Метод молекулярной гибридизации

Краткое описание методов молекулярной гибридизации ДНК и их оценка даны в приложении. [c.84]

На чем основан метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот и какое значение он имеет для биологических исследований [c.288]

В настояшее время для диагностики вирусных растений используют иммуноферментную технику, моноклональные антитела, метод молекулярной гибридизации меченых фрагментов РНК- и ДНК-вироидов и вирусов с вирусами тестируемого объекта. Эти методы очень чувствительны, но трудоемки и дорого-стояши. [c.199]

В молекулярной биологии широко используется способность денатурированных ДНК ренатурировать с восстановлением исходной двуспиральной структуры. Она лежит в основе метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот, который позволяет выявлять степень сходства различных ДНК (а также РНК). Для этого денатурированную ДНК (если изучается гибридизация двух различных нуклеиновых кислот, то одна из них несет радиоактивную метку) помещают в условия, оптимальные для образования двойных спиралей (ионная сила раствора — около 0,2 температу за — на 10—20 "С ниже Тт нативной ДНК). В случае полностью комплементарных цепей ДНК со временем они целиком превратятся в двуспиральные молекулы. Если в смеси присутствуют как комплементарные, так и некомплементарные цепи ДНК, то после ренатурации первых тем или иным способом определяют долю двуспиральных молекул. В настоящее время широко распространены методы, когда денатурированные молекулы ДНК одного типа закрепляются на нитроцеллюлозных фильтрах, которые затем помещают в раствор ДНК (или РНК) другого типа. После образования двуспиральных комплексов на фильтрах они легко могут быть отмыты от несвязав-шейся ДНК- Этот же подход используется при выявлении цепей ДНК (или РНК), комплементарных другим ДНК (или РНК), после разделения их электрофорезом в гелях. [c.30]

Однако нуклеотидный состав ДНК — признак в основном крупномасштабный, кроме того, могут встречаться случайные совпадения состава ДНК у далеко отстоящих родов, поэтому большое внимание в монографии уделяется методу молекулярной гибридизации ДНК применительно к целям систематики. [c.4]

III. Определение степени гомологии последовательностей ДНК с помощью методов молекулярной гибридизации [c.133]

В монографии рассматриваются особенности различных методов молекулярной гибридизации ДНК — ДНК, отмечаются преимущества и недостатки каждого из них и необходимость соблюдения строго определенных условий для получения четких повторяющихся результатов. Так же как и по нуклеотидному составу ДНК, приводятся конкретные данные отечественной и зарубежной литера-) туры, которые могут служить справочным материалом по уровню молекулярного сходства ДНК у ряда бактерий. [c.4]

Очевидно, недостаточно полная информация, которую дает даже комплекс всех доступных исследователю фенотипических свойств, приводит к необходимости подкреплять характеристику по физиологическим и другим свойствам бактерий данными о структуре их ДНК. Поскольку ДНК представляет собой наследственный материал клетки, можно полагать, что подобный подход наиболее надежно способствует приближению к естественной классификации бактерий. Однако изучение нуклеотидного состава ДНК явилось лишь самым начальным этапом в упорядочении систематики бактерий на основе строения генома. Для ее дальнейшего усовершенствования необходимо более глубокое изучение строения ДНК и в частности нуклеотидной последовательности. О сходстве нуклеотидных последовательностей ДНК дает возможность судить метод молекулярной гибридизации ДНК, уже нашедший достаточно широкое применение в современных исследованиях. [c.79]

Приведенные примеры свидетельствуют о том, что применение метода молекулярной гибридизации ДНК в ряде случаев может являться решающим критерием в систематике трудно идентифицируемых другими методами микроорганизмов. [c.91]

Методом молекулярной гибридизации можно установить, что ДНК [c.63]

D — двухступенчатое клонирование для отбора клонов (использовались варианты А, В, С методов отбора и метод молекулярной гибридизации) [c.183]

Метод молекулярной гибридизации ДНК был применен для изучения степени гомологии генома пастерелл [c.84]

Учитывая, что количественные данные о степени сходства первичных структур ДНК позволяют перейти к таксономии, основанной на родственных связях, большинство современных систематиков (Майр, 1971 Антонов и соавт., 1972 Медников и соавт., 1973 Тахтатджан, 1972 Заварзин, 1974) возлагают большие надежды на метод молекулярной гибридизации ДНК в применении к созданию естественной системы организмов. [c.86]

В этом разделе дается представление о принципах методов молекулярной гибридизации ДНК, нашедпшх в последние годы наибольшее распространение. [c.133]

Рекомбинантные ДНК могут быть широко использованы для выявления возбудителей методом молекулярной гибридизации. Этот метод позволяет быстро и точно диагностировать инфекционные болезни, может использоваться для пренатального диагноза генетических дефектов, выявления животных — носителей возбудителя. Метод основан на использовании зондов — ДНК, меченных радиоактивными соединениями или биочипами, с последующей гибридизацией зондов с образцами ткани животного — носителя возбудителя болезни. Это особенно ценно для выявления скрытых инфекций (хламидиозы, медленные инфекции). Использование молекулярных зондов на основе ДНК позволяет идентифицировать близких по своим свойствам возбудителей. [c.254]

Все типы РНК (рРНК, тРНК, мРНК) Синтезируются сходным образом. Поэтому для любой имеющейся в организме молекулы РНК можно найти (например, методом молекулярной гибридизации ДНК—РНК) участок ДНК, которому она строго комплементарна. [c.355]

Для идентификации бактерий иногда используют также метод ДНК-зондов (генных зондов), являющийся разновидностью метода молекулярной гибридизации ДНК—ДНК. Реакция гибридизации ведется в этом случае не между двумя препаратами тотальной ДНК, а между фрагментом нуклеотидной последовательности ДНК (зондом), включающим ген (генетический маркер), ответственный за какую-то определенную функцию (например, устойчивость к какому-нибудь антибиотику), и ДНК изучаемой бактерии. Самым распространенным способом создания генных зондов является выделение специфических фрагментов путем молекулярного клонирования. Для этого вначале создают банк генов изучаемой бактерии расщеплением ее ДНК эндонуклеазами рестрикции, а затем отбирают нужный клон из суммы фрагментов ДНК методом электрофореза с последующей проверкой генетических свойств этих фрагментов методом трансформации. Далее выбранный фрагмент ДНК с помощью фермента лигазы вводят в состав подходящей плазмиды (вектора), а эту комбинированную-плазмиду вводят в удобный для работы штамм бактерий (например, Es heri hia соН). Из биомассы бактерии, несущей ДНК-зонд, выделяют плазмидную ДНК и метят ее, например, радиоизотопной меткой. Затем осуществляют гибридизацию ДНК зонда с ДНК бактерии. Образовавшиеся гибридные участки проявляют методом ауторадиографии. По относительной частоте гибридизации генетического маркера с хромосомой той или иной бактерии делают заключение о генетическом родстве этих бактерий с исследуемым штаммом. [c.197]

Если раствор ДНК, денатурированной нагреванием, охлаждать, то вновь возникают слабые связи, и при определенных условиях могут получиться двуспиральные структуры, идентичные структурам исходного (до денатурации) препарата т. е. произойдет ренативация (отжиг ДНК). На явлениях денатурации и ренативации основс1н метод молекулярной гибридизации, который применяют для изучения строения нуклеиновых кислот, а также для их фракционирования. [c.112]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология