Выделение тепла при электрофорезе

В классическом зонном электрофорезе при наложении электрического поля из-за выделения тепла и конвекционных потоков наблюдается искажение зон. Для предотвращения их размывания трубку заполняют гелем или проводят электрофорез на полосках бумаги, пропитанных электролитом. Применение гелей не только уменьшает размывание зон, но способствует более эффективному разделению, которое улучшается за счет молекулярно-ситового эффекта (аналогично эффектам в гель-проникающей хроматографии). Разделение в этом случае основано на различиях в скорости миграции частиц пробы через гель при наложении электрического поля. [c.581]

Б. Обычно для фракционирования белков сыворотки используют рекомендованное выше напряжение 110 В, при котором разделение длится от 14 до 16 ч, и охлаждения не требуется. Для особых целей напряжение может быть увеличено, но, согласно закону Джоуля, при этом соответственно увеличится теплообразование. Выделение тепла можно уменьшить, если снизить ионную силу раствора. При достаточной влажности фильтровальной бумаги, на которой ведут электрофорез, и не очень высокой температуре окружающего воздуха можно повысить напряжение на полоске до 250—300 В, не принимая специальных мер для охлаждения. Однако при дальнейшем увеличении напряжения требуются специальные приспособления для охлаждения. [c.52]

Даже если все процедуры тщательно выполняются при стандартных условиях, образование геля может проходить по-разному в отдельных трубках из-за незначительных различий в их диаметрах, местных нарушений в процессе полимеризации, неравномерного выделения тепла и т. д. Поэтому сравнение двух белков путем электрофореза предпочтительно проводить в одном и том же геле при помощи так называемого метода расщепленного геля , впервые разработанного Кларком [236]. Прямоугольный шаблон плотно вставляют в трубку и осторожно вдавливают в разделяющий гель на глубину около I мм. В каждую половинку геля вносят пробу. Чтобы свести к минимуму перекрывание проб, шаблон не следует вынимать из геля до тех пор, пока видимая полоска, образующаяся при перемещении пробы в электрическом поле, не проникнет в гель примерно на I мм. [c.100]

Выделение тепла при электрофорезе [c.42]

Выделение тепла нри электрофорезе [c.42]

Сборка аппаратуры для электрофореза. При отсутствии аппаратуры для электрофореза на бумаге можно собрать простую установку лабораторными средствами. Для этого требуется два стакана на 100 мл, две стеклянные пластинки (6 х 20 см), два угольных электрода, четыре зажима (типа бельевых), лист бумаги, источник постоянного тока. Вид установки показан на рис. 147. Необходимо следить за тем, чтобы с поверхности бумаги не происходило испарения (из-за выделения джоулева тепла), которое может внести ошибки. Во избежание этих ошибок установку следует помещать в закрытый сосуд, насыщенный парами воды. [c.277]

Однако многие затруднения в методе движущейся границы сохраняясь вплоть до 1937 г., т. е до тех пор, пока Тйзелиуе [8] не дал описания нового сосуда для электрофореза. Эти затруднения заключались 1) в конвекции, являющейся результатом выделения тепла при прохождении электрического тока через сосуд [c.356]

Практически более доступным и удобным является метод зонного электрофореза на пористом носителе, заключающийся в том, что на пористый носитель (фильтровальная бумага или тонкий слой любого порошка, не проводящего электричества) наносят смесь разделяемых веществ в виде небольшого пятна., и меаду концами создается электрическое поле. При этом заряженные частицы (ионы) будут шгрировать к соответствующему электроду, и если подвижности этих частиц неодинаковы при данных условиях, то смесь будет разделяться на зоны, соответствующие каждому сорту частиц. Полнота разделения, то есть расстояние между зонами индивидуальных веществ, зависит от различия подвижностей, длительности процесса и величины приложенного напряжения. Кроме того, на четкость разделения в большой мере влияет размытие зон раэ(рляемых ионов. Это размытие обусловлено диффузией, вызываемой градиентом концентрации в зоне данного иона и в объеме раствора, движением электролита вследствие конвективных потоков, электроосмоса, испарения жидкости за счет выделения джоулева тепла, вибрахдаи, толчков и т.д., а также адсорбцией разделяемых веществ на пористом наполнителе. [c.152]

Чем выше приложенное напряжение, тем больше подвижность заряженных компонентов и тем меньше требуется времени для достижения удовлетворительного разделения. Максимально возможное напряжение ограничено выделением джоулева тепла. Неблагоприятные воздействия образовавшегося тепла, неизбежно воз1Никающие при всех видах электрофореза, можно существенно уменьшить путем правильного подбора соответствующей буферной системы и конструкции используемого аппарата, тщательным охлаждением и применением оптимальных величин напряжения или тока. [c.179]

Электроиммуноанализ проводится следующим образом. Готовят 0,8—1,5%-ный золь агарозы в соответствующем буфере. После охлаждения золя до 45—55 °С его смешивают с антисывороткой или с выделенными антителами и формируют слой геля толщиной 1 — 1,5 мм. С этой целью теплый золь агарозы выливают на стеклянную пластинку, установленную строго горизонтально, или заливают агарозу в форму, образованную двумя стеклянными пластинками и U-образной рамкой. Рамку оставляют между стеклами до завершения электрофореза, но ее можно удалить и залить освободившееся пространство агарозой. Как правило, требуется сравнительно небольшое количество антисыворотки, но оно, естественно, зависит от ее титра. Для количественного анализа наиболее удобны пики преципитации высотой 20—30 мм. Работать следует с самым большим разведением антисыворотки, при котором еще возможно образование видимого преципитата. Разведение антигена должно быть подобрано соответствующим образом. Если исследуют антигены с мол. массой более 200000, то в этом случае особенно важно разбавлять реагенты до такой степени, чтобы происходила лишь слабая преципитация, поскольку крупные комплексы таких антигенов с антителами могут забивать поры в геле, что [c.248]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология