Радиоиммунологический анализ

Рис. 1.30. Схема твердофазного радиоиммунологического анализа при определении неизвестного АГ с помощью конкурентного прямого а) и

Метод радиоиммунологического анализа [c.318]

Разработка Ялоу и Берсоном метода радиоиммунологического анализа (РИА) оказала глубочайшее влияние на многие области клинической медицины и науку вообще. Он позволяет определять очень небольшие количества вещества путем вытес- [c.329]

Дополнение 25-1. Радиоиммунологический анализ полипептидных гормонов [c.784]

Спектры электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) и спиновые метки, т. 1, стр. 348 Использование изотопных меток при изучении цикла трикарбоновых кислот, т. 2, стр. 322 " С и цикл Кальвина, т. 2, стр. 477 Метод радиоиммунологического анализа, т. 3, стр. 318 [c.380]

Радиоиммунологический анализ (РИА). АГ или АТ для РИА метят радиоактивным изотопом, чаще всего Реакции РИА очень чувствительны, позволяют обнаружить 1 — 2 нг и менее исследуемого вещества. Для их проведения необходима специальная радиометрическая аппаратура. [c.80]

Для сравнения отметим, что удельная активность обычно используемого в радиоиммунологическом анализе радиоизотопа имеющего период полураспада 60,2 дня, составляет 4,8 распада в 1 мин на 1 амоль. [c.68]

Влияние константы связывания меченого антигена на положение калибровочного графика. При рассмотрении теоретических основ радиоиммунологического анализа, как правило, предполагается равенство констант связывания с антителами нативного и меченного изотопом антигена. В ИФА это предположение может соблюдаться в отдельных случаях, но его нельзя считать общим. Сохранение иммунологической активности антигена, связанного с ферментом, в значительной степени зависит от соотношения их размеров и расположения антигенных детерминант на поверхно- [c.234]

Возможность других способов представления ординаты зависит от методики анализа. Если при проведении ИФА используется меченый антиген, все молекулы которого обладают способностью взаимодействовать с антителами, то ордината графика может быть выражена в величинах, широко используемых в радиоиммунологическом анализе, а именно как процент связанной метки от начальной (или отношение концентрации связанной метки к свободной, свободной метки к связанной, связанной метки к исходной). Наиболее удобными для практических целей являются графики в двух первых координатах. Их форм-а сходна между собой и с графиками, приведенными на рис. 48. Однако в отличие от рис. 48 в этих случаях по оси ординат откладывается не экспериментальная, а расчетная величина и степень достоверности графика зависит от корректности расчета. Так, отношение концентраций связанного с антителами меченого антигена к свободным (В/Р) может быть получено двумя путями экспериментальным измерением Р и вычислением В по разности [Аг ]о—Р и, наоборот, экспериментальным измерением В и определением Р по разности [Аг ]о—В. [c.259]

В больщинстве случаев радиоиммунологический анализ используют для определения незначительных концентраций не-больщих молекул. Для иммунизации небольшие молекулы с низкой иммуногенностью необходимо ковалентно связать с более крупными белковыми носителями, причем метод связывания влияет на специфичность ответа. Может возникнуть необходимость тестирования нескольких сывороток для того, чтобы выбрать наиболее подходящую. [c.34]

Определяют авидность. Высокая авидность необходима для проведения радиоиммунологического анализа в жидкой (фазе, а также для методов, где важно иметь низкий фон, в том числе для осуществления иммуногистохимических исследований клеток и тканей и Вестерн-блоттинга. Отличительное свойство антител с высокой авидностью заключается в том, что они сохраняют способность оптимально связываться с аи- [c.112]

Белки и липиды различаются по многим физическим и биохимическим свойствам, что дает возможность простыми методами определить принадлежность изучаемого антигена к тому или иному классу соединений. Белковые антигены быстро разрушаются при мягкой обработке проназой, в то время как липидные антигены не подвержены действию протеолитических ферментов. В отличие от большинства белковых антигенов антигены липидной природы устойчивы к фиксации формальдегидом с последующим нагреванием до 80 °С. Эту процедуру можно проводить как с суспензиями отдельных клеток, так и со срезами тканей. Экстракция нативных или фиксированных формальдегидом клеток кипящим метанолом в течение 1 мин приводит к растворению части клеточных липидов, и метанольный экстракт в ряде случаев можно использовать без дальнейшей очистки для твердофазного радиоиммунологического анализа (РИА). Использование РИА описано в разд. IV. [c.160]

Введение изотопной метки [20] используется для изучения биосинтеза и биораспада природных соединений, изучения метаболизма фармацевтических препаратов и других химических соединений в растительных и животных организмах, а также для радиоиммунологического анализа [21] и анализа методом изотопного разведения. Кроме того, меченые изотопами соединения успешно используются для выяснения механизмов реакций [22]. С помощью воды, меченной изотопом 0 (Нз О), можно разрешить вопрос о месте разрыва сложнозфирной связи при [c.444]

Радиоиммунологический анализ отличается не только высокой специфичностью, но и исключительно высокой чувствительностью, В своей речи, произнесенной по случаю присуждения Нобелевской премии, для наглядной характеристики чрезвычайно высокой чувствительности радиоиммунологического метода Ялоу сравнила концентрацию определяемого этим методом гормона в анализируемом растворе с концентрацией сахара в очень большом озере после растворения в нем одного кусочка. [c.785]

Моноклональные антитела уже используются в коммерчес-ских наборах для проведения радиоиммунологического анализа, и их доступность позволила предложить альтернативные методы анализа, когда используется избыток меченых антител (иммунорадиометрический анализ). Эти методы иногда обладают большей чувствительностью. [c.330]

Известны несколько специфических опухолевых маркеров, которые с успехом используются в диагностике, прогнозировании и выявлении распространения опухолей (т, е. метастазов). Некоторые из них обнаруживаются в крови (обычно с помощью метода радиоиммунологического анализа), а другие находят в препаратах опухолей. Так, а-фетопротеин является главным белком сыворотки плода его содержание уменьшается в течение первого года жизни. Определяя содержание а-фетопро-теина в плазме при помощи метода РИА, удалось установить, что оно повышается у многих больных с гепатомой (рак печени) и при раке семенников (тератоме). У многих больных, страдающих раком прямой кишки, в плазме отмечается повышенное содержание карциноэмбрионального антигена. Дальнейшее его увеличение может служить указанием на неэффективность химио- или лучевой терапии. [c.332]

При крайне низких концентрациях компонентов образование простого бинарного комплекса антиген-антитело не может быть за регистрировано ни визуально, ни простыми инструментальным методами, что вызывает необходимость усложнения аналитическо системы. Одним из путей визуализации образования комплекс является использование меченых соединений, в которых метка мо ет легко детектироваться в концентрациях, сопоставимых с опре деляемой концентрацией анализируемого соединения. Как правило от типа метки зависит название анализа — радиоиммунологически анализ, флуоресцентный иммуноанализ, иммунокофакторный ана ЛИЗ, иммуноферментный анализ и т. д. [c.78]

Уменьшение уровня фибронектина также обнаружено в клетках почки новорожденных хомяков (NHK), инфицированных вирусом простого герпеса (HSV) ( hen et al., 1978). Нормальные первичные культуры и не образующие опухолей линии клеток, инфицированных вирусом (HSV), имели высокий уровень фибронектина, количество которого определялось с помощью радиоиммунологического анализа. [c.95]

Следующий этап в истории создания чувствительных методов иммунологического анализа связан с открытием Фарром в 1958 г. [13] и Яллоу и Берсоном в 1960 г. [14] технологии мечения антигенов, антител и небольших пептидных гормонов радиоизотопами. Радиоиммунологический анализ позволил определять чрезвычайно малые концентрации (вплоть до пмоль/л) таких молекул, как инсулин, и выдвинул новые специальные требования к технологии получения антисывороток. Для иммунизации животных стали использоваться конъюгаты гаптенов (гормонов) с молекулами-носителями. Именно этим способом удалось получить антитела с такой степенью специфичности и аффинности, какая раньше никогда не требовалась. [c.13]

Золотое правило при взятии проб крови — это включе-ние в систему тестирования именно того метода, для осуществления которого данная аитисыворотка в конечном счете предназначается. Действительно, антисыворотка может работать в методе Ухтерлони, но обладать слишком малой специфичностью и (или) авидностью для осуществления радиоиммунологического анализа, для которого и была предназначена. [c.92]

В 1959 г. Ялоу и Берсон разработали количественный иммунологический метод определения инсулина в плазме человека с использованием инсулина, меченного радиоактивным изотопом йода. Предложенный метод основан на конкуренции между немеченым инсулином плазмы и Ч-инсулином за постоянное и ограниченное число специфических мест связывания на антителах к, инсулину. Количество меченого инсулина, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству инсулина в образце плазмы. Метод, столь простой и изящный по своему замыслу, удалось осуществить благодаря легкости измерения предельно низких уровней радиоактивности, а также благодаря высокой специфичности связывания определяемого, вещества антителами. Сочетание чувствительности и специфичности составляет основу этого гибкого аналитического инструмента, названного радиоиммунологическим анализом (РИА). [c.8]

Радиоиммунологический анализ (РИА), предложенный Ялоу и Берсоном (Yalow, Berson, 1959), значительно ускорил важные открытия в области биомедицинских наук и превратился в стандартный инструмент лабораторных исследований в медицине. В наши дни стало обычной практикой проведение миллионов клинических анализов с использованием РИА. Быстрое и широкое признание РИА в качестве рутинного клинического метода можно объяснить 1) его универсальностью РИА позволяет определять любое соединение, против которого получены специфические антитела 2) избирательностью и специфичностью [c.10]

Сэндвич-ИФА пригоден для количественного определения веществ, содержащих много антигенных детерминант, например для антител, ревматоидных факторов, полипептидных гормонов, белков и поверхностных антигенов гепатита В. С точки зрения точности, чувствительности и удобства сэндвич-ИФА сопоставим с радиоиммунологическим анализом. При помощи сэндвич-ме-тода были количественно определены макромолекулярные антигены на уровне аттомолей (Ishikawa et al., 1980). [c.26]

При смешивании липосом с антителами и комплементом высвобождается заключенная в липосомы пероксидаза хрена, активность которой измеряют при помощи кислородного электрода. Свободный теофиллин, содержащийся в образцах, мешает связыванию антител с липосомами и, таким образом, снижает литическую активность системы комплемента. В результате уменьшается скорость расходования кислорода. Это позволяег построить калибровочную кривую для надежного определения свободного лекарственного препарата в интервале 4—40 нМ. (рис. 9-2). Важно, что высокая чувствительность достигается, при использовании дешевой электродной системы детектирования. Столь же обнадеживающие результаты были получены при анализе тироксина и IgG в сыворотке спектрофотометрическим методом на основе комплемента (Braman et al., 1984), Использованные липосомы были покрыты специфическими антигенами и содержали щелочную фосфатазу. Авторы показали, что результаты определения тироксина и IgG этим методом довольно-хорошо коррелируют с результатами радиоиммунологического-анализа. По-видимому, фермент, активность которого демаскируется комплементом, остается в данном случае внутри липосом, но они становятся проницаемыми для субстрата. [c.125]

Высокая стабильность ферментного конъюгата является одним из наиболее важных преимуществ методов ИФА по сравнению с радиоиммунологическим анализом. Малеимидные производные при хранении в присутствии 1% БСА, 0,1% азида натрия и меркаптоэтанола сохраняют стабильность в течение 1— [c.176]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.783 , c.784 ]

Биотехнология (1988) -- [ c.329 , c.330 ]

Антитела Методы Т.1 (1991) -- [ c.0 ]

Иммунологические методы исследований (1988) -- [ c.321 ]

Иммуноферментный анализ (1988) -- [ c.0 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.27 , c.261 , c.270 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.296 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология