Стерильные пятна бактериофагов

Рис. 37. Негативные колонии (стерильные пятна) бактериофагов, о - пятна фага Тг б — пятна фага Т1.

Рис. 4.1. Выявление вирусов по местным некрозам, зонам лизиса или стерильным пятнам. А. Местные некрозы, вызванные вирусом табачной мозаики на листе табака. Б. Зоны лизиса, возникшие в культуре ткани под действием вируса полиомиелита. В, Стерильные пятна, или бляшки , на бактериальном газоне — результат заражения бактериофагом.

Рис. 14. Вирус коровьей оспы, титрованный на кролике (а) стерильные пятна, вызванные размножением бактериофага (б) местные поражения (вирус табачной мозаики) (в) кристаллический вирус кустистой карликовости помидор (г) и электронная микрофотография табачной мозаики (й).

Для проведения экспериментов по инактивации вирусов облучением необходимо получить количественную оценку активности вируса. Поскольку вирусы нельзя разводить на искусственной среде, определение их активности связано с заражением соответствующих восприимчивых организмов, и потому методы определения различны для растительных вирусов животных вирусов и бактериофагов. В случае бактериофагов количественная оценка наиболее точна. Для оценки используется следующий метод. На пластинку твердой питательной среды, подходящей для роста данных бактерий, наносится капля суспензии, содержащая несколько миллионов этих организмов, и определенного размера капля суспензии фага. С помощью стеклянного шпателя жидкость равномерно распределяется по поверхности питательной среды. После инкубации густо засеянной бактериями пластинки на ее поверхности образуется сплошная бактериальная пленка со светлыми участками в местах размножения отдельных частиц фага, которые вызывают лизис бактерий в непосредственной от них близости. Эти светлые участки, или стерильные пятна , хорошо различимые невооруженным глазом, показаны на рис. 14, б. Количество стерильных пятен пропорционально концентрации фага (если она не избыточна, что приводит к слиянию отдельных стерильных пятен) и немногим меньше числа частиц фага, нанесенных на пластинку (Эллис и Дельбрюк, 1938, полагают, что отношение равно 1 2). [c.87]

Фаг Р1 образует очень маленькие стерильные пятна, которые трудно различить в старых чашках. Чтобы свести к минимуму эту проблему, используют только толстый слой агара (30—35 мл), залитого в чашки не ранее чем за 8—12 ч до использования. Пятна диаметром больше 1 мм наверняка относятся к примесям (обычно фаг Т1). Из лизата на одной чашке обычно имеют от ЫО до 5-10 ° фаговых частиц. Достаточное для эксперимента по локальному мутагенезу количество бактериофага Р1 получают с 20—30 чашек. [c.47]

Бактериофаг С активен только в отношении классического варианта холерного вибриона, бактериофаг Эль Тор II действует только на вариант Эль Тор. Наличие лизиса в виде одного стерильного пятна или группы мелких пятен на месте нанесения бактериофага в рабочем разведении оцени- [c.244]

Таблица 15.1. Стерильные пятна бактериофага Т4 дикого типа и мутантов гП на двух штаммах Е. oli

Инфицирование клетки Е. соИ бактериофагом происходит следующим путем фаг впрыскивает свою ДНК через клеточную стенку в цитоплазму. Приблизительно через 20 мин после этого клетка лопается, и из нее выходит около 100 полностью готовых копий исходной вирусной частицы. Такая высокая скорость размножения позволяет проводить в пробирке в течение 20 мин генетические эксперименты, для которых потребовалось бы все население земного шара, если бы эти опыты проводились на людях. Главные принципы, лежащие в основе этого метода, были ясно изложены Бензером [130], который впервые составил карту тонкого строения гена. Частицы бактериофагов, подобно бактериям, можно посеять в чашке с агаром. Отличие заключается лишь в том, что агар должен содержать однородную суспензию бактерий, чувствительных к вирусу. В какой бы участок чашки ни попали вирусные частицы, они заражают какую-либо бактерию. Вокоре инфекция распространяется на соседние бактерии и в результате образуется стерильное пятно (рис. 15-20). Число основных вирусных частиц, содержащихся в суспензии, можно легко определить, сосчитав число стерильных пятен, образовавшихся в результате посева. [c.248]

У бактериофагов особенно легко выявляются такие мутанты, которые связаны с приобретением или утратой способности поражать некоторые типы бактерий. Если, например, бактериальную культуру, расположенную на агаровой пластинке, покрыть суспензией фаговых частиц, которые, вообще говоря, не способны поражать данный бактериальный штамм, то с большей частью агаровой пластинки ничего не произойдет. Однако в некоторых местах можно будет обнаружить круглые светлые дыркл (стерильные пятна или бляшки), которые образовались вследствие того, что бактерии под действием фага подверглись лизису. Лизис в свою очередь был вызван тем, что произошла спонтанная мутация, в результате которой определенная фаговая частица и все ее потомки стали вирулентными. Этот новый штамм можно выделить, если взять фагов из того места, где обнаружено пятно. [c.257]

Область хромосомы с прямо относится к способности бактериофага X образовать профаг. На генетической карте изображены положения несколькнх характерных мутантов фага с утраченной или уменьшенной способностью к лизогенизации. Таковы мутант с ( lear — светлый) и мутант со (от слова кокарда), дающий светлые стерильные пятна, но с небольшим мутным кружком в центре. В области с находятся цистроны, управляющие синтезом ряда бел- [c.383]

Уже в самых первых своих опытах с фагом Д Эррель наблюдал на плотном газоне бактериального роста на поверхности питательного агара стерильные пятна- , или бляшки. Он установил, что такие стерильные пятна представляют собой участки, где бактерии были разрушены колониями бактериофага, развившимися из родительских фаговых частиц, присутствовавших в бактериальном инокулуме. Д Эррель понял, что образование таких легко распознаваемых стерильных пятен может служить для определения числа инфекционных единиц, содержащихся в суспензиях фага. Поэтому он разработал след ющий метод подсчета стерильных пятен, который широко используется и сейчас на поверхность твердого слоя питательного агара в чашке Петри наносят примерно 10 клеток бактерии-хозяина и суспензию фага в соответствующем разведении, которую необходимо протитровать, и чашку инкубируют. [c.254]

Каждое стерильное пятно порождается одной фаговой частицей, а не совместным действием двух или нескольких частиц (что теоретически вполне можно было бы допустить). Это подтверждается тем, что число стерильных пятен, образующихся на любой чашке, прямо пропорционально объему суспензии данного бактериофага, смешанной с суспензией бактерий. На фиг. 125 приведены результаты опыта, в котором одинаковые опъемы одного и того же фаголизата с постепенно возрастающей концентра- [c.254]

При одинаково.м помутнении в обоих сосудах для окончательного заключения об отсутствии бактериофага необходимо произвести дополнительное исследование высев на плотную питательную среду содержимого опытной и контрольной пробирок. Высев делают на среду в чашюи Петри шпателем, чтобы получить оплошной рост микробов. Чашки ставят в термостат и после 24 ч инкубирования при 37 °С учитывают результаты. Посев из контрольного сосуда даег сплошной рост микробов. При наличии фага в исследуемом материале на фоне сплошного роста микробов появляются стерильные пятна — колонии бактериофага. [c.76]

Емкость клонирующих векторов была значительно повышена с появлением векторов, сконструированных на основе хромосомы бактериофага X. Получившие широкое распространение векторы серий haron, Xgtll и XBMBL обладают, по крайней мере, двумя существенными преимуществами перед плазмидными векторами. Во-первых, векторы на основе ДНК фага X обладают значительно большей емкостью, в них можно клонировать фрагменты ДНК длиной от 5 до 25 т.п.о. Во-вторых, фаговые частицы, содержащие упакованную ДНК, способны проходить литический цикл развития внутри бактериальных клеток и поэтому образовывать стерильные пятна (бляшки) на газоне бактерий. Такие бляшки содержат в концентрированном виде как сами фаговые [c.80]

Проверка на отсутствие бактериофага производится следующим образом. Посевной материал петлей (1 раз) стерильно переносят в пробирку со стерильной дистиллированной водой. Пробирку энергично встряхивают в течение 5—10 мин, после чего из нее отбирают 0,2—0,3 мл среды и переносят в чашку Петри с чистой культурой Вас. mesenteri us на МПА. Испытуемый посевной материал шпателем тщательно размазывают по всей поверхности. Инкубацию культуры осуществляют в термостате при температуре 40 0,5°С в теченне 24 ч. После инкубации на чашках Петри с чистой культурой не должны выявляться фагоцитозные пятна, которые указывают на лизис бактерий бактериофагом. [c.73]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология