Электрофорез матричный

Обычная анионообменная хроматография оказалась непригодной для очистки РНК, содержащих более 100—150 нуклеотидных остатков. Поэтому рибосомальные и матричные РНК обычно разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном или агарозном геле. К достоинствам этого метода относится высокая скорость процесса и высокая разрешающая способность по отношению к одноцепочечным молекулам, различающимся по своим размерам. Аффинная хроматография основана на том, что высокая степень специфичности может быть достигнута за счет гибридизации или химических взаимодействий между молекулами РНК, находящимися в растворе, и соответствующими соединениями, ковалентно связанными с твердым носителем. [c.176]

Другим эффективным денатурирующим агентом является деионизованный формамид. Если РНК, растворенные в 98%-ном формамиде, подвергнуть электрофорезу в низкопроцентных полиакриламидных гелях, также содержащих 98%-ный формамид, то подвижность РНК будет определяться размерами их молекул [89, 90]. С помощью этого метода было осуществлено как аналитическое, так и препаративное разделение многих матричных и рибосомальных РНК [78] (рис. 10.7). [c.179]

Что касается РНК, то после электрофореза в геле агарозы с добавлением 6 М мочевины всеми другими способами она элюируется очень плохо. Данный же способ дает высокий выход очень чистой РНК, обладающей, например, высокой матричной активностью. Последнее обстоятельство указывает на полноту очистки от агарозы, которая, как известно, ингибирует трансляцию РНК- [c.157]

Метод гель-электрофореза всякий раз ставит экспериментатора перед выбором либо, используя концентрированный гель, добиться высокого разрешения нуклеиновых кислот с относительно небольшой молекулярной массой, либо в геле низкой концентрации с невысоким разрешением разделить высокомолекулярные соединения. Поэтому для каждого конкретного набора молекул приходится принимать некое компромиссное решение. Верхний предел по молекулярной массе можно увеличить путем уменьшения концентрации сшивающего агента и (или) суммарной концентрации геля. Такой подход оказался эффективным в случае выделения и анализа матричных и рибосо- [c.178]

Рис. 10.6. Разделение матричных РНК из РзаттесЫпиз, кодирующих гисто-новые белки, с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Использованы препараты полирибоеомальной РНК, меченной тритием по остаткам уридина (радиоактивность -3-10 имп.1мин . Детектирование с помощью флюорографии [55] (с разрешения авторов).

Внося в четыре инкубационные смеси четыре различных ди-дезоксирибонуклеозидтрифосфата, получают группу из четырех наборов соответствующих фрагментов. Денатурацией их отделяют от матричной ДНК, которая в дальнейшем участия не принимает, поскольку нерадиоактивна. С помощью электрофореза, как и в методе Максама и Гилберта, получают четыре лестницы полос. При их сопоставлении можно определить нуклеотидную последовательность новосинтезированной комплементарной нити, а тем самым и исходной, секвенируемой нити ДНК. [c.134]

Был провёден матричный синтез РНК с помощью РНК-полимеразы Е. соИ. Один из рибонуклеозидтрифосфатов был радиоактивно меченным по фосфору. В качестве матриц использовали рестрикты ДНК (или ДНК разрезали рестриктазами после окончания синтеза РНК). Процесс транскрипции ограничивали по времени и концентрации трифосфатов таким образом чтобы новосинтезироваиная меченая РНК содержала не более 100— 200 нуклеотидов. Тройной комплекс транскрипции подвергали электрофорезу в пластине 1,2%-ного геля агарозы размером [c.147]

Им были разработаны изящные и чрезвычайно тонкие методы, позволяющие анализировать количество РНК и белка в отдельной изолированной клетке, а также определять качественный состав РНК с помощью электрофореза на шелковых нитях. В опытах по обучению крыс Хиден и его сотрудники обнаружили, что количество РНК в тех нейронах крыс, которые предположительно имеют отношение к данной форме обучения, увеличивается, а ее качественный состав (содержание разных нуклеотидов) изменяется. Хиден пришел к выводу, что в ходе обучения активируются новые, ранее молчавшие гены, которые синтезируют новую матричную РНК (мРНК), являющуюся носителем памяти-молекулой памяти. Благодаря ее синтезу, т.е. функционированию в соответствующих нейронах неких новых участков ДНК, определенные поведенческие навыки запечатлеваются в мозгу животных. Важная роль в хранении следов памяти приписывалась так называемому белку 8-100. количество которого также возрастало в ходе обучения. [c.239]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология