Поляризационный флуоресцентный измерение

Пример 15-Р. Определение ориентации молекул хлорофилла в хлоропластах с помощью поляризации собственной флуоресценции. Поляризацию красной флуоресценции хлорофилла в отдельном хлоропласте можно измерить с помощью флуоресцентного поляризационного микроскопа (см. гл. 2). Путем измерений, выполненных с искусственно иммобилизованным хлорофиллом, были определены углы между плоскостью поляризации флуоресценции и осями хлорофилла. Следовательно, зная из эксперимента плоскость поля ризации флуоресценции хлоропластов, можно определить ориентацию молекул хлорофилла в хлоропластах. [c.443]

Для измерения слабых интенсивностей флуоресценции были использованы фотоэмиссионные ячейки типа фотоумножителя, в особенности чувствительные к голубой области спектра (тип 931 А) или к красной области (тип 7102). При этом требуются довольно дорогие высоковольтные стабилизаторы напряжения и измерительные приборы, имеющие большой импеданс. Следует отметить, что фотоумножитель 931 А имеет различную чувствительность в зависимости от направления плоскости поляризации падающего пучка. Следовательно, при поляризационных измерениях рядом с баллоном фотоумножителя нужно ставить рассеиватель из матового стекла или сам баллон должен быть обработан карборундом до появления матовой поверхности. Детектор не должен реагировать на возбуждающий свет, отраженный или рассеянный от образца или от других предметов. Поэтому перед детектором помещают фильтр, пропускающий флуоресцентное излучение, но не пропускающий возбуждающее излучение. В промышленности выпускается много недорогих цветных фильтров ограниченной полосы, однако большинство из них сами флуоресцируют при возбуждении светом в области ближнего ультрафиолета. В том случае, когда введение поправки на фон является нежелательным, в качестве фильтра можно использовать раствор каких-либо нефлуоресцирующих веществ (например, бихромата калия) или некоторых окрашенных нефлуоресцирующих пленок. [c.175]

Измерения поляризации требуют применения поляризационных материалов, таких, как призма Николя или поляроидный дихроичный фильтр. Последний особенно удобен, но эффективен только для видимого света. Поэтому дихроичный фильтр может быть использован для флуоресцентного излучения, но не для возбуждающего света с длиной волны в ультрафилетовой области . [c.175]

Р И С. 103. Прибор для изучения люминесценции полимерных систем. Свет от ртутной лампы среднего давления АН4 (А) фокусируется с помощью конденсора на небольшом отверстии Д и с помощью коллиматора направляется в виде параллельного пучка. Пучок может прерываться периодически сектором Ви приводимым в движение синхронным мотором Бх или затвором Е. Параллельный пучок монохроматизируется фильтром Жь падает на зеркало Зх, отражающее большую часть пучка, и затем отражается зеркалом Зг- Часть падающего пучка проходит через З1 и отражается З3 по направлению к кремниевому фотоэлементу Их или при необходимости по направлению к стандартному образцу флуоресцирующего вещества К, снабженного подходящим фильтром Жг- Пучок отражается от З2 и, проходя через поляризатор Л1, падает на образец О под углом 45°. Ось поляризации должна быть параллельна поверхности образца. Флуоресцентное свечение образца фокусируется на детекторе — кремниевом фотоэлементе — Яг с помощью линзы Гз и подходящего фильтра Жз. поглощающего любое возбуждающее излучение. Излучаемый образцом пучок света может периодически прерываться сектором В , приводимым в движение мотором Б . Для измерения фосфоресценции соотношение фаз секторов В1 и В2 должно быть таким, чтобы проходило только фосфоресцирующее излучение. При поляризационных измерениях В2 заменяют циркулярной пластинкой поля-роидиого дихроичного фильтра Л2. [c.176]

Этот метод был развит Джилмором, Гибсоном и Мак-Клюром [106], приложившими максимум усилий для разрешения дополнительных трудностей низкотемпературных измерений были сделаны поправки на поляризационные эффекты, показатель преломления [107] и т. д. Неопределенности в большинстве этих измерений автоматически исчезают, если поместить рассеивающую поверхность сравнения и флуоресцентную поверхность в интегрирующую сферу [108], но при этих измерениях трудно обеспечить регулирование температуры в широких пределах. [c.636]

Флуоресцентный поляризационный анализ может быть использован для количественного определения коэффициентов враща-тельной диффузии. Применение для этой цели стандартного метода измерения поляризации флуоресценции имеет два неудобства 1) с его помощью измеряется усредненная величина, что нежелательно, когда молекула имеет два вращательных коэффициента (например, палочкообразная молекула может вращаться вокруг своей длинной оси или переворачиваться так, что вверху оказывается то один конец, то другой), и 2) он требует измерения собственной поляризации, что выполняется путем изучения поляризации в растворах с возрастающей вязкостью и экстраполяции к бесконечной вязкости. Такая экстраполяция часто не имеет успеха, потому что вещества, добавляемые для увеличения вязкости, иногда оказывают влияние на конформа- [c.444]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология