Разрушение клеток гомогенизацией под давление

Клетки можно разрушить и физическими методами немеханическими (например, с помощью осмотического шока или быстрого многократного замораживания и оттаивания) или механическими (обработкой ультразвуком, с помошью шаровой мельницы, гомогенизации под давлением, соударения). Обычно после обработки немеханическими методами многие клетки остаются неповрежденными. Напротив, механическое разрушение высокоэффективно, что делает его более привлекательным. Особенно часто ультразвуковые излучатели, генерируюшие высокочастотные звуковые волны, используют для обработки малых объемов. Клетки разрушаются при этом под действием гидродинамических сил (сдвига слоев жидкости друг относительно друга, кавитации и т. д.). [c.366]

Выделению мембран предшествует этап разрушения клеток и тканей. Для этого подбирают методику, позволяющую не только эффективно разрушать клетки, но и сохранять нативную структуру мембран, подлежащих выделению. При выделении большинства мембран животных клеток используют гомогенизацию в гомогенизаторах Даунса и Поттера со стеклянными стенками и тефлоновым пестиком. Для разрушения клеток применяют также вращающиеся ножевые гомогенизаторы. Предварительно свежевыделенную ткань измельчают и промывают водой. В гомогенизаторе клетки разрушаются за счет сдвиговых усилий, возникающих при продавливании суспензии через узкий зазор между тефлоновым пестиком и стеклянной стенкой. При гомогенизации следует тщательно подбирать значение pH, ионную силу и состав буферного раствора. Часто в качестве суспендирующей среды используют раствор сахарозы в концентрации 0,25 моль/л с добавлением хлорида магния, комплексообразователей (например, ЭДТА), восстановителей (дитиотреитол, Р-меркаптоэтанол), С целью облегчения последующего разрушения растительных, грибных и бактериальных клеток их сначала обрабатывают ферментами, расщепляющими компоненты клеточной стенки (лизо-цим, целлюлаза). Более жесткая обработка клеток предусматривает их растирание с помощью абразивных материалов (стеклянных шариков, песка, оксида алюминия), разрушение ультразвуком и путем экструзии (продавливание суспензии клеток через отверстия под давлением). Полученный гомогёнат клеток процеживают и используют дальше для получения мембран. [c.217]

Разрушение тканей и клеток. Свежевыделенную ткань измельчают, промывают водой, а затем гомогенизируют. В настоящее время предложено довольно большое количество гомогенизаторов. Наиболее широко используется гомогенизатор, представляющий собой пробирку, внутри которой вращается плотно прилегающий к ее стенкам стеклянный или тефлоновый стержень (рис. 21). Клетка разрушается благодаря силам трения. При гомогенизации очень важно подобрать нужные значения pH, состав буферного раствора и его осмотическое давление. Как правило, в качестве суспендирующей среды используют 0,25 М раствор сахарозы, к которой прибавляют хлорид магния, вещества, образующие комплексы с металлами, а также восстановители, например, дитиотреитол, р-меркаптоэтанол и др. Полученный гомогенат процеживают, после чего он готов для центрифугирования. [c.101]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология