигурации всех атомов железа белка. Анализ мессбауэровских спектров позволил заключить, что в окисленной форме этого фермента железо находится в низкоспиновом двухвалентном состоянии, а в восстановленной форме возможно образование свободного радикала, по-видимому, от одного из атомов серы, взаимодействующего с металлом. [c.432]

Электрофорез по методу подвижной границы нашел широкое применение преимущественно при исследовании белков. Многочисленные данные, имеющие основополагающее значение, были получены при определении свойств отдельных белков, анализе белковых смесей, оценке гетерогенности препаратов различных белков, изучении взаимодействий между белками и низкомолекулярными веществами, а также взаимодействий белков между собой. Однако в настоящее время ввиду доступности более удобных методик электрофорез по методу подвижной границы стал применяться значительно реже. [c.21]

Площадь пиков для данного количества белка определяли, умножая высоту пика на его ширину на уровне, соответствующем половине высоты пика. Площади пиков, измеренные для разных белков в различных растворителях, усредняли, а затем строили калибровочные кривые для данной длины волны, откладывая по одной оси средние значения площади пиков, а по другой количество наносимого на колонку белка. Анализ данных показал, что соотношение площади пиков и количества нанесенного белка линейно как при 280 нм, так и при 205 нм этого следовало ожидать, исходя из закона Ламберта — Бэра. [c.125]

Функционально активные рибосомные субъединицы используются для решения ряда задач, таких, как разборка и реконструкция рибосомных частиц, выяснение строения и функции отдельных рибосомных белков, анализ механизма различных стадий синтеза белка и т. д. В цитоплазме клеток млекопитающих 40 S — 60 8-пары рибосомных субъединиц образуют транслирующие рибосомы. 80 S-класса, входящие в состав полирибосом, и одиночные нетранслирующие рибосомы. Кроме того, 40 S- и 60 S-субъединицы существуют изолированно друг от друга в форме так называемых нативных рибосомных субъединиц. Обычно обе частицы присутствуют в клетке в эквимолярных количествах. Они определенным образом распределены между фондами полирибосом и одиночных рибосом, но значительная их часть представлена нативными рибосомными субъединицами. [c.303]

Определяют содержание небелкового азота. Этот анализ позволяет найти количество всех азотсодержащих веществ крови, кроме белков. Анализ проводят методом Кьельдаля (титрование) или колориметрическим методом. Определяют содержание мочевины в крови. Мочевину гидролизуют (катализатор уреаза) до аммиака. Аммиак переводят в хлорид аммония, который с реактивом Нес-слера дает окрашенный продукт. Из креатинина получают комплекс с пикриновой кислотой. Этот продукт окрашен в красный цвет. Мочевая кислота дает с фосфорновол1 рамовой кислотой комплексное соединение голубого цвета. Содержание глюкозы в крови может быть определено различными методами. Часто применяют реакцию восстановления фелинговой жидкости. Неорганические фосфаты образуют с молибдатом аммония и 1,2,-аминонафтол-4-сулы юкислотой продукты, окрашенные в голубой цвет. [c.367]

Использование развитых теоретических представлений и методических приемов позволило разработать экспрессные ультрачувствительные варианты ва жней-ших методов аналитической химии белка — анализ аминокислот и их динитро-фенильных, фенилтиогидантоиновых и диметилсульфонафтильных производных. Разработан не требующий специального сложного оборудования метод количественного анализа по размерам пятен с точностью 4—5%. [c.341]

Что касается белков, то в большинстве случаев их определяют в элюатах путем измерения оптической плотности при 280 нм. В случае низких концентраций белка анализ рекомендуется вести в коротковолновой части спектра, например, при 230 нм. В таких случаях приходится использовать буферные растворы, обладающие низким поглощением в этой области, например фосфатный, трисхлоридный, боратный. Если фон непостоянен, следует провести дополнительный анализ в области спектра, не характерной для белков, например при 310 нм. Если теперь нанести на график разницу в оптической плотности при двух длинах волн, можно рассчитывать, что фон будет более постоянным. Правда, это будет лишь в том случае, если посторонние примеси в буферном растворе или на стенках кюветы поглощают при двух длинах волн примерно одинаково. Анализ каждой фракции необходимо вести, избегая прикосновений к стенкам кюветы, т. е. нельзя определять оптическую плотность всех фракций вначале при 280 нм, а затем при 310 нм. Длина волны, на которой ведется контроль за фоном, должна незначительно отличаться от характеристической длины волны исследуемого вещества [46]. [c.253]

Кирк П. (Kirk Р. L.) Химическое определение белков. [Анализ составных частей]. В кн. Химия белка. Сб. статей. Пер. с англ. Под ред. А. Пасынского. М., Изд-во иностр. лит-ры, 1949, с. 13—45. Библ. 213 назв. [c.280]

Аминодикарбоновые кислоты и их амиды, определение 7670 2-Амино-4,6-диметил пирамидон, определение 8054 Аминокислот циклические анги-дриды. анализ 7735 Аминокислоты, см. также белки анализ смесей 7678, 7891, 8220 выделение, идентификация 7741 как реактивы 527 константы неустойчивости их медных солей 404 определение 4307, 6739, 7248— 7250, 7668, 7993, 8I4I, 8371 аминного азота в них 4233, 6587, 7413, 7709 [c.349]

Белок п-Арса-ниловая кислота, г/з белка Анализ продукта [c.357]

Оценены два вида ферментации-—поверхностная и глубинная с объемным способом аэрации. Сравнительный анализ свидетельствует в пользу глубинного процесса больше как глубина биоконверсии лигноцеллюлозы, так и обогащение ее белком. Анализ продукта, взятого из разных слоев ферментера, показал, что рост гриба и деградация субстрата одинаковы по всему объему ферментера. Показателем интенсивного роста Panus tigrinus и потребления им компонентов субстрата служили содержание углекислоты в выходящем воздухе и температура в центре ферментера (Черменский и др., 1985). Для более активной биоделигнификации лигноцеллюлозных субстратов используется совместное культивирование (Иванова, 1987). Отсутствие антагонизма позволило подобрать перспективные пары грибов [c.124]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология