Щелочная фосфатаза

Рис. 59. Ингибирование субстратом гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Пунктирная кривая является теоретической при условии образования неактивного фермент-субстратного комплекса состава ЕЗа

Рис. 93. Итеративная линеаризация экспериментальных данных [9] по кинетике гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой, в условиях ингибирования ферментативной реакции (6.90) субстратом с образованием неактивного комплекса Е5

ПОЛУЧЕНИЕ КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛ С ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗОЙ [c.318]

Наибольшее распространение получили методы введения ферментной метки, основанные на образовании ковалентной связи между молекулами антитела и фермента. Наибольшее практическое применение нашел метод получения иммунопероксидазных конъюгатов окислением углеводного компонента фермента перйодатом натрия. В случае использования щелочной фосфатазы в качестве фермента-маркера применяют глутаровый альдегид, взаимодействующий с е-аминогруп-пами белковых молекул. [c.317]

Рис. 92. Ингибирование субстратом гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой

Количество эритроцитов (кролики) Количество лейкоцитов (кролики) Количество нейтрофилов (кролики) Количество лимфоцитов (кролики) Количество тромбоцитов (кролики) Активность щелочной фосфатазы (крысы) Активность аланин-аминотрансферазы (крысы) [c.203]

Рис. 86. Обработка с помощью уравнения (8.26) полной кинетической кривой гидролиза я-нитрофенилфосфата под действием щелочной фосфатазы (Д = 1 час)

Принципиальная идея здесь заключается в том, что ферментный субстрат следует превратить в окрашенный продукт, В случае щелочной фосфатазы обычно используют п-нитрофенилфосфат или аналогичный ароматический фосфат [c.597]

На рис. 93 проведен подобный анализ экспериментальных данных для гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой (см. рис. 92) [9]. В этом случае экспериментальные данные можно привести к линейному виду, полагая п = 3. Таким образом, неактивный фермент-субстратный комплекс в реакции гидролиза монофенилфосфата имеет состав Е54. Наконец, из отрезков, отсекаемых полученной прямой (рис. 93) на координатных осях, можно определить значения Кв и V, характеризующие ферментативную реакцию, не осложненную ингибированием при избытке субстрата. [c.239]

Химотрипсин Щелочная фосфатаза [c.274]

При изучении кинетики гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой, было найдено, что субстрат [c.119]

Карбоксипептидаза Карбон ангидраза Щелочная фосфатаза Амилаза [c.363]

Влияние концентрации субстрата на скорость гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Условия опыта pH 10,0 37° С [Е о = 410-з мг/мл [c.120]

Голубовский Н. Е., Малышева К. В. Активность щелочной фосфатазы крови в ранней диагностике поражений печени при интоксикации четыреххлористым углеродом и дихлорэтаном,— Казанск. мед. ж. , 1960, № 5, с. 78—81. [c.306]

В таблице 5 приведена кинетика накопления п-нитрофенола в реакции гидролиза я-нитрофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой [6]. Определить значения т и Кт(кат) ферментативной реакции. [c.173]

Рентгеноструктурные исследования карбоангидразы свидетельствуют о том, что активный центр состоит из трех имидазольных лигандов, которые искажают тетраэдрическую координацию иона 2п(П). Среди предложенных молекулярных моделей следует отметить аналогичную геометрию для производного трис-(имидазолил)-метана. Бреслоу и сотр. [218] синтезировали трис[4(5-имидазолил]карбииол (4-ТИК) и трис[2-имидазолил]карбинол (2-ТИК) в качестве моделей цинк-связывающего центра в карбоангидразе и щелочной фосфатазе. [c.344]

Кинетика накопления п-нитрофенола в реакции гидролиза п-нитрофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Условия опыта pH 8,0 25°С Ш трис-буфер [SJo = 5,1-10- М [c.174]

Щелочная фосфатаза — препарат в сульфате аммония. [c.318]

Берут 1,5 мг препарата щелочной фосфатазы и центрифугируют при 4500 g в течение 20 мин при 4 С. Осторожно удаляют супернатант и к осадку добавляют 0,5 мг очищенных иммуноглобулинов в концентрации 2,5 мг/мл в фосфатном буфере. Объем смеси доводят до 0,2 мл [c.318]

При катализе ферментами химической реакции может реализоваться любой из вышеприведенных механизмов катализа. Например, имидазольное кольцо остатка гистидина в ферменте а-химотрипсии (разд. 4.4) способно играть роль обгдеосновного катализатора, тогда как в ферменте щелочная фосфатаза тот л<е остаток может действовать в качестве нуклеофильного катализатора. Действительно, ферменты — это сложные катализаторы, в ходе действия которых реализуется несколько механизмов. Именно благодаря успешному сочетанию разных каталитических процессов скорость катализируемой реакции повышается в Ю раз (по сравнению со скоростью некатализируемой реакции). Более того, именно такая комбинация факторов приводит к специфическому катализу. [c.195]

Кинетику гидролиза п-нитрофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой, изучали по образованию /г-нитрофе-нола и фосфат-иона (продукты 1 и 2 схемы 7.1 соответственно). Было найдено, что при проведении ферментативной реакции в 1М трис-буфере (1М водный раствор трис-оксиметил-З-аминометана) отношение концентраций продуктов Р1/Р2 в процессе реакции равнялось 2,1. Исходя из предположения, что трис-буфер принимает участие в ферментативной реакции в качестве дополнительного нуклеофильного агента [10], определить отношение констант (см. схему 7.12). [c.153]

Для щелочной фосфатазы 4-нитрофенилфосфат 10 мг субстрата растворяют в 10 мл буфера, который готовят следующим образом 97 мл диэтаноламина смешивают с 800 мл воды, добавляют 0,2 г NaNs, 0,1 г Mg l2-6H20 и доводят pH до 9,8 с помощью 1 н. раствора НС1 общий объем доводят до 1 л и хранят в темноте при комнатной температуре. [c.319]

Четыреххлористый углерод. Существует целый ряд сообщений о течении острых и подострых отравлений ССЦ вместе с тем сведения о влиянии на работающих U в минимальных концентрациях ограничены. Мы располагаем лишь одной работой Н. Е. Голубовского и К. В. Малышевой (1960), в которой приведены результаты обследования 23 работающих в контакте с ССЦ. Концентрации вещества определялись в основном на уровне ПДК и лишь в отдельных случаях превышали этот уровень (во сколько раз, к сожалению, неизвестно). Стаж работающих—1 — 3 года, у 7 челогвек— более 3 лет. Обследовали лиц молодого и среднего возраста, только 4 человека были в возрасте 45 лет. Выявлены субъективные жалобы на головную боль, плохой аппетит, горечь во рту почти у всех лиц. Боли в правом подреберье отмечались у 7 человек, т. е. у 7з обследованных. Проведенные биохимические исследования показали следующее повышение активности щелочной фосфатазы — у 15, снижение антитоксической [c.186]

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

Субстраты для выбранного фермента Любой фермент(например лактатд и ги д рогеназа, креатинкеназа, щелочная фосфатаза) Реагент может быть очень чувствительным и спечествительным [c.73]

Наиболее часто в качестве меток используют два фермента —щелочную фосфатазу (ЩФ) и пероксидазу хрена (ПХ). Выбор зависит от возможности оптического детектирования превращения субстратов этих ферментов и от легкости соединения фермента без потери активности. Щелочная фосфатаза представляет димерный гликопротеин с молекулярной массой 140 ООО, содержаний много свободных аминокислот для соединения. Аналогично пероксидаза хрена содержит четыре лизнновых остатка для соединения и имеет молекулярную массу 44000. В некоторых случаях для соединения можно использовать углеводные остатки. [c.594]

Щелочная фосфатаза особенно полезна при разработке способов Г енерации люминесцентного сигнала, поскольку многие ароматические фосфаты при отщеплении фосфатной группы образуют неустойчивый анион, который распадается с испусканием света (например, адамантил-1,2-диоксентанарилфосфат). Однако большинство выполняемых люминесцентных измерений основаны на [c.598]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.119 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.119 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.119 ]

Катализ в химии и энзимологии (1972) -- [ c.43 , c.243 , c.336 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.3 , c.3 , c.99 ]

Биологические мембраны Структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами (2000) -- [ c.29 , c.30 , c.222 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.299 ]

Генетика с основами селекции (1989) -- [ c.400 ]

Иммунология Методы исследований (1983) -- [ c.33 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.58 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.40 , c.59 , c.75 , c.270 , c.480 ]

Молекулярная биология клетки Сборник задач (1994) -- [ c.115 , c.116 , c.122 , c.210 , c.211 ]

Сборник Иммуногенез и клеточная дифференцировка (1978) -- [ c.170 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.64 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология