Микроинъекция при получении трансгенных мышей

ПОЛУЧЕНИЕ ТРАНСГЕННЫХ МЫШЕЙ ПУТЕМ МИКРОИНЪЕКЦИИ КЛОНИРОВАННОЙ ДНК В ОПЛОДОТВОРЕННЫЕ ЯЙЦЕКЛЕТКИ [c.308]

I. Краткая характеристика метода. Процесс получения трансгенных мышей с помощью микроинъекций схематически показан на рис. 10.2. Сущность каждого этапа экспериментальной схемы изложена ниже со ссылками на соответствующие разделы данной главы, где приводится более детальная информация [c.311]

Рис. 10.2. Схема получения трансгенных мышей путем микроинъекции клонированной ДНК в оплодотворенные одноклеточные яйца.

Процесс получения трансгенных мышей с помощью микроинъекции схематически показан на рис. 18.1. Донорных мышей-самок с экспериментальной суперовуляцией скрещивают с самцами-производителями, через 12 ч после спаривания вскрывают яйцеводы, выделяют оплодотворенные яйцеклетки и помещают их в культуру. Далее в больший из двух пронуклеусов (обычно мужской) инъецируют очищенную [c.449]

Эффективность процедуры получения трансгенных мышей путем микроинъекций сильно варьирует от эксперимента к эксперименту. В оптимальных условиях инъекцию переживает 60-80 % яйцеклеток, из них 10-30 %, имплантируясь в организм реципиентной самки, продолжает нормально развиваться и дает начало потомству. 10-30 % новорожденных мышей оказываются трансгенными. [c.450]

Рис. 19.2. Получение линий трансгенных мышей методом микроинъекций. Яйцеклетки выделяют из са-мок-доноров, у которых была индуцирована гиперовуляция и проведено спаривание с самцами. Трансгенную конструкцию инъецируют в мужской пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки. Яйцеклетки имплантируют в суррогатную мать, которая производит на свет трансгенных мышат — основателей трансгенных линий.

Метод микроинъекции ДНК в ооциты в настоящее время наиболее популярен у исследователей, занятых получением трансгенных животных, несмотря на то, что он требует высокой квалификации и дорогостоящего оборудования. Это неудивительно — быстрота и надежность данного метода окупают все его недостатки. Первой и наиболее хорошо разработанной экспериментальной системой для получения трансгенных животных явилась мышь. [c.449]

III. Эффективность микроинъекционного метода. Эффектна иость процедуры получения трансгенных мышей путем микроинъекций сильно варьирует от эксперимента к эксперименту. В оптимальных условиях 60—80% яиц переживает инъекцию. Из них 10—30% имплантируется в организм реципиентной самки, продолжает нормально развиваться и дает начало потомству. 10—30% новорожденных мышей оказываются трансгенными. В какой-то степени успех эксперимента зависит от превходящих условий, например от сноровки экспериментатора. Однако определяющее значение здесь имеют качество инъецируемой ДНК (разд. 10.4.1) и выбор линии мышей (разд. 10.2.2.1) поэтому эти два параметра следует строго контролировать. [c.313]

Одно из преимуществ описываемой процедуры получения трансгенных мышей по сравнению с другими методами состоит в том, что любую клонированную ДНК (в лямбоидном, плазмидном или космидном векторе) можно ввести в зиготу, где она интегрируется в геном и оказывается включенной в формирование зародышевого пути. Дополнительные манипуляции, такие, как переклонирование в специальные векторы и получение вирусных препаратов, здесь не требуются. Следует, однако, подчеркнуть, что эффективность микроинъекции в большой степени зависит от качества и свойств вводимой ДНК [15J. Ниже мы рассмотрим этот вопрос подробнее. [c.341]

Мерфи Д., Хэнсон Дж. Получение трансгенных мышей путем микроинъекции клонированной ДНК в оплодотворенные яйцеклетки // Новое в клонировании ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера. М. Мир, 1989. С. 308-353. [c.458]

Генно-инженерные разработки в области зообиотехнологии (в частности,с соматотропином, или гормоцом роста) оказались важными для животноводства (возрастание привесов животных, лактации) Используя метод микроинъекций рДНК в зародышевые клетки млекопитающих (в пронуклеусы оплодотворенных ооцитов, или в яйцеклетки) удается получать так называемых транс-генных животных Клоны реципиентных клеток, содержащие донорный хромосомный материал, или трансгены, различаются по количеству его в широком диапазоне, и если функциональная активность и регуляция экспрессии клонированных генов изучаются на целом организме, то и говорят о трансгенном организме Схема получения, например, трансгенных мышей введением клонированной ДНК в оплодотворенное одноклеточное яйцо приведена на рис 72 [c.209]

Для получения трансгенных животных, в частности — мышей, можно воспользоваться такими методами, как микроинъекции ДНК в оплодотворенное одноклеточное яйцо, заражение предим-плантированных эмбрионов рекомбинантными ретровирусами, и, наконец, применение эмбриональных стволовых ES- или ЕК-кле-ток. [c.582]

С развитием техники молекулярного клонирования генов число публикаций по получению и исследованию трансгенных мышей стремительно росло, постепенно расширялся спектр проблем и задач, решаемых с помощью трансгеноза. Одной из самых впечатляющих работ на ранних этапах развития трансгеноза были эксперименты Пальмитера с соавт. (Palmiter et al., 1982) по микроинъекции в зиготы мышей гена гормона роста ГГР) крысы, находящегося под контролем промотора гена МТ-1 мыши. Перенос та- [c.186]

Кроме традиционного (классического) способа введения чужеродной ДНК с помощью микроинъекций в пронуклеус зиготы (о чем шла речь выше), в последние 10 лет получили развитие новые системы и способы переноса генов в геном животных (рис. 64). Их развитие связано в основном с целью возможного повышения эффективности трансгеноза, что особенно важно для дорогостоящих экспериментов в области биотехнологии с/х животных. Показано, например, что эффективность получения с помощью микроинъекций трансгенных коров, по меньшей мере, в 40 раз ниже, чем у мышей (Wall et al., 1997). [c.190]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология