Культуры с высокой плотность

СЛИШКОМ велики для колб или если они очень плотные, они затрудняют доступ кислорода в бактериальные культуры высокой плотности [58]. В таком случае следует использовать ватно-марлевые пробки (рис. 10.10), обеспечивающие лучший доступ кислорода. Их делают следующим образом. [c.384]

Культуры с высокой плотностью [c.356]

В условиях, ограничивающих рост нормальных клеток, трансформированные клетки как менее требовательные к факторам роста, пролиферируют до более высокой плотности и они становятся способными культивироваться в глубинных условиях (суспензионные культуры) при изменении своей формы до сферической Следовательно, и у грибных, и у животных, а также у ряда растительных клеток их морфологическое сходство (сферичность, округлость) в глубинных условиях выращивания находится под контролем генотипа и сопровождается изменением преимущественно клеточной мембраны [c.154]

Однако поведение клеток в какой-то мере зависит и от окружающих условий. Поэтому исследователям приходится тщательно подбирать состав культуральной среды, в которой пигментные клетки могут выживать. В некоторых средах или при слишком высокой плотности культуры клетки выживают, но не синтезируют или почти не синтезируют пигмента. Но да лишенные возможности проявить свою специализацию, эти клетки остаются детерминированными как пигментные оказавшись снова в более подходящи условиях, они вновь начинают вырабатывать пигмент. Никакие изменения [c.132]

Поглощение растворенного кислорода жидкой бактериальной культурой зависит от плотности клеток и скорости их роста. Потребность в растворенном кислороде определяется его использованием клетками и удовлетворяется за счет постоянной диффузии кислорода из газовой фазы в жидкую. Область поверхностного контакта между газом и жидкостью часто регулирует поглощение кислорода или объемную скорость его переноса. Если эта область велика, то скорость переноса больших объемов кислорода также значительна, что позволяет культуре с высокой плотностью быстро расти без лимитирования по Ог. Область поверхностного контакта увеличивается при снижении отношения объема жидкости [c.384]

К специфическим преимуществам использования диализа при культивировании бактерий относятся 1) удлинение экспоненциальной фазы роста в периодической культуре, что позволяет получать высокие плотности живых клеток 2) увеличение стационарной фазы роста культур, что позволяет увеличить выход метаболитов, связанных с этой фазой 3) ослабление контроля путем ингибирования продуктом за счет удаления или [c.418]

Все это приложимо только к разбавленным суспензиям. При величинах поглощения выше 0,3 и при длине волны 500 нм или меньше следует принимать во внимание отклонения от закона Ламберта — Бэра (см. пример, приведенный на рис. 11.5). Этот вопрос подробно обсуждается в работе [26]. О таких отклонениях часто забывают, и это очень осложняет анализ микробиологической литературы по турбидиметрии. Одним из способов обойти эту проблему является ограничение плотности культуры или разведение ее до плотности ниже 0,3. Однако фотометрические измерения на этом уровне не точны, а разведение с помощью пипеток может явиться источником дополнительных ошибок. Для измерения малых поглощений крайне важно, чтобы кюветы были тщательно подобраны, очень хорошо промыты и правильно установлены в спектрофотометре. Предпочтительнее проводить измерения при высоких плотностях культуры и затем корректировать их на отклонение от закона Ламберта — Бэра. [c.480]

Выделение ДНК для изучения гомологии занимает больше всего времени и вызывает наибольшие технические трудности. Ниже описаны два метода выделения ДНК из 0,5—1,0 л культуры (если культура не доросла до достаточно высокой плотности, может потребоваться больший объем). [c.115]

Более 100 видов зеленых водорослей имеется в коллекции Института физиологии растений АН СССР (Владимирова, Игиатевская, 1966). Для их хранения используется 1%-ная агарпзоваппая среда Тамия. Некоторые виды лучше сохраняются на среде Прата. Водоросли находятся при —10° и слабой освещенности. Пересев ироизводится 1 раз в 1,5—2 мес. В жидкой среде авторы рекомендуют хранить водоросли в колбах объемом 250 мл, засеянных суспензией, взятой из интенсивной культуры высокой плотности. [c.216]

Первое поколение дочерних молекул ДНК состоит наполовину из старых и наполовину из новых полинуклеотидных цепей. Зто было подтверждено замечательным экспериментом на бактериальных культурах с использованием меченых атомов ( N разд. 20.17). Об этом опыте в 1958 г. сообщили М. Мезельсон и Ф. У. Шталь. Они выращивали несколько поколений кишечной палочки Es heri hia oli) на питательной среде, в которой присутствовало соединение азота с высоким содержанием тяжелого изотопа Выделенная в этом случае бактериальная ДНК имела большую молекулярную массу (атомы в молекуле были те же) и большую плотность, чем ДНК, полученная из бактерий, выращенных на обычной среде. Различие плотности определяли методом, называемым ультрацентрифугированием в градиенте плотности. Раствор хлорида цезия помещают в центрифужную пробирку и вращают ротор с такой скоростью, чтобы получить центробежное ускорение, в 100 000 раз превышающее ускорение земного тяготения. В центробежном поле концентрация ионов цезия, имеющих высокую плотность (вместе с компенсирующими их заряд ионами хлора), будет выше в периферическом конце пробирки. Таким образом, по направлению к периферии в пробирке создается градиент плотности. Большие молекулы, вроде ДНК, при введении в пробирку и создании силового поля концентрируются в зонах, где их плотность равна плотности раствора хлорида цезия, т. е. в периферическом конце пробирки. Мезельсон и Шталь перенесли бактерии, выращенные в среде, обогащенной [c.460]

Достичь одновременно и высокого уровня синтеза чужеродного белка, и высокой плотности культуры часто не удается из-за накопления вредных побочных продуктов (в первую очередь ацетата), подавляющих рост клеток и синтез белка. Чтобы уменьшить накопление ацетата в богатой среде, не нарушая роста клеток, можно снизить скорость поглощения глюкозы, добавив в среду ее аналог, метил-а-глюкозид. Альтернативный подход состоит в использовании клеток Е. соИ, несущих мутацию в гене ptsG, который кодирует фермент II глюкозофосфотрансферазной системы. Максимальная плотность культуры Е. соИ дикого типа составила примерно 10 г/л, а культуры Е. соИ с мутацией в гене ptsG - 15 г/л. Кроме того, уровень синтеза Р-лактамазы в мутантных клетках был на 25% выше (на 1 г массы сухого вещества), чем в клетках дикого типа, так что суммарное различие достигает примерно двукратной величины. [c.129]

Гибридомы, подобно большинству других клеточных культур животных, растут относительно медленно, не достигают высокой плотности и требуют сложных и дорогих сред. Получаемые таким образом моноклональные антитела очень дороги, что не позволяет широко использовать их в клинике. Чтобы решить эту проблему, были предприняты попытки создания своего рода биореакторов на основе генетически модифицированных бактерий, растений и животных. Для эффективной доставки и функционирования некоторых иммунотерапевтических средств зачастую достаточно одной антигенсвязывающей области антитела (Fab- или Fv-фрагмента), т. е. присутствие F -фрагмента антитела необязательно. [c.218]

В культурах с высокой плотностью может также возникнуть недостаток кислорода. Чтобы избежать этого, увеличивают количество пост ттающе-го воздуха (разбрызгивание) либо скорость перемешивания или делают и то, и другое. Кроме того, можно подавать в культуру чистый кислород, а не воздух, в котором содержится только 20% кислорода, или выращивать клетки под давлением, чтобы увеличить растворимость кислорода. В качестве альтернативы предлагалось экспрессировать в хозяйских клетках Е. соИ ген гемоглобина Vitreos illa, что значительно увеличило бы поглощение кислорода растущими клетками. [c.356]

В некоторых случаях для достижения высокой плотности культуры и получения больших количеств продукта достаточно проводить ферментацию в обычном периодическом режиме. В одном из экспериментов плазмиду, несушую ген гибридного белка, одним из компонентов которого был пептид инсулина В, помешали под контроль ф-цромотора Е. соИ и вводили в trp -штамм Е. oli] трансформированные клетки [c.363]

Посевной материал (инокулят, от лат. ino ulatio — прививание) заметно сказывается на скорости роста клеток в монослойной культуре. В случае применения первичных клеток необходимо иметь их в более высокой плотности на 1 см внутренней (рабочей) поверхности культиватора. [c.539]

Число возможных восприимчивых к нематоде хозяев не исчерпывается этим перечнем, поскольку к ним относятся многие виды бабочек и жуков, распространенных в Европе. Агрессивность паразита зависит от условий его проникновения в насекомых и от сопутствующих бактерий. До настоящего времени последнему вопросу не уделялось должного внимания, а изучавшийся материал был получен методом аксенической культуры, т. е. был освобожден от сопутствующих нематодам бактерий. Опыты с искусственным заражением нематодами проводили Глезер [16], Герт, Мак-Кой и Глезер [14] и другие исследователи. Было установлено, что в лаборатории или на небольших площадях в природе применение нематод эффективно. Степень зараженности насекомых колебалась от 0,3 до 81%. Однако нематоды не размножались в природных условиях до такой степени, чтобы возникала эпизоотическая форма болезни, чаще заболевание снижалось и затухало под влиянием неблагоприятных для паразита погодных условий. Развитию заболевания способствует повышенная влажность почвы, хорошее ее прогревание, высокая плотность популяции хозяина и ненарушенность поверхностного слоя почвы (отсутствие обработок). В местах применения нематод авторы обнаруживали их через 5 лет, а в многочисленных популяциях даже через 6 с половиной лет. По-видимому, эти показатели далеко не в полной мере характеризуют возможности практического использования этой нематоды- Нематод вносили в почву путем полива водной суспензией, содержавшей инвазионных личинок, или же заливкой этой суспензии в предварительно выкопанные ямки на расстоянии 1,5 м друг от друга. Результаты опытов Герта и др. [14], приведенные в таблице 25, показывают, что применение нематоды на небольших делянках обеспечивало относительно высокую степень зараженности личинок японского жука. [c.576]

В благоприятных условиях определенные фитопато-гены устойчиво сохраняются в биотопе и распространяются, вызывая эпифитотии. Длительность сохранения высокой плотности популяции патогена определяется наличием достаточного количества растений-хозяев. Однако, если численность сорной растительности снижается в результате проведения определенных мероприятий, то сокращается и плотность популяции патогена. На этих предпосылках основана классическая стратегия микробиологической борьбы с сорной растительностью, в том числе — с многолетними сорняками вне посевов сельскохозяйственных культур. Для этого преимущественно используют облигатные микроорганизмы с высокой специфичностью, например ржавчинные грибы. [c.210]

По данным Национального института агроботаники Великобритании, до 1957 г. основную роль в росте )фожайности зерновых в стране играли гербициды и удобрения, в последующее десятилетие — повышение норм азота при возделывании новых, устойчивых к полеганию сортов, после 1967 г.— сортосмена. Удельный вес селекции в приросте урожайности пшеницы по этим периодам составлял соответственно 38,42 и 60 % (Silvey, 1978). Созданные в Великобритании в 70—80-е годы короткостебельные высокопродуктивные сорта озимой пшеницы позволили полностью обновить сортимент культуры. Потенциал продуктивности современных сортов английской селекции достиг 140 ц/га. Они толерантны к повышению уровня азотного питания, высокой плотности стеблестоя и практически не нуждаются в применении ретардантов. [c.372]

Согласно данным Кубитчека [34] и Пула 1[49], в процессе клеточного цикла объем клеток Е. соЫ возрастает линейно и количество биомассы— экспоненциально. Тот факт, что после деления клетки имеют наименьший объем, наталкивает на предположение, что с помощью центрифугирования (особенно в градиенте плотности) можно получить популяцию новых дочерних клеток из асинхронной культуры. Данные о линейном увеличении объема клеток на фоне экспоненциального роста их массы свидетельствуют о том, что те клетки, которые готовы к делению, или те, которые уже разделились, имеют самую высокую плотность, несмотря на различия в их размерах. С помощью центрифугирования в градиенте плотности можно получить несколько фракций клеток, причем фракция с наибольшей плотностью будет содержать и молодые (дочерние), и зрелые (готовые к делению) клетки, а фракция с наименьшей плавучей плотностью будет содержать гомогенную популяцию клеток, которые находятся в одинаковой стадии роста. [c.414]

Трансформированные клетки отличаются от нормальных и своим поведением в культуре они слабо прикрепляются к субстрату, не распластываются, у них не образуется упорядоченных пучков внутриклеточных актиновых филаментов (разд. 10.5.4), и они растут до значительно больших плотностей, чем нормальные клетки (разд. 11.1.8). Если к культуре трансформированных клеток, синтезируюших сравнительно мало фибронектина, добавить большое количество этого белка, клетки быстро прилипают к субстрату, распластываются и образуют упорядоченные пучки актиновых филаментов (рис. 12-65). Эти клетки выглядят как нормальные фибробласты, но по-прежнему размножаются до аномально высокой плотности. Видимо, фибронектин способствует клеточной адгезии, но непосредственно не контролирует пролиферацию клеток. Сейчас показано, что очишенный фибронектин помогает связыванию клеток различного типа с другими клетками, а также с коллагеном и иными субстратами. Так как высокие концентрации фибронектина были найдены в области миграции эмбриональных клеток, полагают, что этот гликопротеин влияет на передвижение клеток in vivo, изменяя их адгезивность. [c.237]

Большая часть клеток у животных находится под такой формой контроля роста, что они прекращают продвижение по клеточному циклу, вскоре после митоза. Следовательно, для стимуляции первичной клеточной культуры, прежде чем клетки возобновят движение по циклу к фазе деления, следует устранить ограничение роста. Клетки некоторых быстро растущих опухолей утрачивают чувствительность к контролю роста, и поэтому полученные из опухолей первичные клетки легко адапти руются к росту в культуре и могут дорастать до более высокой плотности по сравнению с клетками из нормальных тканей (см. ниже). [c.22]

Одним из факторов, лимитирующих рост фибробластов, является недостаточное содержание в среде необходимых компонентов (Dulbe o, Elkington, 1973). Следовательно, для получения высокой плотности клеток необходима периодическая замена питательных веществ. А это приводит к постоянному изменению состава среды, омывающей клетки, что весьма нежелательно. Культуры клеток на искусственных капиллярных подложках лишены этого недостатка, но до сих пор не получили достаточного распространения частично из-за трудностей в эксплуатации и частично в связи с проблемами, возникающими при сборе клеток. [c.38]

Существенным фактором культивирования является плотность засева протопл стов. При очень низкой плотности протопласты часто не делятся. С другой стороны, при очень высокой плотности высева затруднения в культивировании возникают на более поздних стадиях, когда на рост могут оказывать влияние выделяемые продукты обмена. Оптимальная плотность протопластов в культуре 3-10 —ЫО в 1 мл. [c.38]

Современные методы иммунизации in vitro основаны на двух системах культивирования лимфоцитов, разработанных в конце 1960-х годов. Метод суспензионного культивирования (R. Mi-shell, R. Dutton, 1966, 1967) был первым методом, в котором иммунизация полностью проходила вне организма. Критическими факторами в данном методе были низкая концентрация кислорода в атмосфере (7%), высокая плотность клеток, легкое покачивание культуры, ежедневное добавление свежей среды и выбор подходящей партии СПК и антигена (использовали эритроциты барана). Эта система была усовершенствована Р. Кликом (1972), который предложил добавлять в среду 2-меркаптоэтанол, предшественники нуклеиновых кислот, инсулин, глутамин, а также дополнительные аминокислоты. При таких условиях иммунный ответ наблюдали в отсутствие покачивания и в атмосфере с 5% СОг. [c.103]

Ни в коем случае нельзя допускать дорастания культур до высокой плотности, при которой начинается массовая гибель клеток. Если превышена плотность 10 /мл, то лучше такую культуру отбросить и разморозить новую партию клеток. [c.105]

В табл. 2 приведены результаты расчета утечки СО2 с протоком среды в зависимости от плотности популяции и концентрации СО2 в газовой фазе и pH среды. Вынос углекислоты даже при низкой РСО2 может достигать одной трети от потребляемой. При высоких плотностях культуры х> 10 г/л) реальный вы-лос будет несколько ниже рассчитанного за счет снижения концентрации растворенной углекислоты. Таким образом. Только при условии, когда РСО2 < 5%, а а > 10 г/л, выносом СО2 со средой можно пренебречь. В остальных случаях потребление углекислоты необходимо рассчитывать по приросту биомассы. [c.35]

После обработки ПЭГ протопласты находятся в стрессовом состоянии ,, и необходимо обеспечить их восстановление путем культивирования в течение нескольких дней при высокой плотности высева (10 жизнеспособных протопластов в 1 мл), часто в присутствии фидерных культура необработанных протопластов. Следует регулярно следить за формированием клеточной стенки и поддерживать плотность клеток иа уровне-около 5X10 в 1 мл до наступления первого деления. Селекцию трансформантов можно осуществлять, как описано в разд. 2.9,3 (совместное-культивирование клеток с агробактериями). [c.211]

Предположим, изучают ДНК такого размера, как ДНК Е. oli (мол. масса 2 10 ). Ее контур четко определит тысяча точек распада, равномерно распределенных по длине молекулы. Если используют время полураспада которого равно 14 дням, и если экспозиция длится 14 дней, то в молекулу ДНК должно быть включено 2000 атомов Это соответствует удельной радиоактивности 2,5 Ки (ммоль Р) (1 Ки = 2,2 10 расп./мии). Это достаточно высокая плотность излучения. Для приготовления образца культуру Е. соИ выращивают в феде с При этом возникает опасность радиационных нарушений не только в растущей клетке, но и в самой ДНК, в которой могут появиться разрывы. Радиоавтография молекул высших организмов еще более затруднена из-за большей чувствительности к радиации. [c.185]

Помните, что культивируемые клетки должны отражать особенности своего происхождения, сохранять характерные свойства тканей, из которых они получены, проявлять признаки дифференцировки и пролиферации, которыми они обладали in situ. С некоторыми клетками эти цели могут быть достигнуты, но в случае других клеток следует учитывать ограничения возможностей существующих методов культуры ткани. Возможно также, что культивируемые клетки окажутся неспособными к одновременной пролиферации и экспрессии дифференцировочных функций. Следовательно, может потребоваться период размножения клеток, сопровождающийся периодом поддержания их в высокой плотности (более 10 клеток/см ), чтобы в клетках появились признаки дифференцировки. [c.51]

Смотреть страницы где упоминается термин Культуры с высокой плотность: [c.252] [c.142] [c.247] [c.263] [c.346] [c.360] [c.255] [c.360] [c.506] [c.41] [c.181] [c.195] [c.115] [c.96] [c.133] [c.134] [c.139] [c.42] [c.11] [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология