Гибридизация колоний

Рис. 19.8. Гибридизация колоний позволяет осуществлять селекцию химерных плазмид, несущих специфическую последовательность, за счет ее комплементарности с радиоактивным зондом.

Гомологичная рекомбинация в клетках Е. соИ может применяться в качестве метода, альтернативного гибридизации колоний [c.77]

В рассмотренных выше случаях клонотеки последовательностей представляли собой суспензии рекомбинантных бактериальных клеток или фаговых частиц, в которых отдельные клоны, представленные многими тысячами индивидуальных частиц, никак не были упорядочены в пространстве друг относительно друга. Такие клонотеки отвечают многим генно-инженерным задачам, например, могут быть эффективно использованы для отбора клонов методом гибридизации колоний (см. ниже). Однако в ряде случаев, например, когда процесс отбора занимает длительное время и требует анализа каждого индивидуального клона, невозможно одновременно исследовать все клоны клонотеки. По- [c.160]

Рис 9.4. Поиск клонов с рекомбинантными молекулами ДНК методом гибридизации колоний [c.281]

Модификацией метода служит гибридизация колоний, при которой из тысяч колоний, выросших на чашке, можно выявить одну, специфически гибридизирующуюся с выбранным геном-маркером. Метод позволяет подсчитать число микроорганизмов нужного вида или с необходимой функцией (в зависимости от примененного гена для гибридизации) среди большого количества сопутствующей микробиоты из природных проб. [c.258]

Как осуществляют селекцию определенного клона геномной ДНК из библиотеки Один из методов называется гибридизацией колоний. Последовательность операций этого метода приведена на рис. 19.8. Бактериальные колонии, несунще химерные векторы, лизируют на нитроцеллюлозных фильтрах. Затем их ДНК денатурируют и фиксируют на фильтре. Фильтр гибридизуют с радиоактивным зондом (обычно это клонированная кДНК), соответствующим интересующей исследователя последовательности. Все колонии, с которыми гибридизуется зонд, при авторадиографии выявляются в виде темных пятен. После этого соответствующие химерные векторы могут быть выделены из исходной библиотеки. [c.244]

Как сказано выше, приведенные здесь методики используются для отбора уникальных космидных (или плазмидных) клонов из больших библиотек с применением генетической селекции, а не скрининга библиотек путем гибридизации колоний. Этот подход получил широкое распространение использование в качестве селекционных зондов последовательностей, клонированных в pU 8 и pU 9, позволяет выделить многие космидные клоны из библиотек мыши и человека (см., например, [5, 6, 22]). [c.82]

Для того чтобы максимально эффективно использовать моноклональные антитела в функциональном анализе, необходимую, чтобы сайты связывания были картированы как можно точнее. Довольно простой подход к решению этой проблемы состоит в блот-гибридизации колоний с серией перекрывающихся гибридных белков, что позволяет идентифицировать искомые последовательности, состоящие примерно из 50 аминокислот. Методика блот-гибридизацки колоний приводится в табл. 6.1. Следующий шаг — это синтез перекрывающихся пептидных последовательностей для идентификации участка с точностью до нескольких аминокислот. Мы успешно использовали этот подход при картировании РАЬ204, ингибирующего АТРазу [6], [c.200]

При наличии соответствующего зонда для гибридизации метод гибридизации колоний на фильтрах представляет собой один из наиболее мощных и эффективных способов скрининга трансформантов в отношении нужного клона кДНК или по крайней мере уменьшения сложности в полученной библиотеке кДНК. Варианты метода были описаны в литературе (например, Maniatis et al., 1983). [c.69]

Скрининг клонотеки (более двух тысяч трансформантов) с помопщю интегративной селекции и методом гибридизации колоний in situ с зондами повторяюпщхся элементов ДНК человека показал, что YA -клоны с ДНК человека составляют около 1%. [c.73]

Методом TAR-клонирования было получено 1806 первичных трансформантов. Многоступенчатый скрининг, включающий генетическую селекцию, гибридизацию колоний ш situ с меченой тотальной ДНК человека и inter-Alu-P R, показал, что 76 из них содержат вставку ДНК человека (рис. 26). Поскольку тотальная ДНК клеток соматического гибрида содержит 0.05% ДНК человека, а выход клонов 7р среди TAR трансформантов составил 4,2%, что на два порядка выше, очевидно, что избранный метод TAR-клонирования оказался примерно в 100 раз эффективнее традиционного. [c.78]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология