Очистка антител преципитацией

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

Достаточным критерием иммунологической чистоты белка можно считать образование только одной полосы преципитации при двойной радиальной иммунодиффузии (см. ниже), когда с испытуемым очищенным белком взаимодействует поливалентная антисыворотка, полученная в ответ на введение животному неочищенного белка. Здесь уместно напомнить, что даже идеальная очистка белка-антигена не гарантирует строгой однозначности иммунного ответа. У разных особей данного вида животного введение одного и того же, совершенно чистого антигена может вызвать различные иммунные ответы. В одном случае это может быть гиперпродукция практически гомогенной специфической популяции антител, в другом — ответ может оказаться поливалентным, так что в антисыворотке появится целый набор антител, способных связывать исходный антиген (но не только его). Этот набор иногда можно разделить электрофорезом или ИЭФ. О причинах поливалентного иммунного ответа было подробно сказано выше. Ввиду такой возможности иммунизацию, как уже упоминалось, следует проводить параллельно на нескольких животных, с тем чтобы иметь возможность выбора наиболее чистой моноспецифической антисыворотки. После этих необходимых замечаний можно рассмотреть заключительный этап очистки антител — использование иммуносорбентов. [c.109]

В начале текущего столетия систематики первыми использовали информацию, получаемую при исследовании растений серологическими методами [77, 116]. Интенсивное применение этих методов до 50-х годов могло показаться довольно бесперспективным, так как иногда получали необъяснимые результаты из-за методического несовершенства, поскольку могли тогда учитывать (с помощью реакций преципитаций, оцениваемых турби-диметрией мутных сред) только крупномасштабные, глобальные явления, отражаемые реакциями между системами — комплексами антигенов и антител. В то время иммуноадсорбция явилась ценным подспорьем в этих исследованиях [82]. Применение антител для изучения растений вновь вызвало интерес после разработки методов осаждения в геле благодаря прогрессу в очистке белков и открывающейся возможности производить и контролировать полиспецифические и моноспецифические сы- [c.111]

Для получения поликлональных антисывороток, используемых в повседневных иммунологических методах исследования, особенно в реакциях преципитации, применяют более крупных животных, в частности лабораторных кроликов. Кроликов можно содержать в клетках, они хорошо размножаются в неволе, выносливы и долго живут. Уход, иммунизация и взятие Крови у этих животных не представляют труда. Полученные от кроликов антисыворотки обладают хорошими преципитиру-ющими свойствами и стабильны при хранении, иммуноглобулиновая фракция легко поддается очистке. Кроме того, такие антисыворотки, обладая высокой авидностью/аффинностью пригодны для использования в чувствительных иммунологических тестах. В течение нескольких месяцев в период максимального ответа можно получить не менее 100 мл антисыворотки и еще 150 мл при аутопсии. Аутбредные кролики отвечают на иммуноген по-разному, поэтому следует использовать для иммунизации несколько животных, протитровать их сыворотки по отдельности, затем смешать отобранные пробы, если требуется максимальное разнообразие антител. Кролики достаточно хорошо отвечают на широкий спектр ммуногенов в сочетании с адъювантом Фрейнда образованием IgG. [c.41]

II. Множественные системы антиген антитело и определение чистоты антигена. Рис. 6.4 иллюстрирует результаты взаимодействия полиспецифической антисыворотки (центральная лунка) с раствором смеси антигенов и с антигеном возрастающей степени очистки. Непрерывные линии преципитации между лункой с антителами и внешними лунками свидетельствуют [c.204]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология