Методы инактивации бактериофага для

Сравнение результатов методов вычисления размеров мишеней из данных экспериментов по инактивации бактериофага под действием излучений [c.75]

Пример П-В. Механизм инактивации бактериофагов при рентгеновском облучении. Если бактериофаги облучать рентгеновскими лучами, они теряют жизнеспособность. Возможным объяснением этого может служить расщепление ДНК фагов при облучении. Для изучения этого процесса фаги подвергали облучению, после чего отбирали пробы, получившие различные дозы, для определения жизнеспособности и анализа ДНК методом ультрацентрифугирования, На рис. 11-18, А изображены седиментационные диаграммы двух ДНК фагов, получивших две различные дозы облучения. При увеличении дозы большая часть ДНК седи- [c.302]

Для проведения экспериментов по инактивации вирусов облучением необходимо получить количественную оценку активности вируса. Поскольку вирусы нельзя разводить на искусственной среде, определение их активности связано с заражением соответствующих восприимчивых организмов, и потому методы определения различны для растительных вирусов животных вирусов и бактериофагов. В случае бактериофагов количественная оценка наиболее точна. Для оценки используется следующий метод. На пластинку твердой питательной среды, подходящей для роста данных бактерий, наносится капля суспензии, содержащая несколько миллионов этих организмов, и определенного размера капля суспензии фага. С помощью стеклянного шпателя жидкость равномерно распределяется по поверхности питательной среды. После инкубации густо засеянной бактериями пластинки на ее поверхности образуется сплошная бактериальная пленка со светлыми участками в местах размножения отдельных частиц фага, которые вызывают лизис бактерий в непосредственной от них близости. Эти светлые участки, или стерильные пятна , хорошо различимые невооруженным глазом, показаны на рис. 14, б. Количество стерильных пятен пропорционально концентрации фага (если она не избыточна, что приводит к слиянию отдельных стерильных пятен) и немногим меньше числа частиц фага, нанесенных на пластинку (Эллис и Дельбрюк, 1938, полагают, что отношение равно 1 2). [c.87]

Для того чтобы различить одноцепочечные и двухцепочечные полинуклеотиды in vivo, был использован метод, основанный на более высокой чувствительности к ультрафиолетовому облучению пиримидинов по сравнению с пуриновыми основаниями. Экспериментально было найдено, что спектры ультрафиолетового излучения, вызывающего инактивацию бактериофагов Х-174 (содержит одиотяжную ДНК) и Т2 (содержит двухсииральную ДНК), значительно различаются. В первом случае спектр весьма сходен со спектром ультрафиолетового поглощения смеси дезоксицитидина и тимидина с минимумом при 240 в случае бактериофага Т2 спектр излучения имеет минимум при 230 м[1, как и в спектре поглощения ДНК [302]. Возможное теоретическое объяснение этого явления заключается в том, что в случае двухспиральной структуры перенос поглощенного кванта от пуринов к пиримидинам приводит к примерно равной эффективности всех квантов, независимо от того, поглощены ли они пурином или пиримидином. Благодаря этому спектры излучения, действующего на молекулу, напоминают ультрафиолетовые спектры поглощения [c.601]

Впервые Герши, Камеи, Кеннеди и Гест в 1951 г. применили к бактериофагу метод радиоактивного самоубийства , т. е. измерили кинетику инактивации частиц вируса по мере распада атомов Р в его ДНК. Затем Стэнт развил этот метод и применил его к бактериальным клеткам. Оказалось, что в бактериофаге [c.338]

Иллюстрацией описанных вычислительных методов служит табл. 27, в которой приведены данные экспериментов (Ли и Саламан, не опубликовано) по инактивации дизентерийного бактериофага 8 J3 и результаты вычислений, выполненных по теории мишеней. [c.74]

Инфекционность облученных нуклеиновых кислот была изучена в экспериментах с ДНК и РНК, изолированных из бактериофагов. Термином инфекционность обозначают способность вирусной ДНК или РНК индуцировать образование бактериальной клеткой новых полноценных фагов. Методически эксперимент выглядит так бактерии обрабатывают лизоцимом, и они теряют часть клеточной стенки — образуются сферонласты, которые можно инфицировать нуклеиновой кислотой, выделенной из бактериофага. Если в инфицированной бактерии возникают новые полноценные фаги, то бактериальная стенка разрывается и из лизировавшей бактерии высвобождается 100—200 бактериофагов количество вирусных частиц, высвободившихся из лизированных сферопластов, в определенных пределах пропорционально количеству молекул ДНК или РНК, сохранивших инфекционные свойства. Так как высвободившиеся фаги лизируют новые сферопласты вблизи места своего -возникновения, то на сплошном газоне бактериальных клеток, выращенных на агаре, образуется пятно лизиса — бляшка (количество бляшек можно подсчитать визуально), — их число служит количественным критерием инфекционности вирусной нуклеиновой кислоты. Этим методом определяют инактивацию вирусной ДНК в результате облучения. Результаты одного из таких экспериментов приведены на рис. 1П-3. [c.63]

Например, гаптенизация бактериофагов через диазосвязь резко снижает их инфекционность даже при низкой нагрузке, при которой другие способы гаптенизации не приводят к инактивации фаговых частиц (Вескег et al., 1970). Скорее всего эта инактивация зависит от побочных реакций, а не от самого присутствия гаптена. При других, более щадящих методах тоже не всегда удается избежать побочных эффектов. [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология