Пероксидазы тироксина

Точность и воспроизводимость ХИФА существенно определяется степенью диссоциации пероксидазы на гемин и апофермент, т. е. важным фактором, повышения чувствительности и точности метода является выбор условий для полной диссоциации ПХ на гемин и апофермент. Даже в сильнощелочных растворах процесс диссоциации осуществляется в течение 5—10 мин. Возможно использование додецилсульфата натрия, разрушающего белковую глобулу фермента, вследствие чего скорость диссоциации фермента увеличивается в 3 раза и улучшается воспроизводимость результатов. Этот подход был применен для определения тироксина и вируса X картофеля. [c.135]

К раствору К-трифторацильного производного тироксина (40 мг) в 250 мкл диметилформамида добавляют 6 мг N-oк и yкцини-мида и 10 мг дициклогексилкарбодиимида в 250 мкл диметилформамида. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 ч и добавляют порциями по 100 мкл к раствору 20 мг. пероксидазы (К2 = 3,1) в 1 мл 0,1 М карбонатного буфера и 0,5 мл диметилформамида. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при 4°С и затем очищают путем хроматографирования иа колонке с сефадексом 0-50 в фосфатиом буфере. [c.281]

При смешивании липосом с антителами и комплементом высвобождается заключенная в липосомы пероксидаза хрена, активность которой измеряют при помощи кислородного электрода. Свободный теофиллин, содержащийся в образцах, мешает связыванию антител с липосомами и, таким образом, снижает литическую активность системы комплемента. В результате уменьшается скорость расходования кислорода. Это позволяег построить калибровочную кривую для надежного определения свободного лекарственного препарата в интервале 4—40 нМ. (рис. 9-2). Важно, что высокая чувствительность достигается, при использовании дешевой электродной системы детектирования. Столь же обнадеживающие результаты были получены при анализе тироксина и IgG в сыворотке спектрофотометрическим методом на основе комплемента (Braman et al., 1984), Использованные липосомы были покрыты специфическими антигенами и содержали щелочную фосфатазу. Авторы показали, что результаты определения тироксина и IgG этим методом довольно-хорошо коррелируют с результатами радиоиммунологического-анализа. По-видимому, фермент, активность которого демаскируется комплементом, остается в данном случае внутри липосом, но они становятся проницаемыми для субстрата. [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология