Метод геномной дактилоскопии

Таким образом, используя один зонд, можно одновременно наблюдать за наследованием большого количества аллелей. Эволюционная нестабильность, вследствие которой эти последовательности гипервариабельны, не настолько велика, чтобы затруднить сегрегационный анализ, поэтому метод геномной дактилоскопии может быть применен при изучении генетического сцепления [16]. Индивидуальный характер гибридизационной картины позволяет использовать метод в судебной медицине и применять его в качестве инструмента, с помощью которого с высокой степенью достоверности могут быть уточнены структуры родословных. [c.192]

С обзором методов гель-электрофореза можно познакомиться в работе [19]. Однако полезно все же вкратце выделить специфические условия, повышающие эффективность анализа методом геномной дактилоскопии. [c.199]

Метод геномной дактилоскопии с использованием М13 [c.203]

Использование метода геномной дактилоскопии в анализе генетического сцепления [c.204]

Недостаток больших родословных для рецессивно наследуемых признаков, конечно, ограничивает применение метода геномной дактилоскопии, но не исключает полезность его использования для анализа рецессивных болезней. Если в родословной имеются близкородственные браки, возможно также картирование по гомозиготности [27]. Суть этого метода в следующем если оба родственных индивида несут редкий рецессивный ген то вероятнее всего они унаследовали его от единого предка [28]. Если индивиды находятся в достаточно далеком родстве, то общие для них последовательности будут составлять лишь малую долю генома. К тому же поскольку аллельные частоты фрагментов, образующих полосы в отпечатках (особенно боль-. ших фрагментов), очень малы, то маловероятно, что в геноме родственников эти фрагменты совпадут, если они произошли от разных предков. Если при близкородственном скрещивании больные дети имеют общую для их геномных отпечатков полосу в удвоенном количестве, а здоровые дети наследуют одинарную дозу или вовсе не имеют этой полосы, то тем самым подтверждается гипотеза о физическом сцеплении между участком, ответственным за признак, и данной полосой. Условившись об аллелизме, можно подсчитать шансы на сцепление, но, как уже отмечалось, для подтверждения или опровержения наличия сцепления фрагмент необходимо клонировать. [c.206]

Метод геномной дактилоскопии представляет собой удобный инструмент для быстрого анализа генома на предмет идентификации в нем соматических изменений. Этот подход нашел применение при сравнении лейкоцитарной и конституционной ДНК после пересадки костного мозга, а также три анализе ДНК опухолевой и нормальной тканей [34, 35]. [c.212]

Метод геномной дактилоскопии (ДНК-типиро-вание) часто используется в судебной медицине для идентификации биологических образцов. С его помощью можно доказать, что подозреваемый действительно совершил преступление, или, напротив, что он невиновен. Для проведе- [c.192]

В судебной медицине все более широкое применение находит метод геномной дактилоскопии, основанный на том, что ДНК каждого человека образует уникальный набор гибриди-зационных полос. При этом в качестве зондов обычно используют минисателлитные ДНК человека, которые не кодируют никаких белков и отличаются высокой вариабельностью. [c.202]

Более удобными для генетических исследований и широкомасштабного секвенирования часто оказываются контиги из небольших фрагментов ДНК, чем из крупных. Для построения контигов определенных районов хромосом или целых хромосом нередко используют космидные библиотеки. Обычно перекрывающиеся космидные клоны идентифицируют методом геномной дактилоскопии. Для этого из каждого клона экстрагируют ДНК и обрабатывают ее рестриктазой. Полученные фрагменты метят, разделяют при помоши электрофореза и визуализируют радиоавтографическими методами. Каждый клон порождает специфический набор фрагментов - уникальный отпечаток его ДНК у перекрывающихся клонов один или несколько фрагментов совпадают. [c.463]

ДНК, получаемая обычным способом [20], обладает достаточно хорошим качеством для проведения анализа методом геномной дактилоскопии. Наилучшие результаты получают, если на дорол<ку приходится 1—5 мкг ДНК. Поскольку имеет значение не только присутствие, но и интенсивность отдельной полосы, важно достичь равномерного распределения материала между всеми дорожками геля. Хорошо известно, что измерения оптической плотности растворов ДНК дают ненадежные значения концентраций, которые могут рассматриваться только как грубые оценки. Для проверки полноты рестрикции и правильности нанесения необходимо поставить контрольный форез с аликвотами гидролизата ДНК и на основе этого подобрать оптимальное количество наносимой пробы. [c.200]

Рис. 5. Применение метода геномной дактилоскопии для сравнения ДНК из нормальной и неопластической тканей. На автографе представлены образцы ДНК, выделенной из периферической крови (В), нормальной слизистой (М) и опухолевой ткани (Т), полученных от трех больных с злокачественными опухолями желудочно-кишечного тракта. ДНК (Ю мкг) была гидролизована Hinll и разделена электрофорезом в 1,0 /о-ном агарозном геле при 2 В/см в течение 48 ч, после чего перенесена на найлоновую мембрану и гибридизо-вана с пробой на основе минисателлита 33.15. У первого пациента в отпечатке опухолевой ДНК наблюдается отклонение от нормы в виде двух новых полос (а, Ь). У второго пациента полоса (с) присутствует в ДНК лейкоцитов периферической крови и в ДНК нормальной слизистой толстой кишки, но отсутствует в ДНК, выделенной из клеток опухоли толстой кишки. У третьего пациента новая полоса (d) появилась в отпечатке ДНК, выделенной из клеток опухоли желудка. Как и ожидалось, отпечатки ДНК нормальных лейкоцитов и ДНК клеток нормальной слизистой не отличаются, В трех случаях появление новой полосы сопровождалось падением интенсивности высокомолекулярной полосы, следовательно, механизм появления новой полосы в субпопуляции опухолевых клеток может заключаться в неравном кроссинговере, приводящем к потере родительским аллелем нескольких копий повтора и, следовательно,

Справочник химика 21

Химия и химическая технология