Флуорометрия ошибки

Прямая количественная флуорометрия на пластинках. Непосредственное количественное определение на пластинках пятен флуоресцирующих соединений может проводиться как методом измерения флуоресценции, так и методом гашения флуоресценции, основанным на гашении флуоресценции вещества, предварительно нанесенного на сорбционный слой. Ошибки первого метода находятся приблизительно в пределах 3—5%, второго — 5-8%. [c.43]

Так же как и спектрофотометрические исследования, исследование спектра флуоресценции можно использовать как для определения структуры и идентификации соединений (флуоресцентная спектрометрия), так и для определения концентрации люминесцирующих веществ (флуоресцентная фотометрия, или флуорометрия), однако в последнем случае необходима специальная техника. Необходимо тщательно следить, чтобы измерять интенсивность флуоресцентного излучения и не измерять одновременно часть непоглощенного возбуждающего излучения. Это достигается прежде всего тем, что непоглощенную часть возбуждающего света задерживают, помещая на пути луча света после пробы вторичный фильтр флуоресцентное излучение большей длины волны полностью пропускается этим фильтром. Однако лучше всего измерять флуоресцентное излучение в направлении, перпендикулярном направлению возбуждающего излучения, так как в этом случае благодаря геометрии системы возбуждающий свет не может попасть в приемник флуоресцентного излучения. Если же флуоресцентное излучение пробы заметно сорбируется вновь, то лучше всего измерять флуоресцентное излучение под острым углом к направлению возбуждающего света, поместив кювету под углом к источнику первичного излучения. При этом необходимо тщательно следить, чтобы флуоресцентное излучение, проходя через поверхность облучения, попадало в монохроматор и, следовательно, в приемник излучения. При использовании такого метода часть первичного излучения, отраженного от расположенной под углом стенки кюветы, может попасть в приемник излучения, так что и в этом случае рекомендуется при особенно точных измерениях дополнительный защитный фильтр. Результаты всех трех методов могут искажаться за счет отражения флуоресцентного излучения от мениска жидкости, поскольку очень редко удается компенсировать эту ошибку. Наиболее воспроизводимы измерения в кюветах с крышками, которые могут быть заполнены без образования воздушного пузырька. [c.430]

Для определения мы применили прямые измерения затухания флуоресценции с помощью фазового флуорометра А. М. Бонч-Бруевича, Б. А. Молчанова и В. И. Широкова, обладающего разрешающей силой по времени 2-10" сек. [4]. В качестве приемника излучения флуоресценции применялся отобранный из 10 штук. лучший экземпляр фотоумножителя с оксидно-цезиевым катодом ФЭУ-22. Относительная ошибка в измерениях т составляла около 10% для растворов и была значительно выше ири измерениях с био.тогическими объектами. Для проверки надежности измеренпй был дополнительно использован фотоумножитель с сурьмяно-цезиевым катодом, сенсибилизованным к красной области спектра, который обладал весьма малым темповым током и большой чувствительностью. Для растворов расхождения в ве-.тичинах 1, измеренных на обоих фотоумножителях, не превышали 20%, для биологических объектов расхождения были более значительными и достигали 100%. [c.415]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология