Аффинность гетерогенность популяций антител

Гетерогенность популяции антител по аффинности трудно оценить экспериментальными методами [c.157]

Гетерогенность популяции антител по аффинности невозможно точно описать математической формулой, поскольку нельзя с уверенностью предполагать характер их распределения по этой величине в каждой отдельной антисыворотке — соответствует ли он нормальному, асимметрич- [c.157]

Синтезируемые в живом организме антитела гетерогенны по физико-химическим свойствам. Общая популяция антител иммунной сыворотки включает в себя антитела с различными значениями изменения свободной энергии взаимодействия с гаптеном, т. е. антитела различной аффинности Схему взаимодействия- антигена с общей популяцией антител, представляющей совокупность субпопуляций, мо>1 ет быть представлена в следующем виде [c.38]

Из рассмотрения изотермы связывания меченого антигена с антителами следует, что условия В <[Ат]о/2 и Ат]о<1//С могут выполняться одновременно только при [Аг ]о< МК. Если популяция антител гетерогенна по аффинности к антигену, то концентрацию меченого антигена следует выбирать такой, чтобы условие В <[Ат]о/2 выполнялось для высокоаффинной фракции антител, определяющей чувствительность анализа. [c.230]

Распределение Сипса является симметричным и унимодальным и может быть полностью охарактеризовано средней константой аффинности Ко и индексом гетерогенности а . Произвольное предположение о симметричном распределении антител по аффинности имеет свои ограничения. Истинная форма распределения остается неизвестной. Часто все же на практике используют распределение Сипса для описания гетерогенной популяции антител. В действительности распределение антител по К бывает несимметричным и мультимодальным, поэтому, строго говоря, распределение антител по аффинности нельзя аппроксимировать распределением Сипса. [c.40]

Определению аффинности антител, специфичных к одной и той же детерминанте, сильно препятствует их гетерогенность (см., например, Fazekas de St, Groth, 1979). Изучая гетерогенную популяцию антител, можно определить лишь их среднюю аффинность. Эта величина для разных аитисывороток против одного и того же антигена обычно варьирует, Однако все эти трудности резко уменьшаются, если есть возможность получить к данному специфическому антигену моиоклоиальиые антитела. Определение точных характеристик связывания представляет особый интерес тогда, когда антитело специфично по отношению к какому-то клеточному (точнее, поверхностному) антигену, поскольку в этом случае реакция может иметь важное функциональное значение. Кроме того, эги данные могут быть полезны для понимания химических реакций, происходящих на поверхности клеток. [c.12]

В реакциях взаимодействия фермента с субстратом константа равновесия (К) неизменна при различных концентрациях субстрата. При связывании же антител с гомологичным антигеном дело обстоит иначе — популяция поликлональных антител гетерогенна по этой константе, т. е. по величине аффинности. Ранее предполагалось, что в любой антисыворотке количественное распределение антител по аффинности имеет характер нормального (Гауссова) распределения. Как геперь установлено, это предположение было ошибочным. Графический анализ данных по аффинности для реакции между антисывороткой и антигеном показывает, что распределение антител по аффинности не соответствует нормальному (рис. 9.16). Однако среднюю аффинность популяции антител в данной антисыворотке (Кд) можно определить с хорошим приближением как величину, обратную такой концентрации свободного антигена, которая необходима для насыщения половины всех антигенсвязывающих центров антител = 1/[Аг , д5 ]. [c.157]

Нужная концентрация антител определяется тремя независимыми критериями. Во-первых, она должна быть по крайней мере в 10 рдз ниже концентрации эпитопов, чтобы обеспечить условия, далекие от насыщения эпитопов даже при более чем 90%-ном связывании антител. Во-вторых, самая низкая концентрация свободных антител должна еще находиться в пределах чувствительности метода. В-третьих, метод определения антител должен з итывать только их количество, а не суммарный эффекг количества и качества. Соответствие третьему критерию абсолютно необходимо для достоверности результатов, поскольку при гетерогенности антител фильтрат всегда будет иметь более низкую среднюю аффинность, чем исходная их популяция. Наиболее чувствительные методы, такие, как нейтрализация бактериофагов через конъюгированные с ними антигены или обычные ра-диоиммунологические методы, не удовлетворяют этому требованию и дают систематические ошибки, завышая аффинности и занижая концентрации реагентов. Третий критерий, разумеется, не относится к равновесию моноклональных антител, для измерения которых лучшим из одинаково точных методов будет тот, который наиболее чувствителен. [c.36]

Теперь обратимся к условиям проведения иммунометрического анализа. Использование избытка реагентов позволяет работать в условиях протекания реакции первого порядка. Благодаря этому между измеряемым сигналом и концентрацией тестируемого компонента существует линейная зависимость при условии химической однородности используемых реагентов. Что же касается поликлональных антител, то присущая им химическая гетерогенность, связанная с присутствием в популяции молекул с различной аффинностью, ограничивает возможности их использования для линейного иммунометрического анализа. Препараты моноклональных антител, напротив, с химической Точки зрения представляют собой идеальный тип реагента, поскольку могут быть использованы в большом избытке и содержат молекулы с абсолютно одинаковой реакционной способностью. [c.389]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология