Периодическая культура с добавлением субстрата

Рис. 16.2. Изменение во времени концентрации клеток и субстрата в периодической культуре (А), периодической культуре с добавлением субстрата (5) и в непрерывной культуре (В).

Периодическая культура с добавлением субстрата [c.352]

Периодическую ферментацию с добавлением субстрата можно использовать для культивирования не только микроорганизмов, но и клеток млекопитающих и насекомых. Это очень важно, поскольку 1) такие культуры все шире применяются для получения белковых продуктов, имеющих медицинское значение 2) без периодического добавления субстрата животные клетки не очень эффективно синтезируют чужеродные белки. [c.353]

Вообще говоря, при получении чужеродных белков с помощью рекомбинантных Е. соИ руководствуются тем, что при максимальной конечной плотности культуры получается и максимальное количество продукта. В ферментерах периодического действия с добавлением субстрата концентрация рекомбинантных клеток Е. соИ достигает 50 грамм сухого вещества на 1 л среды (а в некоторых случаях >100 г/л). (Вес сухого вешества клеток Е. соН составляет примерно 20-25% веса влажного вещества.) [c.356]

Количество биомассы измеряется в граммах сухого вешества на литр культуры. Процедура Периодическая ферментация + Тф>> означает, что к культуре добавлено ОД т триптофана. При периодической ферментации с добавлением субстрата в среду добавляли 0,1 г триптофана каждые 2 ч - в общей СЛОЖНОСТИ пять раз в течение 10 ч. При добавлении большего количества триптофана не увеличивались ни биомасса, ни количество синтезированного белка. [c.363]

Ферментацию можно проводить по-разному. При периодической ферментации посевной материал вводят в свежую культуральную среду и проводят культивирование, не добавляя субстрат до тех пор, пока количество нужного продукта не достигнет максимума. В этих условиях рост культуры проходит шесть этапов латентную фазу, фазу ускорения, логарифмическую (log) фазу, фазу замедления, стационарную фазу и фазу отмирания. Больше всего белков синтезируется во время логарифмической фазы, а многие низкомолекулярные продукты — во время стационарной. При таком способе ферментации необходимо тщательно следить за тем, чтобы клетки были собраны в нужное время. При периодической ферментации с добавлением субстрата в биореактор добавляют свежую культуральную среду через разные интервалы времени, как правило для того, чтобы продлить логарифмическую фазу. Непрерывная ферментация предполагает добавление свежей среды в течение всего процесса и одновременное удаление клеток и отработанной среды. [c.367]

Физиологические эффекты периодическая культура и периодическая культура с добавлением субстрата (с подпиткой) непрерывная (проточная) культура [c.388]

В результате аэрации и перемешивания проточной культуры образуется аэрозоль, содержащий большое число культивируемых микроорганизмов. Поэтому соединительный канал, через который поступает в ферментер свежая среда, может подвергнуться заражению. Отсюда возникает необходимость оснащения этого канала специальным прерывателем , который действует по типу асептического затвора между ферментером и резервуаром со свежей средой. Рис. 10.5 иллюстрирует основной принцип такого прерывателя [21]. Его нижняя часть обеспечивает медленную, но постоянную подачу стерильного воздуха, предотвращая тем самым аэрозольное заражение канала, через который поступает среда. Верхняя камера устройства обеспечивает дополнительное прерывание потока поступающей жидкости. Этот прерыватель может быть использован как для периодического культивирования с добавлением субстрата, так и для непрерывного культивирования. [c.403]

Периодическая культура с добавлением субстрата (подпиткой) [c.412]

Периодическое добавление субстрата к растущей культуре рекомбинантных микроорганизмов продлевает экспоненциальную фазу и отсрочивает наступление стационарной фазы, во время которой инициируются клеточные ответы на стрессовые воздействия, происходит синтез протеиназ и другие изменения метаболизма, уменьшающие выход рекомбинантного белка. Для поддержания метаболизма клетки-хозяина количество добавляемого субстрата необходимо постоянно увеличивать. Чтобы обеспечить непрерывный синтез рекомбинантного белка и его стабильность, нужно тщательно контролировать процесс и добавлять субстрат (источник углерода и азота вместе с микроэлементами) сразу, как только в этом возникнет нсобходмость. В зависимости от генотипа микроорганизма и природы рекомбинантного белка при периодической ферментации с добавлением субстрата выход продукта может возрасти на 25-1000 % по сравнению с простой периодической ферментацией. [c.353]

Один из подходов к увеличению количества рекомбинантного белкового продукта состоит в максимальном увеличении плотности культуры трансформированных клеток, синтезируюших данный продукт. Для достижения этой цели лучше всего использовать режим периодической ферментации с добавлением субстрата. [c.368]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология