Реакция преципитации

Рис. 4.4. Реакция преципитации антиген-антитело Аг — раствор антигена Ат — антитела иммунной сыворотки или одного из препаратов IgG, содержащего антитела Б — буферный раствор.

РЕАКЦИЯ КОЛЬЦЕПРЕЦИПИТАЦИИ (РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ НА ГРАНИЦЕ СЛОЕВ, СОДЕРЖАЩИХ АНТИГЕН И АНТИТЕЛА) [c.123]

Особенно чувствительными в процессе диффузии в агаровом геле получаются реакции преципитации при взаимодействии бел- [c.241]

Зти факты можно объяснить, если допустить, что в молекуле антитела имеются два или несколько участков для связывания антигена. На поверхности молекулы азобелка имеется несколько гаптеновых групп, благодаря чему молекулы антитела связывают молекулы азобелка в сетчатый агрегат, который и составляет основу иммунного преципитата (рис. 15.17). Связанная только с гаптеном молекула антитела остается в растворе, и реакции преципитации не происходит, даже если гаптены соприкасаются с участками связывания на антителе. Од- [c.447]

Иммуноэлектрофорез представляет собой сочетание электрофореза с реакцией преципитации. Сначала проводят электрофорез белков в тонком слое геля. После электрофореза [c.148]

С-реактивный белок получил свое название в результате способности вступать в реакцию преципитации с С-полисахаридом пневмококков. В сыворотке крови здорового организма С-реактивный белок отсутствует, но обнаруживается при многих патологических состояниях, сопровождающихся воспалением и некрозом тканей. [c.578]

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О РЕАКЦИЯХ ПРЕЦИПИТАЦИИ [c.16]

В некоторых реакциях преципитации количественный анализ образовавшегося преципитата дает абсолютные величины содержания антигена или антител (метод количественной преципитации). Другие реакции позволяют получать лишь относительные величины (определение титра). [c.17]

Главной чертой иммунохимических реакций является высокая специфичность, однако необходимо подчеркнуть, что структурное сходство некоторых белков, а также гетерогенность антител, иногда свойственная сывороткам, при определенных условиях становятся причиной так называемых перекрестных реакций. Это означает, что реакция преципитации может в определенной степени зависеть от неспецифических факторов. Однако последнее обстоятельство лишь незначительно ограничивает использование иммунохимических реакций в изучении белков. [c.16]

В основе иммунохимического метода контроля гомогенности исследуемого белка лежит реакция преципитации его с соответствующей антисывороткой, полученной от иммунизированных этим белком животных. Для строгого доказательства гомогенности белка требуется одновременное использование нескольких методов. [c.33]

Эта реакция преципитации в жидкой фазе используется для определения количества какого-либо белка в белковой смеси (при условии, что используемая антисыворотка моноспецифична) по калибровочной кривой, построенной для очищенного антигена или стандартного образца, вернее, по восходящей части этой кривой, т. е. [фи избытке антител. В случае неизвестного образца [c.100]

Если раствор антигена (например, раствор белка) в адекватных пропорциях смешать с сывороткой, содержащей специфические антитела иммунной сывороткой), то в результате реакции образуется преципитат, образованный молекулами антигена и антител. Наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще происходит реакция преципитации с антигеном, присутствующим в постоянной концентрации, называют титром данной сыворотки. Титр отражает ее активность например, сыворотка с титром 1 25 ООО считается в пять раз активнее сыворотки, имеющей титр 1 5000. [c.16]

Реакция преципитации происходит в два этапа, во время которых реагирующие молекулы антигена и антител связываются друг с другом без каких-либо заметных изменений своей исходной химической структуры. Связывание антигена с антителами специфично, причем эта реакция частично или полностью обратима. [c.16]

На первом этапе реакции преципитации происходит связывание молекул антигена с антителами, но видимых преципитатов не образуется. На втором этапе реакции происходит агрегация возникших ранее комплексов антиген — антитело с образованием больших нерастворимых частиц, видимых невооруженным глазом. Первый этап реакции протекает быстрее, более обратим и специфичен, чем второй. [c.16]

В ряде вопросов, например при выяснении родства между белками, при сравнении фракций патологических и нормальных белков и т. д., перекрестные реакции оказывают существенную пользу. Реакции преципитации весьма чувствительны. Например, с помощью антисыворотки соответствующего титра можно обнаружить овальбумин в концентрации 1 мкг/мл. В зависимости от используемого метода определения азота в количественной реакции преципитации удается обнаружить от 75 до 125 мкг антигенного азота. [c.16]

Для реакции преципитации необходимо оптимальное соотношение концентраций антигена и антител. В избытке антигена преципитат частично или полностью растворяется в результате бывает невозможно оценить реакцию или же эта оценка может быть ошибочной. В то время как преципитаты, образованные кроличьими антителами, растворяются только при избытке антигена, преципитаты, образованные антителами лошади, часто могут растворяться в избытке как антигена, так и антител. [c.17]

Б. АНАЛИЗ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ [c.119]

Для реакции преципитации оптимальными являются те значения температуры, pH и ионной силы среды, которые существуют в организме. Ход реакции преципитации зависит от ионной силы раствора с увеличением концентрации соли выше 0,15 М постепенно замедляется образование преципитата. В то же время pH среды в довольно широком диапазоне, от 6,5 до 8,6, не влияет на реакцию преципитации. [c.17]

Иммунохимические методы, основанные на реакции преципитации, очень удобны для качественного и количественного анализа белков, для определения гомогенности белковых препаратов и наличия в них примесей, а также для идентификации компонентов белковых смесей. Как вспомогательный метод реакция преципитации применяется для изучения структуры белка. Преимущество этого метода по сравнению с другими состоит в том, что он может быть использован тогда, когда нельзя провести количественный химический анализ, например при определении данного компонента в смеси белков. Именно в этих случаях результаты, полученные с помощью иммунохимических реакций, могут быть очень полезны. [c.17]

Примечание. При использовании биуретового реактива в количественной реакции преципитации (см. стр. 125) удобно ставить реакцию в центрифужных пробирках на 8 мл, имеющих отметку [c.69]

Иммунная сыворотка, используемая в реакциях преципитации, должна иметь титр антител не менее 1 10 ООО. [c.119]

КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ [c.119]

В принципе для образования видимого преципитата достаточно, чтобы в реакции участвовало 0,1—0,5 мг азота антител. При меньшем количестве антител преципитат можно еще выявить, отцентрифугировав реакционную смесь. Однако если количество азота антител меньше 0,01 мг, то реакция преципитации не происходит. [c.120]

Если в распоряжении исследователя имеется ограниченное количество иммунной сыворотки, то реакцию преципитации можно поставить следующим образом. В центрифужную пробирку вносят [c.121]

Для успешного проведения ряда иммунохимических исследований необходимо, чтобы реакция преципитации осуществлялась в так называемой зоне эквивалентности, т. е. при оптимальных количественных соотношениях антигенов и антител, вступающих в реакцию. С помощью метода разведений, описанного выше, эту зону можно определить следующим образом. Готовят ряд двукратных разведений иммунной сыворотки в объеме 0,2—0,5 мл и в каждую пробирку вносят равный объем раствора антигена в том разведении, при котором еще происходит реакция преципитации. Пробирки инкубируют при 37°С в течение 60 мин, оставляют на ночь в холодильнике и учитывают реакцию на следующий день. [c.122]

При этом определяют наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще образуется преципитат со взятым по титру антигеном. Считается, что в этих условиях реакция преципитации протекает в зоне эквивалентности. [c.123]

Для реакции преципитации необходимо иметь специфические антисыАоротки достаточно высокого титра. В лабораторных условиях кролик — наиболее удобный продуцент таких антисывороток. Существует два типа схем иммунизации животных-продуцентов 1) иммунизация без введения адъювантов (вещества, стимулирующие образование антител) и 2) иммунизация с адъювантами. [c.116]

Принцип метода. Определяют те количества антигена и иммунной сыворотки, которые без остатка вступают в реакцию преципитации после их перемешивания, так что надосадочная жидкость после отделения осадка не содержит ни антигена, ни антител. [c.123]

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137). [c.123]

Принцип метода. Если наслоить раствор антигена на специфическую антисыворотку, то на границе раздела двух слоев происходит реакция преципитации. [c.123]

Принцип метода. Если реакция преципитации происходит в зоне эквивалентности, то, определив азот преципитата, можно вычислить соотношение реагирующих компонентов. Вычитая из количества азота преципитата известное количество азота антигена, можно вычислить количество азота антител в исследуемой иммунной сыворотке. [c.125]

Центрифугирование и отмывание преципитата. После того как реакция преципитации закончится, образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 2000 об/мин в течение 60 мин. [c.125]

Определение зоны эквивалентности. Чтобы определить, в какой из пяти пробирок реакция преципитации действительно проходила в зоне эквивалентности, в надосадочной жидкости каждой пробы (1) определяют избыток антигена или антител, добавляя соответственно иммунную сыворотку или раствор антигена (см. стр. 120). [c.126]

Результаты количественной реакции преципитации можно выразить графически, построив кривую зависимости количества азота преципитата от количества добавляемого антигена. Полученную кривую можно разделить на три части. Первая часть кривой — зона избытка антител. В соответствующих пробирках комплексы антиген — антитело образуют преципитат, который осаждается центрифугированием, а в надосадочной жидкости можно обнаружить свободные молекулы антител. Вторая часть кривой (ее вершина) — зона эквивалентности. Надосадочная жидкость в соответствующих пробирках не содержит ни свободного антигена, ни свободных антител. Третья часть кривой — зона избытка антигена надосадочная жидкость в соответствующих пробирках содержит несвязанные молекулы антигена. С увеличением количества добавляемого антигена количество азота преципитата начинает уменьшаться. Дальнейшее увеличение концентрации антигена может привести к еще большему растворению преципитата вплоть до полного перехода его в раствор. [c.126]

Полосы преципитации, как правило, располагаются в том участке геля, в котором создается оптимальное соотношение концентраций антигена и антител. При относительно большем разведении антисыворотки реакция преципитации происходит вблизи границы агара, содержащего иммунную сыворотку. Если же используются относительно разбавленные растворы антигена, реакция преципитации наблюдается ближе к границе агарового слоя, содержащего антиген. В соответствии с этим располагаются полосы преципитации. [c.130]

Внесение исследуемых образцов, учет реакции преципитации. Исследуемый материал (растворы антигенов, иммунные сы- [c.132]

Так как способность к перекрестной реакции зависит от структурного сходства полисахаридов, то иммунологическая реакция успешно применяется при структурных исследованиях. Так, Волфром (1947, 1952) выделил из легких крупного рогатого скота после удаления гепарина галактан и показал, что последний состоит в основном из D-галактозы. Гейдельбергер нашел (1955), что галактан, выделенный из легких, как и предполагалось, образует осадок с полисахаридом пневмококков типа XIV. Однако галактан давал также положительную реакцию преципитации и с полисахаридом пневмококков типа II, состоящим из L-рамнозы, /)-глюкозы и D-глюкуроновой кислоты. В дальнейшем при помощи бумажной хроматографии было показано, что галактан, выделенный Волфромом из легких крупного рогатого скота, неоднороден и загрязнен примесями, содержащими D-глюкуро-новую кислоту. [c.579]

Когда реакцию преципитации проводят с использованием белковой смеси и полиспецифической антисыворотки, то получаемая кривая преципитации представляет собой результирующую [c.101]

В начале текущего столетия систематики первыми использовали информацию, получаемую при исследовании растений серологическими методами [77, 116]. Интенсивное применение этих методов до 50-х годов могло показаться довольно бесперспективным, так как иногда получали необъяснимые результаты из-за методического несовершенства, поскольку могли тогда учитывать (с помощью реакций преципитаций, оцениваемых турби-диметрией мутных сред) только крупномасштабные, глобальные явления, отражаемые реакциями между системами — комплексами антигенов и антител. В то время иммуноадсорбция явилась ценным подспорьем в этих исследованиях [82]. Применение антител для изучения растений вновь вызвало интерес после разработки методов осаждения в геле благодаря прогрессу в очистке белков и открывающейся возможности производить и контролировать полиспецифические и моноспецифические сы- [c.111]

Еще большее число белковых фракций (свыше 30) можно получить методом иммуноэлектрофореза (рис. 17.1). Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [c.569]

Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии. [c.17]

Наиболее простой способ исследования растворимых антигенов в реакции преципитации заключается в том, что исследуемый раствор смешивают со специфической иммунной сывороткой, а затем наблюдают образование преципитата. Эта реакция применяется главным образом для определения титров. Только в том случае, когда реакция ставится с иммунной сывороткой, специфичной к данному белку, величина титра может служить характеристикой белкового препарата. Действительно широкое применение имму-нохимического подхода к анализу белков началось только после того, как появились иммунодиффузионные методы исследования. [c.18]

В 1905 г. Бекхольд, наслоив козью сыворотку на смешанную с желатиной кроличью антисыворотку к белкам козы, наблюдал в геле образование двух полос преципитации. Иммунологическая природа этого коллоидно-химического явления была раскрыта лишь спустя несколько десятилетий. На основе реакции преципитации в геле был разработан ряд новых методов исследования, которые не только позволили охарактеризовать иммунологические свойства белков, но и открыли новые перспективы их углубленного анализа. [c.18]

Фракции белка, разделившиеся в крахмальном геле, можно идентифицировать в реакции преципитации со специфической антисывороткой. Для этого Шёрлен и Голь [25] предложили комбинировать электрофорез в крахмальном геле с иммунодиффузией в агаровом геле. [c.82]

Центрифугируя реакционную смесь при положительной реакции преципитации, можно удалить образовавшийся преципитат и определить, какой из лвух компонентов системы, антиген или антитело, остался в надосадочной жидкости. Тем самым удается выяснить, в избытке какого компонента проходила реакция. Для этого половину надосадочной жидкости смешивают с равным объемом иммунной сыворотки, а к другой половине добавляют возрастающие количества раствора антигена (см. предыдущий раздел). Образование преципитата в первом случае свидетельствует об избытке антигена, во втором — об избытке антител. Подобным образом можно определить оптимальное соотношение антиген — антитело для положительной реакции преципитации. [c.121]

Принцип метода. При внесении в специфическую иммунную сыворотку растворимого белкового антигена происходит реакция преципитации. Количество преципитирующих антител в неразведен-ной или в разведенной в 10 раз антисыворотке можно охарактеризовать тем наибольшим разведением антигена, которое еще способно вызвать реакцию преципитации с данной сывороткой это раз-ведение называется титром преципитинов. [c.121]

При положительной реакции на границе раздела между слоями антигена и иммунной сыворотки появляется беловатое опалес-цирующее кольцо, видимое невооруженным глазом. В случае интенсивной реакции преципитации это кольцо появляется уже через несколько минут, и фрагменты преципитата могут осесть на дно пробирки. [c.124]

Фиг. 23. Схема размещения исследуемых образцов в агаровом геле при постановке реакции преципитации по Ухтерлони [17] (подробное описание см. в тексте).

Аминокислоты, пептиды и белки (1976) -- [ c.16 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.157 ]

Биологическая химия Издание 3 (1960) -- [ c.327 ]

Биологическая химия Издание 4 (1965) -- [ c.344 ]

Химия и биология белков (1953) -- [ c.329 , c.342 , c.343 , c.349 ]

Биохимия Издание 2 (1962) -- [ c.38 ]

Иммунология (0) -- [ c.527 , c.528 ]

Что если Ламарк не прав Иммуногенетика и эволюция (2002) -- [ c.70 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология