Полиакриламидный гель высушивание

По окончании электрофореза рекомендуется как можно быстрее провести фиксацию разделенных веществ путем их осаждения или высушивания, так как диффузия молекул продолжается и после отключения электрического тока, что приводит к ухудшению картины разделения. Бумагу и пленки из ацетата целлюлозы обычно высушивают, в случае же крахмального и полиакриламидного геля применяют осаждение разделенных веществ. Следует заметить, что пластины агарового и агарозного гелей, а также тонкие слои полиакриламидного геля тоже можно высушивать, но это, как правило, занимает много времени и, следовательно, нецелесообразно. [c.186]

Высушивание полиакриламидных гелей [c.199]

Полиакриламидные микрогели помещают в пробирку с 2 мл воды и дегидратируют методом лиофилизации. Кроме того, их можно погрузить в 0,5—1%-ную агарозу и высушить в токе воздуха или в термостате при 37 ""С. После высушивания полиакриламидный гель легко отделяется от сухой агарозной пленки. Дегидратация происходит также при выдерживании гелей в вертикальном положении в течение нескольких минут в абсолютном спирте. Для этого используют мягкий пинцет, изготовленный из гибкой пружинной стали 1[915]. Для полной дегидратации требуется около 30 мин. [c.201]

ТОНКОЙ (3—5 мкм) пленке высушенного полиакриламидного геля при экспозиции длительностью 2 мес, можно определить радиоактивность даже в том случае, если она составляет всего 300 расп/мин. Вещества, меченные легко определяются и без высушивания геля [531]. [c.205]

Для электрофореза в полиакриламидном геле используются разнообразные выпускаемые промышленностью и самодельные приборы. Мы предпочитаем те приборы, которые позволяют проводить разделение в тонких пластинах геля, что обеспечивает оптимальное разрешение. Лучшее разрешение на пластинах обусловлено тем, что возникающее во время электрофореза тепло здесь легко рассеивается, а также тем, что гель после электрофореза можно быстро фиксировать. Последнее важно для того, чтобы свести к минимуму диффузию белка в полосах. Пластины позволяют одновременно сравнивать много проб, и их легко сохранять после высушивания на листах фильтровальной бумаги. Радиоактивность в пробах выявляют радиоавтографией и фотофлюорографией, а высушенные на фильтровальной бумаге гели можно легко нарезать ножницами или резаком и после повторного насыщения водой вырезанных сухих полосок просчитывать на сцинтилляционном счетчике. Если не требуется большая разгонка в геле, электрофорез, фиксацию, окраску и высушивание успевают проводить за один день. [c.156]

Хранение бумажных электрофореграмм и полосок ацетата целлюлозы после их соответствующего окрашивания, обесцвечивания и фиксации не представляет трудностей. Пластины агарового геля после высушивания превращаются в тонкие пленки и тоже хорошо хранятся. Сохранение же пластин крахмальных и полиакриламидных гелей более обременительно. Лучше всего их держать в закрытых сосудах под слоем жидкости, обычно разбавленной уксусной кислоты. Но такие контей- [c.194]

Силанизируют также стеклянные пластинки для электрофореза в полиакриламидном геле [274, 309]. Для этого их моют детергентом, водой, ацетоном и погружают в 0,2%-ный раствор полификса D (фирма Desaga) в смеси этанол — вода (1 1) или опрыскивают этим раствором. После такой обработки пластинки сушат под инфракрасной лампой на расстоянии —20 см (температура —60°С) соблюдение условий высушивания очень важно. Силанизированные пластинки можно хранить в течение нескольких недель. [c.244]

Был предложен интересный подход к элюции ПЦР-фрагмента ДНК из полиакриламидного геля, заключаюпщйся в предварительном высушивании геля, окрашенного бромистым этидием, и с наложенным на него кусочком фильтровальной бумаги, вырезанному по размеру полосы ДНК [Wu et al., 1996]. Далее, поскольку размер фильтровальной бумаги строго соответствовал размеру исследуемой полоски ДНК, то вырезался кусочек сухого полиакриламидного геля, исходя из контуров бумаги. После прогрева в течение 15 мин в микроцентрифужной пробирке этого кусочка геля вместе с бумагой, последняя удалялась центрифугированием. Есть работы, в которых элюция из полиакриламидного геля продукта ПЦР для его последующего секвенирования осуществлялась простой диффузией в солевой раствор в течение ночи [Huber, M Mahon, [c.144]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология