Химотрипсин фотоокисление

Активный центр гидролитического фермента химотрипсина содержит остаток гистидина [131. Этот остаток, очевидно, служит основным катализатором. При фотоокислении остатка гистидина фермент утрачивает активность. На модельных системах было показано, что имидазол, входящий в молекулу гистидина, сам но себе может служить катализатором гидролиза, хотя и менее эффективным, чем фермент [14]. Удалось синтезировать модельные пептиды, содержащие гистидин и другие аминокислоты в той же [c.266]

Ряд экспериментальных данных приводит к заключению, что группой, активирующей гидроксильную группу серина, является имидазольная группа гистидина. Участие имидазольной группы гистидина в ферментативном процессе было доказано избирательным фотоокислением одного из двух остатков гистидина а-химотрипсина в присутствии метиленового синего. Скорость фотоокисления гистидина и скорость инактивации фермента были приблизительно одинаковы, и потеря 50% ферментативной активности совпадала по времени с разрушением 0,48 моль гистидина на 1 молъ а-химотрипсина. Фотоокисление фермента, а также взаимодействие одного из гистидиновых остатков с динитрофторбензолом приводит к потере способности а-химотрипсина реагировать с диизопропилфторфосфатом. [c.212]

Избирательное фосфорилирование специфического остатка серина в так называемых сериновых протеиназах , таких, как химотрипсин, трипсин и тромбин, впервые осуществлено Янсеном с сотр. [167—169], применившим в качестве реагента диизо-пропилфторфосфат (ДФФ). Воздействие на эти ферменты мочевины [170—171] или фотоокисление (в присутствии метиленового синего) остатка гистидина активного центра, близкого остатку серина [85, 95], приводит к тому, что такие белки уже не удается модифицировать с помощью ДФФ. ДФФ не инактивирует бромелайн, папаин или така-амилазу А [172], поскольку эти ферменты не принадлежат к группе сериновых протеиназ вместо остатка серина они имеют в активном центре остаток цистеина. С помощью ДФФ в них можно фосфорилировать некоторые остатки тирозина, но не 5Н-группу активного центра [56, 173]. Напротив, -нитрофеннлацетат (НФА) ацетилирует 5Н-группу глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы и тем самым инактивирует этот фермент [174, 175]. [c.367]

Данные, полученные в основном при исследовании хим1отрип ои на, указывают а то, что в каталитическом процессе участвует гистидин. Нужно отметить, что гистидин не является соседней с серином аминокислотой в приведенной выше последовательности аминокислот и не находится в витке спирали, соседнем с витком, в котором расположен серин. Возможно, что гистидин мог бы приводиться в непосредственный контакт с серином в результате изгиба спирали, хотя найдено, что пролин, т. е. аминокислота, которая препятствует суш,е-ство1ванию спиральной конфигурации, может находиться довольно близко от серина в химотрипсине и трипсине. Эксперименты, показавшие, что гистидин является составной частью активной области, включают 1) фотоокисление, поз1волившее выявить соответствие между потерей гистидина и потерей ферментативной активности [338] 2) построение кривых зависимости pH — активность, которое дало основание связать активность с группой, имеющей р/С имидазола (гистидина), но не серина 3) модельные опыты на неферментативных системах, показавшие, что гидролиз эфиров фосфорной и карбоновых кислот очень сильно катализируется имидазолом (гистидин), но очень слабо катализируется спиртом (серин). Последние два аргумента, являющиеся сомнительными, детально будут обсуждаться позднее. Сообщалось, однако, что фрагмент трипсина, не содержащий гистидина, еще сохраняет в значительной степени ферментативную активность [339]. [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология